高效液相色谱法测定密胺餐具中三聚氰胺单体迁移量.docx

实验技术与质控高效液相色谱法测定密胺餐具中三聚氰胺单体迁移量 吴富忠舟山市疾病预防控制中心，浙江 舟山316021摘要: 目的 建立一种快速、简便、高效的液相色谱 ( HPLC) 测定密胺 ( 仿瓷) 餐具中三聚氰胺单体迁移量的方法。方法 样品中三聚氰胺单体用 4% ( V / V) 乙酸浸提过滤后， 直 接 在 phenomenex Luna 5u C8 ( 2 )100A 柱上，以 0. 01 mol / L 乙酸铵 甲醇 ( 8 + 2，V / V) 为流动相进行分离，HPLC UV 检测器在 235 nm 测定，外标法定量。结果 取浸泡液直接过滤后进样测定，最低检出限为 0. 1 g / mL。按 1 cm2 加 2 mL 浸泡液计，对应的最低检出量为 0. 02 mg / dm2 ，回收率 98. 9% 106. 5% ，测定精密度 SD 在 1. 8% 8. 3% 。结论 该方法操作简单，检测灵敏度较高、干扰少、结果准确，适用于密胺 ( 仿瓷) 餐具三聚氰胺迁移量的测定。关键词: 高效液相色谱法; 密胺 ( 仿瓷) 餐具; 三聚氰胺单体迁移量中图分类号:文献标识码:文章编号:1007 0931 ( 2015) 02 0211 03446B三聚氰胺是一种禁止用于食品 ( 包 括 宠 物 食品) 和饲料 的 化 学 物 质。1994 年 国 际 化 学 品 安 全 规划署和欧洲联盟委员会合编的 国 际 化 学 品 安 全手册 第 3 卷和国际化学品安全 卡 片 说 明: 长 期或反复大量摄入三聚氰胺可能对肾与膀胱产生影 响，导致产生结石。动物急性、慢性试验证实长期 或反 复大量摄入三聚氰胺会 使动物肾脏出现结 晶1 3。这一结论与 2008 年 “三 鹿 奶 粉” 事 件 中 受害的 婴幼儿所表现的 症 状 ( 肾 结 石 ) 相 吻 合。因三聚氰胺对人体有害，为保护人体健康，避免出现类似事件，对 密 胺 ( 仿 瓷 ) 餐具中三聚氰胺迁 移量的测定显得十分重要。目前国家尚未制定密胺( 仿瓷) 餐具三聚氰胺的卫生标准检测方法，文献4 7 报道多为含高蛋白、高脂类的饲料及乳类 等样品中三聚氰胺测定，熊丽蓓等研究了用 4 种浸 泡液测定 密 胺 容 器中三聚氰胺的迁移 量8。本 文 根据 食 品 容 器、包装材料用三聚氰胺 甲 醛 成 型品卫生标准 ( GB 96902009 ) 规 定 的 三 聚 氰 胺迁移量浸泡条件9，参考相关资料4 8，建立密 胺 ( 仿瓷) 餐具中三聚氰胺 迁移量的高效液相色 谱测定方法。100位 自 动 进 样 器、 紫 外 检 测 器 及AgilentChemStation 工 作 站 ( 美 国 Agilent 公 司) ; 恒 温 水浴。试剂:4% ( V / V)0. 01mol / L 乙 酸 铵、甲 醇 ( 色 谱 纯 ) 、乙酸 溶 液、超 纯 水。三聚氰胺标准液 称取三聚氰胺标准品 ( 广州菲罗门科( 1 mg / mL) :学仪器有限公司，含量 99. 5% ) 0. 100 g，甲醇 水( 1 + 1，V / V)溶解并定容至 100 mL，4 保存。临用时用 4%( V / V)乙酸稀释成 100 g / mL 使用液。1. 2色 谱 条 件检 测 器:phenomenexUV;Luna检 测 波 长:5u C8 ( 2 )235 nm;色 谱 柱:100A 250 4. 6 mm;流动相: 0. 01 mol / L 乙酸铵 溶 液; 流 速 0. 8 mL / min; 柱甲醇( 8 + 2，V / V)温:1. 340 ;进样量 20 L; 停止时间:10 min。实验方法1. 3. 1 试 样 处 理样 品 清 洗 参 照 食 品 用 包 装材料及其制品的浸泡试验方法通则 (GB / T10。5009. 156 2003 )进 行样 品 浸 泡 按 餐 具 不同 形 状 选 择 不 同 方 法 。 空 心 制 品 如 碗 、 杯 等 加4 % 乙 酸 浸 泡 液 至 离 边 缘 5 mm; 扁 平 制 品 如 碟 、 盘 等 按 每 平 方 厘 米 加 2 mL 4 % 乙 酸 浸 泡 液 ( 有 深度的扁平制品参 照 空 心 制 品 浸 泡 ) ; 其 他 制 品 如 匙 、汤勺等全部浸入 4 % 乙 酸 浸 泡 液 中 ; 并 盖上 玻 璃 皿 。浸 泡 条 件 :60 2 h。1材料与方法1. 3. 2样 品 测 定取 冷 却 后 样 品 浸 泡 液 过 0. 451. 1仪器和试剂 仪器: Agilent1100 液相色谱系m 滤膜于进样瓶中进行分析。