检验医学专业实验I 实验笔试整理(For J检验专业 大二下学期).doc

寄生虫部分蛔虫：受精卵：椭圆形，棕黄色，卵壳厚，内含物卵细胞，外被蛋白质膜 未受精卵：狭椭圆形，卵壳薄，内含屈光颗粒，蛋白质膜较薄，没有蛔甙所以有一定的变形性鞭虫：成虫：活体呈肉色，外形略似马鞭，前端细长，后端粗大，细部约占体长3/5虫卵：棕黄色，比受精蛔虫卵小，卵壳较厚，两端有透明盖塞蛲虫：虫卵：略呈椭圆形，左右不对称，一侧较扁平，一侧隆起，无色透明。卵壳较厚，初产卵有蝌蚪胚胎。钩虫：虫卵：两种钩虫卵相似，稍带长椭圆形，两端较圆，壳薄，无色透明。一般含24个卵细胞，卵壳与细胞之间间隙明显。十二指肠钩虫/美洲钩虫：体形 前端与尾端均向背面弯曲呈C形/前端向背面弯曲，尾端向腹面弯曲呈S形；口囊 腹侧前缘有2对钩齿/腹侧前缘有1对半月形板齿；交合伞 略圆/略扁似扇形；背辐射 由远端分二支，每支又分三小支/由基部分二支，每支又分二小支班氏微丝蚴/马来微丝蚴 体态（柔和弯曲较大/硬直大弯上有小弯）头间隙长宽比 较短1:1或1:2/较长2:1；体核（圆形或椭圆形，各核分开，排列整齐，清晰可数/椭圆形大小不等，排列紧密，常互相重叠，不易分清）尾核（无/有2个）旋毛虫囊包呈纺锤形或柠檬形，其纵轴与肌纤维平行。一个囊内通常含有12条卷曲幼虫。肝吸虫：成虫：雌雄同体。背腹扁平前端稍窄，后端钝圆，状似葵花籽。口吸盘位于体前端，略大于腹吸盘，后者位于虫体前1/2处。雌雄生殖器官有高度分支的睾丸1对，前后排列于虫体后端1/2处。雌性生殖器官有卵巢1个，分叶状，位于睾丸之前。受精囊在睾丸和卵巢之前，呈椭圆形，与输卵管相同。虫体两侧为卵黄腺。虫卵：形似芝麻，黄褐色，一端较窄且有卵盖，盖周围的卵壳增厚形成肩峰另一端疣状突起，卵内含成熟的毛蚴。肺吸虫：成虫：虫体卵圆形，较肥厚，腹面扁平，背面隆起。活虫红褐色，半透明，因伸缩后体形多变。口吸盘与腹吸盘大小相似，腹吸盘位于虫体中部稍前。雌雄同体，睾丸两个分支，左右并列，约在虫体后1/3处，卵巢一个，叶状，与子宫并列于腹吸盘后。虫卵：呈金黄色，椭圆形，两侧多不对称，前端较宽，后端较窄，卵盖明显而稍倾斜。卵内有一个卵细胞和十余个卵黄细胞，卵细胞常被卵黄细胞所遮而不易清晰看到日本血吸虫：虫卵略成椭圆形，淡黄色，无盖壳旁有一短侧棘，排出的虫卵多为成熟卵布氏姜片吸虫：虫卵为椭圆形，淡黄色，卵盖不明显，乱盖薄，卵内含一个卵细胞和数十个卵黄细胞猪牛带绦虫比较：体长（24米/48米）节片（7001000节，薄，略透明/10002000节，肥厚，不透明）头节（球形，有顶突和小钩/近方形，无顶突和小钩）孕节（子宫分支不整齐，每侧约713支/子宫分支整齐，每侧约1530支）囊尾蚴（头节有小钩/头节无小钩）绦虫虫卵：卵壳薄且透明，呈球形呈卵圆形，在光镜下呈放射状的条纹，胚膜内为六钩蚴幼虫（猪囊尾蚴）呈囊状，半透明，乳白色，囊内充满透明液体，有小米粒大小的白色，为凹入囊内的头节。