丙泊酚血药浓度测定.doc

分子式： C12H18O。分子量：178.274血浆丙泊酚浓度高效液相色谱法（HPLC）测定方法色谱条件 色谱柱为Kromasil C18 (5m, 4.6mm250mm, 柱号：KR- 002545)；柱压：90100kgcm-1；柱温：40，流动相：乙腈-水（70:30）；流速：1mlmin-1；荧光激发波长为276nm；发射波长310 nm；内标物：麝香草酚；定量方法：峰面积法。高效液相色谱法测定中血浆内源性物质对测定无干扰，内标麝香草酚与丙泊酚完全分离, 内标麝香草酚的保留时间约为7.1 min，丙泊酚保留时间约为11.1min。样品分离色谱图见图1。2BA2DC211图1 丙泊酚和麝香草酚的高效液相色谱图A 空白血浆 B 丙泊酚的标准溶液C 丙泊酚和麝香草酚的标准溶液 D 样品血浆1 麝香草酚 2 丙泊酚丙泊酚标准溶液配制 精密称取丙泊酚对照品10mg,并加入100ml的量瓶中,用乙腈溶解并稀释至刻度,摇匀后即可得浓度为100 mgL- 1的丙泊酚标准储备液。精密量取丙泊酚对照品储备液1ml，加至10ml量瓶中用乙腈稀释至刻度,摇匀,配成浓度为10mgL-1的丙泊酚对照品标准工作液。麝香草酚标准工作液配制 精密称取麝香草酚10mg,加入100ml的量瓶中,用乙腈溶解并稀释至刻度,摇匀后即可得浓度为100mgL-1的麝香草酚标准工作液。血药浓度测定 量取待测的肝素抗凝血浆1ml加入试管中，并准确加入内标物即100mgL-1麝香草酚标准储备液100l ,再加入PH6.0、浓度为0.1mol.l-1的磷酸二氢钾缓冲溶液100l，摇匀混合后,加入5 ml环己烷有机溶剂,立即漩涡混和3min。再在低温离心机中3000r.min-1离心20min,静置分层，取4ml上层液移至另一尖底试管中，在50下用N2 吹干，用100l 流动相溶解,取20l进样分析。？乙腈-水（70:30）麝香草酚磷酸二氢钾缓冲液PH6.0、浓度为0.1mol.l-1环己烷标准曲线制备 取6支10ml具塞试管，并分别加入1ml空白血浆，再精密量取适量的丙泊酚标准溶液，使其血药浓度分别相当于0.04g.ml-1，0.1g.ml-1，0.25g.ml-1，1g.ml-1，5g.ml-1，25g.ml-1的6种浓度的含药血浆（10mgL-1：4l、10.1l、25.64l、111.1l、1000l，100 mgL- 1：333.3l），取上述含药血浆各1ml，按上述的血药浓度测定方法进行操作，以丙泊酚对内表物的峰面积比（X）与丙泊酚的质量浓度(g.ml-1)的进行线性回归。得丙泊酚在0.0425g.ml-1浓度范围内线性回归方程为Y=1.1679X-0.0025，相关系数r=0.9979，见图2图2 标准曲线和线性方程回收率与精密度实验提取回收率 在1ml空白人血浆中准确加入适量的丙泊酚标准溶液，分别配制成0.1g.ml-1，1g.ml-1和25g.ml-1低、中、高3种质量浓度的丙泊酚标准血样（10mgL-1：10.1l、111.1l，100 mgL- 1：333.3l），经萃取后再加内标，测定其峰高比R1，同法测定不经萃取的标准丙泊酚溶液加内标的峰高R2，按R1/R2100%计算提取回收率，结果见表1.表1 血浆中丙泊酚提取回收率（，n=5）质量浓度（g.mL-1） 回收率/% RSD/%0.1 99.15 2.38 2.401 106.883.28 3.0725 98.284.49 4.58方法回收率 同上述方法分别配制浓度也为0.1g.mL-1，1g.mL-1，25g.mL-1三种浓度的丙泊酚标准血样各5份（10mgL-1：10.1l、111.1l，100 mgL- 1：333.3l），按上述血药浓度测定方法进行操作，将测定的丙泊酚峰高与内标峰高比带入标准曲线，求出测定药物浓度，用测定浓度/实际浓度100%公式求得方法回收率，见表2。表2 测定方法回收率 （，n=5）质量浓度（g.mL-1） 回收率/% RSD/%0.1 101.851.36 1.341 101.161.64 2.1425 100.011.74 1.74精密度实验 同上述方法分别配制浓度为0.1，1，25g.mL-1三种浓度的丙泊酚标准血样各5份（10mgL-1：10.1l、111.1l，100 mgL- 1：333.3l），按上述血药浓度测定方法进行操作。以上3种浓度的血浆样品分别于同一日内不同时间内测定，共计5次，根据同一浓度的不同时间点测得的数值，计算各质量浓度的日内变异系数，即为日内精密度；另在连续5日每日测定一次丙泊酚的质量浓度，根据所测得浓度计算日间变异系数，即为日间精密度，低、中、高三种浓度日内、日间变异均小于10%，表明该方法的精密度符合生物样品的分析要求。结果见表3。表3丙泊酚测定精密度（，n=5）浓度（g.mL-1） 日内精密度 日间精密度 RSD/%RSD/%0.1 0.100.02 1.86 0.100.01 2.26 1 1.030.04 1.36 1.010.02 3.1425 24.781.65 2.46 24.382.03 4.41灵敏度实验 精密取丙泊酚标准工作液用乙腈稀释不同浓度后进样，测得本方法测定丙泊酚最低浓度为0.01g. mL-1，灵敏度为1ng.ml-1。抗干扰实验 本实验研究表明，正常人无药空白血浆中内源性物质不干扰本测定。为考察临床麻醉中合并用药对本测定方法的影响,对全麻手术前和手术中的一些常用药物包括阿托品、瑞芬太尼、七氟烷、顺式阿曲库铵等分别作了实验分析,结果发现,在本实验条件下，这些药物均不出峰或远离测定峰,表明这些药物均不干扰丙泊酚的测定。同上述血药浓度的检测方法，依次对本实验的340个血样进行进样检测，求得各样品的丙泊酚和内表的峰面积，并计算出他们峰面积之间的比值，将其带入标准曲线方程即可求得各样品的血药浓度。3.2 两组病人丙泊酚的血药浓度丙泊酚静脉单次注射后，两组病人血药浓度下降均很快；两组病人的10min以内的丙泊酚血药浓度女性低于男性（P0.05）。见图5、6、7和表6。表6 两组病人不同时间丙泊酚的平均血药浓度(，n=10)时间（min）血药浓度（g.ml-1）男性组女性组19.931.388.511.2325.240.554.610.4133.790.353.380.3042.740.302.440.2461.690.181.500.17101.150.101.010.11150.830.090.760.10300.600.070.540.06450.410.040.390.05600.350.040.320.04900.260.040.240.051200.210.030.200.031800.140.040.130.022400.100.020.090.013600.0610.0120.0570.0187200.0280.0090.0260.010经两独立样本