统，包括四元梯度泵、在线真空脱气机、柱 温 箱、1. 3. 3标准曲线绘制 准确吸取 100 g / mL 标准使用液 0、0. 25、1. 00、3. 00、5. 00 和 10. 00 mL，作者简介: 吴富忠，大专，副主任技师，主要从事理化检验工作通讯作者: 吴富忠，E mail: wfz2051264 163. com( V / V )乙 酸 稀 释 至 100 mL， 制 成 0、用 4%浙江预防医学 2015 年 2 月第 27 卷第 2 期 Zhejiang Prev Med，Feb 2015，Vol 27，No 2212度条件下是否有存在试样表面的气泡，如有应搅动0. 25、1. 00、3. 00、5. 00 和 10. 00 g / mL 的 标 准系列溶液，经 0. 45 m 滤膜过滤分别进样 20 L。以三聚氰胺含量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。清除;( 3)样品浸泡时在容器表面盖上一玻璃皿，防止浸泡液蒸发。本文试验了直径 6 和 10. 5 cm 容积分别约为 75 和 250 mL 的杯和碗，加入的浸泡液体积为 50 和 200 mL，不加盖 60 2 h 后，体积分1. 3. 4计算 3 1= C V 10 = C V 10 别 只 有 和43155mL， 蒸 发 率 达14. 00%和X ( mg / dm2 )SS22. 50% 。试验 表 明 容 器 口 径 越 大， 蒸 发 率 越 高。虽然可以采用补足体积的方法加以纠正，但在浸泡过程中随着浸泡液的蒸发，浸泡接触面积随之发生 改变，仍会影响测定结果的准确性。因此，建议采 用加盖表面皿防止蒸发。100式中， X: 三聚氰胺迁移 量， 单 位 mg / dm2 ;C:测定液中三聚氰胺含量，单 位 g / mL;V:试样浸泡液总体积，单位 mL;品表面积，单位 cm2 。S:与浸泡液接触的样色谱流动相 由于样品体系简单，本法省2. 1. 3去昂贵的离 子 对 试 剂，选 用 0. 01 mol / L 乙 酸 铵 甲醇溶液作 为 流 动 相，控 制 柱 温 40 、流 速 0. 8mL / min 对流 动 相 比 例 进 行 试 验。试 验 结 果 表 明，目标峰出峰时间随着甲醇比例的增加，稍有加快，但峰形改善明显，0. 01 mol / L 乙酸铵 甲醇的比例2结果与讨论2. 1实验条件选择2. 1. 1样品 浸 泡液接触面积测定 食 品 用 包 装材料 及 其 制 品 的 浸 泡 试 验 方 法 通 则 ( GB / T5009. 1562003)中对于扁平制品、除空心制品外( V / V)时，峰形较对称尖锐，且被在小于 85 15的其他不同形状的制品有相应的面积测定方法，但对于空心 制 品 如 碗、杯等采用体积 测 定10。修 订 后的 食 品 容 器、包装材料用三聚氰胺 甲 醛 成 型品卫生标准 ( GB 96902009 ) 对 计 量 单 位 进 行了变 更，从 mg / L 变 为 mg / dm2 。因 此， 对 空 心 制品需进行面积测定。根据空心制品的形状不同， 可以分为球冠形 ( 等于或小于半球) 、圆台形 ( 制 品底部 平 坦，圆柱形视作特殊的圆台形 ) 和 栯 圆 台形 3 种。其参考面积计算公式分别为: 球冠形为测成分能良好分离。参照资料7试验了 0. 01 mol / L辛磺酸钠离 子 对 缓 冲 液 乙 腈 体 系( 85 + 15，V /V) 为流动 相 在 流 速 0. 8 mL / min 时，三 聚 氰 胺 出峰时间约为 11. 7 min。本实验选用乙酸铵 甲醇溶液( 8 + 2， V / V)比 例， 出 峰 时 间 约 为 3. 9min。色谱图见图 1、图 2 和图 3。( h 0. 5)( 式中 r 为距圆口边 0. 5 cm 处内S = 2r半径，h 为制品底部到圆口的高度，0. 5 为浸泡 液至口边缘 的 距 离，单 位 cm) ; 圆 台 形 为 S = ( r1图 1 三聚氰胺标准色谱 ( 1: 三聚氰胺;2:乙酸)2+ r2 )( l 0. 5 )+ r2 ( 式 中 r1 为 距 圆 口 边 0. 5cm 处内半径，r2 为制品底部平面圆内半径，l 为制品底部到圆口的长度，0. 5 为浸泡液至圆口边缘的距离，单位 cm) ; 栯圆台形为 S = ( 2)( r1 +1 )+ 2 ( r2 + 2 ) ( l 0. 5 )+ r1 r2 ) ( 式中 r1为栯圆台制品底部栯圆短半径，r2 为栯圆台制品底部栯圆长半 径，1 为 距 栯 圆 台 制 品 圆 口 边 0. 