细粒棘球：成虫是绦虫中最小的虫种之一，由头颈部，幼节，成节及孕节各一节组成，幼虫：圆形囊状体，似水球溶组织阿米巴：滋养体：内外质分界清楚，外质透明，内质颗粒状，内含一个球形泡状核，核膜内侧缘有一层排列整齐，大小均匀的核周染色质粒，核仁小且居中，其与核膜之间有纤细的网状核纤丝连接，在有症状患者组织中分离的滋养体内质中常含有被吞噬的红细胞。包囊：球形，有块状糖原及短棒状的拟染色体，拟染色体的形态具虫种鉴别意义。成熟包囊有4个核，糖原块和拟染色体多已消失，核为泡状核，与滋养体相同但稍小结肠内阿米巴：滋养体：内外质界不清，包质含颗粒、空泡和食物泡，多含细菌，无红细胞核仁大而偏位，核周染色质粒分布不均。包囊：有18个核，核与滋养体相似，未成熟包囊包质内可见糖原泡和草束状拟染色体蓝氏贾第鞭毛虫：滋养体;呈倒置梨形，腹面前半部向内凹陷形成吸盘，借此吸附在宿主肠黏膜上，有4对鞭毛，按其位置分别为前侧鞭毛，后侧鞭毛，腹鞭毛和尾鞭毛各一对，依靠鞭毛的摆动可活泼运动。经铁苏木素染色后可见有一对并列在吸盘底部卵圆形的泡状细胞柱包囊：为椭圆形，囊壁较厚，碘液染色后呈黄绿色，囊壁与虫体之间有明显的空隙，未成熟的包囊有2个核，成熟包囊有4个核多偏于一端阴道毛滴虫:滋养体：梨形或椭圆形，无色透明，有折光性，活动性强，具4根前鞭毛和1根后鞭毛。轴柱纤细透明，纵贯虫体。自后端伸出使虫体呈梨形，因富于黏性。间日恶性疟原虫比较：环状体（细胞质淡蓝色，或环状，较大，约为红细胞直径的三分之一，核一个，红色，通常红细胞内只寄生一个疟原虫，偶尔两个/环纤细约为红细胞直径的五分之一，一个核，两个核也常见，红细胞可含两个以上原虫，虫体常位于红细胞的边缘）滋养体（虫体由小渐大，活动显著，故虫体形状不规则，虐色素黄棕色，小杆状/体小结实，不活动，虐色素集中一团，黑褐色，原虫此时开始集中在内脏毛细血管，外周血中不易见到）雄配子体（虫体是圆形,略大于正常红细胞,胞质蓝而略带红色,核疏松,淡红色,常位于中央,虐色素分散/两端钝圆,胞质蓝而略带红色,核疏松,淡红色,位于中央,虐色素黑褐色,小杆状,分布于核周较多）雌配子体（圆形占满胀大的红细胞，胞质蓝色，核结实，较小，深红色，偏于一侧，虐色素分散/新月型，两端较尖，胞质蓝色，核致密，深红色，位于中央，虐色素黑褐色，分布于核周围）刚地弓形虫：速殖子（滋养体）呈方形或新月型。一端较尖，一端较钝。包囊：圆形或椭圆形，外被一层富有弹性的坚韧囊壁。囊内含有数十个至数百个缓殖子。疥螨：近圆形，背面隆起，乳白色，体表有许多波形皮纹。背面有圆锥形的皮棘，成对的粗刺、刚毛和长鬃。颚体短小，位于前端。螯肢1对，位于背面呈钳状，有小齿，适于啮食宿主皮肤的角质层组织。触须1对，由3节组成，上有刚毛。足4对，粗短呈圆锥形，前两对足与后两对足相距较远。雌雄螨前两对足的末端均有长柄的吸垫，具有吸盘功能。后两对足雌雄不同，雌虫足末端为刚毛，而雄虫第四对足末端是吸垫。雌螨的产卵孔位于足体的中央，雄螨的生殖区位于第四对足之间略后出。肛门均位于躯体后缘正中。后气门：舍蝇：“D”型；厮螯蝇：似三角形；其余似圆形。