（应用化学专业论文）天然黄酮类磷脂复合物的制备及性质研究.pdf

摘要 黄酮类化台物广泛存在于植物中，它具有很好的药理学性质，其中包括抗兴 奋性、抗痉挛、抗组胺性、血管扩张、血小板聚集、改变毛细管脆性及渗透性等。 但它有个严重的局限性存在，就是其被局部或全身应用时，其活性成份只有少 量或极少量被吸收 但文献发现黄酮与大豆卵磷脂的复合物由于它们的亲脂性，通过口服和注射 或局部应用来增加疗效 本课题研究制备了天然黄酮类磷腊复合物，对其反应机理进行了分析和探索 并在此基础上较为系统和深入地研究了其化学特性主要包括天然黄酮类磷脂复 合物的制各、结构鉴定、及其形成机理、理化性能等方面的实验研究 在天然黄酮类磷脂复合物制备条件的系统研究中尝试制定了能合理、准确评 价黄酮类磷脂复合物制备条件的标准即黄酮的反应率，并用其考察反应溶剂、黄 酮与磷脂的投料比、反应物浓度、反应时间及其反应温度等条件对反应的影响， 采用红外光谱( i r ) 、核磁共振光谱( r ) 等对黄酮磷脂复合物进行了结构确 证在这部分研究中，对黄酮类磷脂复合物的核磁光谱和红外光谱的变化提出解 释从溺定的i r 光谱和n m r 光谱均到看到，复合物中属于黄酮部分的相应信号发 生了较大的变化；磷脂极性端的相应信号也发生变化，但其非极性端保持其原有 的特征这些变化表明，复合物的形成是黄酮分子和磷脂极性端之间相互作用的 结果 在黄酮磷脂复合物的理化性能的研究中，差热扫描分析( d s c ) 图谱则显示磷 脂复合物中磷腊部分的相变温度降低，表明经复合反应后磷脂分子脂肪链间的有 序性降低考察复合物于水及正辛醇中的溶解性能，试验结果表明，黄酮磷脂复合 物改善了黄酮在水及正辛醇中的表观溶解度，且脂溶性的提高明显大于水溶性的 改变 关键词：黄酮；磷脂复合物：制备；结构确定；理化性能 a b s t r a c t f l a v o n o i d si sac l a s so fs u b s t a n c e sv e r y w i d e l yd i s t r i b u t e di nt h ev e g e t a l k i n g d o m f l a v o n o i d sa r ek n o w n t op o s s e s san u m b e ro fr e c o g n i z e dp h a r m a c o l o g i c a l p r o p e r t i e sa m o n gw h i c ha r e t h ea n t i i n f l a m m a t o r y ，a n t i s p a s m o d i c , a n t i h i s t a m i n i c , p e r i p h e r a lv a s o d i l a t o r y ，p l a t e l e ta n t i a g g r e g a t i n g ，v a s o p r o t e c t o ri nt e r m so fa l t e r e d c a p i l l a r yf r a g i l i t ya n dp e r m e a b i l i y t t h ec o m p o u n d so ff l a v o n o i d sw i t hp h o s p h o l i p i d sa r ep e r f e c t l ya b s o r b e dt h r o u g h o r a la d i n i s t r a t i o na n di n c r e a s et h et h e r a p e u t i ce f f e c t i v e n e s so ft h ef l a v o n o i d sb o t hb y o r a la n dp a r e n t e r a lo rt o p i c a la d m n i s t r a t i o n ，t h a n k st ot h e i rl i p o p h i l ec h a r a c t e r i n p r e s e n ts t r d y , f l a v o n o i d s sc o m p l e xi sp r e p a r e dw i t hp h o s p h o l i p i d t h e r e s e a r c hf o c u s e so nt h ef o r m a t i o nm e c h a n i s mo ff l a v o n o i d p h o s p h o l i p i dc o m p l e xa n d i t sc h e m i c a la n db i o l o g i c a lc h a r a c t e r i s t i c s i no r d e rt op r o v i d eas c i e n t i f i cb a s i sf o rt h e d e v e l o p m e n ta n da p p l i c a t i o no ft h i ss t u d y , as e r i e so fe x p e r i m e n t sb a v eb e e nd o n ei n t h ep r e p a r a t i o n ，t h es t r u c t u r ec o n f i r m a t i o n ，t h ef o r m a t i o nm e c h a n i s m ，t h e p h y s i c o c h e m i c a lp r o p e r t y h o w e v e r ，as e v e r el i m i t a t i o ne x i s t sa n d i si m p u t a b l et ot h e p o o ro rv e r yp o o ra b s o r p t i o no ft h e s ea c t i v ec o n s t i t u e n t sw h e na d m i n i s t e r e dp e ro s ，o r b yt o p i c a la p p l i c a t i o n n e wa t t e m p t sa r em a d et ot h er e s e a r c ho ft h er e a c t i o nc o n d i t i o n so f f l a v o n o i d - p h o s p h o l i p i dc o m p l e x ，a n da r e a s o n a b l ec r i t e r i o no fa c c u r a t ee v a l u a t i o ni s e s t a b l i s h e d ，b