5 cm处短半径，2 为距栯圆台制品圆口边 0. 5 cm 处长半径，l 为制品底部栯圆周边到栯圆台制品圆口边的长 度，0. 5 为浸泡液至圆口边缘的距离， 单 位cm，公式简化过程略) 。图 2 4% ( V / V) 乙酸 ( 标准空白) 色谱( 1 ) GB 969020092. 1. 2样品浸泡注意 事 项规定浸泡条 件 为 60 2 h。因 此，浸 泡 液 温 度 与图 3 样品 + 0. 2 g / mL 标准色谱恒温水浴温度均应预调到 60 ;( 2)注意在此温浙江预防医学 2015 年 2 月第 27 卷第 2 期 Zhejiang Prev Med，Feb 2015，Vol 27，No 22132. 1. 4标准系列 溶液酸度对出峰时间有明显影2. 5小 结 饲料及乳类中三聚氰胺 测 定 报 道 较响，为了使标准与样品的酸度保持一致，因此在配多，而以密胺为 原 料 制 成 的 密 胺 ( 仿 瓷 ) 餐 具 中三聚氰胺迁移量测定的方法目前较少。本方法结合 GB 96902009 强制 规 定，用 4% 乙 酸 浸 泡，通 过 实验条件优 化，用 0. 01 mol / L 乙 酸 铵 甲 醇 溶 液 代替昂贵的离子对试剂， 用 C8 柱分离测定密胺 ( 仿瓷) 餐具中 三聚氰胺迁移量， 方 法 操 作 简 单，检测灵敏度高，干扰少，结果准确，能为日常监督 监测提供技术支撑。另外，本文提出了空心容器浸 泡表面积的参考测定方法，具有实用意义。制标准工作系列时用 4%( V / V)乙酸稀释。2. 22. 2. 1线性范围与最低检出限线性范围 在本实验 条 件 下，三 聚 氰 胺 含量在 0 10. 00 g / mL 范围，标准溶液中待测物含量 C 与峰面 积 A 有良好的线性关系，其 相 关 系 数为 0. 999 4，回归方程为 A = 28. 557 6 C 0. 655 7。2. 2. 2最 低 检 出 限 取 浓 度 为 0. 20 g / mL 标 准溶液进样 20 L 分 析， 以 3 倍 信 噪 比( S / N = 3 )计算三聚氰胺的最低检出限为 0. 1 g / mL。若 按1 cm2 加 2 mL 浸 泡 液，对 应 的 最 低 检 出 量 为 0. 02mg / dm2 。2. 3 回收率与精密度试验 在已知三聚氰胺迁移量的仿瓷餐具中，加入不同量的标准液按 1. 3. 1 进 行样品液浸泡制备，使样品液的标准添加量分别含0. 20、2. 50 和 8. 00 g / mL 的三聚氰胺，再按本法 各测定 6 次，其回收率为 98. 9% 106. 5% ，精密 度 SD 在 1. 8% 8. 3% ，见表 1。参考文献1林祥梅，王 建 峰，贾 广 乐，等 三 聚氰胺的毒性 研 究 J毒理学杂志，2008，22 ( 3) : 216 218Baynes E， Smith G， Mason SE， et al Pharmacokinetics ofmelamine in pigs following intravenous administration J Foodand Chemical Toxicology，2008 ( 46) : 1196 1200Jennifer LB，onald EB，Jim E Estimating meat withdrawaltimes in pigs exposed to melamine contaminated feed using aphysiologically based pharmacokinetic model J egulatoryToxicology and Pharmacology，2008，51 ( 3) : 324 331汪辉，曹小彦，彭新凯，等 高效液相色谱 二级管阵列法测定高蛋白食品中的三聚氰胺 J 食品与机械，2007，23( 5) : 114 116王浩，刘艳琴，曹红，等 固相萃取与高效液相色谱联用测定宠物食品中三聚氰胺 J 分 析 化 学，2008，36 ( 2 ) :273张美金，林海丹，林峰，等 高效液相色谱法测定饲料和宠物食品中三聚氰胺含量 J 中国卫生检验杂志，2007，17( 12) : 2205 2206中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 GB / T 22388234表 1 样品加标回收率与方法精密度试验 ( n = 6)本底值( g / mL)加标量( g / mL)平均测定值 平均回收率