薄血膜的制作：取1滴血于1张洁净的载玻片上，选1张边缘平整、光滑的载玻片做推片，用左手拇指和中指夹持其两端，将推片的边缘中点与与血滴接触，并与载玻片呈3045度夹角，待血滴沿推片边缘的两侧展开后，立即由右向左迅速推成薄血膜。理想薄血膜要求红细胞均匀地铺成一层，无裂痕，其末端凸出呈舌尖形。注意：推片时用力和速度要均匀，不能中途停顿或重复推片，以免造成血膜断裂或厚薄不均。如血量多，夹角宜小；取血量小，则夹角可大些。厚血膜的制作：用推片的一角接触刺血点上的血滴，取血2滴，置载玻片上，并从里向外旋转涂片，使成直径0.8cm大小的圆形血膜，厚薄要均匀，然后平置桌上，待自然干燥。厚薄血膜制作时：用目测法将载玻片从右到左分成3格，厚血涂在第二格中央，薄血膜涂在第3格中央，第一格用于贴标签。用姬氏染液或瑞氏染液染色后镜检。优缺点：薄血膜涂片经染色后原虫形态结构完整、清晰，可辨认原虫的种类和各发育阶段的形态特征，适用于临床诊断，但虫数较少容易漏检。 厚血膜涂片在制作过程中原虫皱缩、变形，而且红细胞溶解，鉴别有困难，但原虫较集中，易被发现，熟识其形态特征后可提高检出率。 因此最好一张玻片上同时制作厚、薄血膜，常先检查厚血片刻较快找到疟原虫确立诊断，再检查薄血片确定虫种。 卫生检验部分 三氧：溶解氧、耗氧量、生化需氧量。三氮：氨氮、亚硝酸盐氮、硝酸盐氮氨氮： 纳氏试剂比色法。原理：水中氨+纳氏试剂【碱性条件】黄至棕色胶体络合物，其颜色深浅与氨氮含量成正比。试剂：酒石酸钾钠掩蔽剂，掩蔽剂溶液中易生成沉淀的离子4注意事项：水中氨氮不稳定，应尽快分析。标准管加氨氮标准使用液后，必须先加无氨水稀释再加其他试剂，否则会产生浓厚沉淀而无法测定硫代硫酸钠除去余氯洗涤过后比色管中的剩余水量仅对样品管有影响。亚硝酸盐： 重氮化偶合比色法原理：亚硝酸盐+对氨基苯磺酸起重氮化作用，然后再与盐酸甲-萘胺起偶合反应，生成紫红色偶氮燃料，进行比色测定。注意事项：有色金属离子干扰测定，用氢氧化铝絮凝法过滤除去悬浮物。重氮化最佳PH1.4，偶合化最佳PH2.0-2.5，用醋酸钠缓冲溶液来维持。显色速度与温度有关，温度低于15时，可适当加热，染料的稳定性也与温度有关，温度低，显色慢，褪色慢，温度高，显色快，褪色快。试剂加入顺序严遵守操作步骤，试剂的加入要间隔合适的反应时间（对氨基苯磺酸3min,醋酸钠缓冲溶液，盐酸甲-萘胺溶液，摇匀放置10min）耗氧量： 酸性高锰酸钾滴定法。原理：水样中还原性物质在酸性条件下，加热至沸时被高锰酸钾所氧化，过量的高锰酸钾用草酸还原，再用高锰酸钾标准溶液回滴过量的草酸，根据高锰酸钾的消耗量，求得耗氧量。试剂：高锰酸钾氧化剂滴定剂。操作：锥形瓶的处理：去除所有还原性物质，注意处理范围要广，剩余高锰酸钾的量要尽可能的少。水样处理：V1用来测定水中有机物的消耗高锰酸钾的量；V2用来标定高锰酸钾的浓度。计算。注意事项：测定要严格按照操作条件进行（酸性，加热十分钟，氧化剂）反应要维持一定的酸度，以H+0.43m为宜，太高高锰酸钾自动分解，过低反应速度太慢。酸度只能用硫酸调节水样消耗高锰酸钾为原加入量的一半左右要测平行量（有机物种类不同，在水中分布也不同）cl-浓度大于300mg/L时有干扰。本实验的污染主要来自滴定管加热10min:是通过在即将到达10min时立即加入草酸溶液来控制的所得的耗氧量实际为10min内水样的耗氧量总铬：碱性高锰酸钾法原理：在碱性条件下，用高锰酸钾将水样中的cr3+氧化为cr6+,其与二苯碳酰二肼反应生成紫红色络合物，进行比色定量。操作：样品制备：水样50ml,玻璃珠2-3颗+氢氧化钠调节PH至中性+高锰酸钾至紫红色煮沸+乙醇去除高锰酸钾加热+MgO+硫酸至中性过滤转移洗涤定容。注意事项：cr6+易被吸附，所以Mg(OH)2沉淀应尽可能少造成cr6+损失和污染的因素：样品保存期要尽量的短，容器内壁要光滑，否则易吸附，容器不能用刷子刷，不能用铬酸洗。减少cr6+的损失要注意：转移，过滤，洗涤，定容的过程，玻棒，锥形瓶，沉淀要用热水洗2-3次。用水量用10-20ml，遵循少量多次原则，注意用水量，影响氧化还原的因素：酸度，温度。生成的沉淀与加入的高锰酸钾量有关，而高锰酸钾的量是通过MgO的量来控制油脂酸价 酸碱滴定法原理：用氢氧化钾标准溶液滴定植物油中的游离脂肪酸，每克植物油消耗氢氧化钾的质量称为酸价，单位为mg/g. 试剂：乙醚乙醇混合液。乙醚溶解油脂，乙醇促进水与有机溶剂的混合注意：该实验测定的物质粘度较大，因此在吸取时，要使停留时间长一些，以确保所取样品的量使用碱式滴定管时要使头部充满滴定剂粉尘浓度：滤膜质量法原理：是一定体积的含尘空气，通过已知重量的滤膜，将粉尘阻留在滤膜上，根据采样前后的质量差，即可计算出空气中粉尘的浓度注意事项：滤膜为聚氯乙烯滤膜，具有静电性，憎水性，耐酸碱，阻力小，阻留率高，重量轻，韧性好，可溶于有机溶剂，不耐高温。正确辨别滤膜正反面，将滤膜装入采样盒内。采样前要检漏采样高度1.5m，记录采样点的气温，以便换算成标准状态下的采气体积。采样量为1-20mg过重会使样品损失（阻塞孔径，阻力增大，粉尘易脱落）过少则增加称量误差采样完毕，将采样的滤膜折好，放入采样盒内，带回实验室。采平行样。SO2:四氯汞钠-盐酸副玫瑰苯胺比色法原理：SO2被四氯汞钠吸收后，形成稳定的络合物，在与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成玫瑰紫色化合物，比色定量。注意事项：加试剂时要沿管壁加使样品测量值偏低的原因有a，采样时使用的抽气机中的保护管漏气b，测量时样品取样少，c，操作者自身操作失误粉尘分散度：滤膜溶解涂片法。注意事项：所有玻璃器皿保持清洁无尘加乙酸丁酯溶解滤膜，要用玻璃棒轻轻搅拌使之成为均匀的粉尘混悬液要做空白对照测量时不得随意寻找视野，（左右，上下）遇长径测长径，遇短径测短径不适用于可溶于有机溶剂中的粉尘和纤维状粉尘金属毒物的快速测定（砷、汞）原理：金属cu在盐酸酸化的样品溶液中，能使砷 汞还原成单质状态，或生成铜合金，沉淀于铜丝表面，显示出不同颜色和光泽，从而初步判断这些金属是否存在。注意：观察铜丝的颜色，光泽（红色银白色）本实验只可作为预实验，而不能作为确证试验。甲醇： 品红亚硫酸比色法原理：甲醇经高锰酸钾氧化成甲醛后，与亚硫酸品红作用生成蓝紫色化合物，与标准比色（过量的高锰酸钾及在反应中产生的MnO2,在硫酸环境中用草酸还原）注意：显色灵敏度随乙醇浓度的改变而改变，以体积分数为6时的乙醇浓度显色灵敏度最高，因为最后要定容至5ml所以乙醇含量为0.3ml（乙醇浓度：30，取1.0ml，40，取0.75ml）加入品红亚硫酸溶液后，混匀，要静置30min：一方面是反应完全，另一方面是消除其他物质的干扰，（其他醛类与之反应生成的化合物使其褪色）样品本身含甲醛，则实验值将因为消除本身甲醛的影响，可另取一管不加高锰酸钾来进行比较。加入草酸硫酸时，将产生热量，应当冷却后，再加入品红亚硫酸溶液，实际是甲醛加品红亚硫酸紫色化合物，通过测定吸光度得到的是甲醛的含量，又因为甲醛是甲醇在磷酸条件下被高锰酸钾氧化的产物，；因此即可知道甲醛的含量，最终结果应换算成60酒无甲醛的乙醇的作用4计算，甲醇含量（g/100ml）=m/(v1000)100.报告结果=60/度数甲醛含量蛋白质：凯氏定氮法原理：在样品中加入硫酸和催化剂，在加热的条件下使蛋白质氧化分解，使待测组分中的氨以离子形式留存于溶液中，供进一步检测，分解出的氨与硫酸结合 形成硫酸铵，然后在碱性条件下蒸馏，使氨游离，并用硼酸吸收，最后用盐酸标准溶液滴定生成的四硼酸铵，根据盐酸标准溶液用量计算氮含量，再乘以蛋白质系数，试剂：硫酸铜催化剂;硫酸钾提高沸点；浓硫酸去除有机物，并使氮转化为硫酸铵，操作：消化，蒸馏，滴定，计算。实验观察：消化加入浓硫酸后，牛肉先似变热，颜色变为褐色，再为烧焦状颜色偏黑。之后就碳化为黑色，产生大量泡沫，加热过程中，先用小火，待泡沫消失，样品完全碳化后 改用大火，溶液颜色从褐色酱油色黄色黄绿色亮绿色蓝绿色。溶液也从先前的浑浊到最后的澄清，蒸馏：加入混合指示剂后，吸收瓶的的溶液呈微红色，蒸馏过程中逐渐变绿变蓝，滴定：溶液有蓝色变为蓝紫色。注意：加热过程中要不断摇晃烧瓶，以使反应完全，若有剩余残渣,应用水冲然后继续加热，用水冲洗的原因是，水的沸点低，极易被蒸发加热时应使凯氏烧瓶离电炉越远越好，加热时会在瓶内形成酸雾。酸雾在瓶中回转，原离电炉的一侧温度较低，使得酸雾在接近瓶口时，就可流回到瓶中，不易溢出。蒸馏时，蒸汽发生要充分，均匀。中途不得停火断气，易倒吸，加碱量要够，动作要快。防止氨损失，加液用水封蒸馏时加液顺序不能颠倒，应为：吸收液样品氢氧化钠。冷凝管的插管应该在吸收液液面之下蒸馏前的洗涤要冷却，并将所有夹子打开，以使仪器内外压平衡，蒸馏最后的冲洗，内壁：蒸馏10min后，使冷凝管下端脱离液面，再继续蒸馏一分钟，外壁：蒸馏结束后，用少样蒸馏水冲洗冷凝管下端。消化中加试剂及样品时 要放入烧杯底部，加热时要不断摇晃，要使消化完全，转移也要完全滴定终点：盐酸标准液变为蓝紫色 分子生物学及其检验部分什么是感受态细胞？转化实验中影响转化效率的环节有哪些？ 受体细胞经过特殊方式处理后，使细胞膜的通透性发生变化，成为能容许多种外源DNA的载体分子通过，这种细胞称为感受态细胞理论依据：细菌处于0CaCl2溶液中，会膨胀成球状，细胞膜的通透性发生转化变化，转化混合物中的质粒DNA 形成抗DNasse的羟基钙磷酸复合物黏附于细胞表面成功筛选出阳性转化子的条件？（质粒、受体细菌、筛选环境）1、细菌生长状态，注意生长状态和宽度尽量使用对数生长期细胞2、所有操作均处于无菌条件和冰上进行，所有器皿必须干净3、经氯化钙处理的细胞，在低温状态下一定时间内转化率 随时间推移而增加 24h是最高值随后下降4、化合物及无机离子的影响，在钙离子基础上联合其他二价金属离子可提高转化率试述PCR技术的主要原理及PCR反应体系的构成。以及各体系作用。原理：根据DNA变性与复性的原理，在模板DNA、引物、dNTP、DNA聚合酶作用下发生酶促反应 变性-退火-扩增反应体系：标准的PCR反应体系 寡核苷酸引物，DNA模板，Taq酶，dNTP及含有必需离子的缓冲溶液模板DNA 0.12 ug；引物各0.11.0 umol/L；4种dNTP混合物各200 umol/L；Taq DNA聚合酶2.5u；Mg2+1.5-2.0 mmol/L缓冲液：提供酶催化的离子环境。dNTP：提供DNA链延伸的原 料。Mg2+：激活DNA聚合酶。水。引物：结合模板，提供延伸的起点。模板：PCR扩增的对象。Taq酶：DNA聚合酶什么是限制性核酸内切酶？影响酶切效率的因素有哪些？限制性核酸内切酶是可以识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶，简称限制酶。DNA的纯度 DNA的甲基化程度 酶切消化反应温度 DNA的分子结构 溶液中离子浓度及种类 缓冲液的PH值基因组DNA提取中，酚/氯仿、无水乙醇、70%乙醇的作用是什么？EDTA为二价金属离子螯合剂，可抑制DNA酶的活性，同时还能降低细胞膜的稳定性；SDS为阴离子去污剂，能引起细胞膜降解，乳化脂质和蛋白质并沉淀，同时还有降解DNA酶的作用； 无DNA酶的RNA酶，可有效水解RNA；蛋白酶K起水解蛋白质的作用，可消化DNA酶、DNA上的蛋白质，同时也有裂解细胞的作用。酚是很强的蛋白质变性剂，也可抑制DNA酶活性；氯仿能加速有机相和水相的分离；异戊醇则可减少在抽提过程中由于蛋白变性产生的大量气泡。简述琼脂糖电泳的基本原理及其作用。原理：以琼脂糖凝胶为支持介质，凝胶内部为微小的刚性小孔。在碱性溶液中，带负电荷核酸向正极泳动。不同核酸根据分子量，分子构象实现分离作用：判断扩增片段的大小，回收扩增片段琼脂糖电泳分离核酸时核酸大小如何判断？琼脂糖凝胶就像是一个网筛一样，里面有很多的孔，分子可以从孔中穿过去的。核酸分子有大有小，小的分子在凝胶中跑得比较快，大的分子就跑得比较慢，经过一段时间的电泳之后，凝胶上就会出现位置不一的条带。将条带与已知分子大小marker相比较，就可以知道核酸分子的大小了。琼脂糖电泳分离核酸的基本原理作用?简述显色过程中sybrgreen的作用及原理。原理：以琼脂糖凝胶为支持