yw h i c hs u c hf a c t o r s a s t e m p e r a t u r e ，t h er a t i o o ff l a v o n o i dt o p h o s p h o l i p i da n dt h ec o n c e n t r a t i o no fr e a c t a n t sa r ee x a m i n e d t h eo b t a i n e dc o m p l e xi sc o n f i r m e db yn u c l e a rm a g n e t i cr e s o n a n c e ( n m r ) s p e c t r o s c o p ya n di n f r a r e d ( i r ) s p e c t r o s c o p y i ni rs p e c t r u mo ft h ec o m p l e x ，t h e p e a k so ff l a v o n o i dm o v et oh i g hw a v e n u m b e r t h e r eh a sb e e nam a r k e dc h a n g eo f t h en m rs i g n a l so ft h ef u n c t i o n a lg r o u p si n v o l v e di nt h ef o r m a t i o n t h es i g n a l s b e l o n g i n gt of l a v o n o i da r es ob r o a d e n e dt h a tt h e yc o u l d n tb ed e t e c t e d a sf a ra s p h o s p h o l i p i di sc o n c e m e d t h e r ei sam o d e r a t eb r o a d e n i n go f a l l s i g n a l sa n d e s s i e n t i a l l yo n l yt h ea l k y lc h a i ns i g n a l sc a n b ed e t e c t e d t h es p e c t r o s c o p i c c h a r a c t e r i s t i c so ft h ec o m p l e xa r ea p p r e c i a b l yd i f f e r e n tf r o mt h o s eo ft h ei n d i v i d u a l c o n s t i t u e n t s ，i n d i c a t i n gap r o f o u n di n t e r a c t i o nb e t w e e nf l a v o n o i da n dt h eo l a re n do f p h o s p h o l i p i d as h i f to ft h em a i nt r a n s i t i o no fd p p ct oal o w e rt e m p e r a t u r ei so b s e r v e dj nt h e d s cs p e c t r u mo ft h ec o m p l e x w h e nt r e a t e dw i t hw a t e r t h ec o m p l e xa s s u m e sa m i c e l l a rs h a p e ，f o r m i n gs t r u t r u e sw h i c hm j i g h tr e s e m b l el i p o s o m e s ，b u tw h i c h ， h o w e v e r ，e x h i b i tc o n c e p t u a l l ya n dp r a c t i c a l l yf o u n d e r m e n t a ld i f f e r e n c e s i ti ss h o w n t h a tag r e a ti m p r o v e m e n to fa p p a r e n ts o l u b i l i t yo ff l a v o n o i d p h o s p h o l i p i dc o m p l e x b o t hi nw a t e ra n di nn - o c t y la l c o h 0 1 k e yw o r d s ：f l a v o n o i d ；p h o s p h o l i p i d ；c o m p l e x ；p r e p a r e ；s t r u c t r ec o n f i r m a t i o n p h y s i c o - c h e m i c a lp r o p e r t y i i 武汉理工大学硕士学位论文 第1 章前言 1 1 黄酮类化合物研究进展 黄酮类化合物广泛分布在植物中，几乎绝大多数植物都能合成黄酮类到目前 为止，已发现了2 0 0 0 多种黄酮类化合物，它们多数以甙的形式存在，少数以游离 形式存在黄酮类化合物的基本母核早期指2 一苯基色原酮，近年来泛指二个苯基 通过三碳链相连形成的化合物即具有c 。一c 3 - c 6 基本骨架“3 它们包括黄酮 ( f l a v o n e ) 、黄酮醇( f l a v o n 0 1 ) 、异黄酮( i s o f l a v o n e ) 、黄烷酮( f l a v a n o n e ) 、查 耳酮( c h a l c o n e ) 、口山酮( x a n t h o n e ) 、噢口弄( a u r o n e ) 、花色素( a n t h o c y n i d i i 3 ) 、 色原酮( c h r o m a r n e ) 等。黄酮类化合物具有多种多样的药理和生理作用。例如： 芦丁、槲皮甙、槲皮素能增强心脏收缩，减少心脏搏动数：黄芩甙、木犀草素等有 抗菌消炎作用。黄酮类化合物是中草药的主要有效成分之一。它们除作药用以外， 其中某些成分在植物体内的分布，还可作为植物特征0 1 。生物类黄酮是广泛分布 于植物中的一大类衍生化合物，目前已知的类黄酮化合物已有一千多种。它们包 括黄酮、黄酮醇、异黄酮、黄烷酮、查耳酮、花色素、色原酮等，其中食品中的 主要类黄酮有黄烷酮、黄酮、黄酮醇和异黄酮四类。生物类黄酮具有生物活性和 生理作用，特别是其抗氧化、抗自由基及抗癌、防癌的作用。3 。使生物类黄酮的 研究进入了一个新的阶段，掀起了生物类黄酮的研究、开发利用热潮，其在医药、 食品领域的应用具有广阔的前景m ，。 1 1 1 黄酮类化合物的概况 1 1 1 1 黄酮类化合物分布 黄酮类化合物是一类低分子量的广泛分布于植物界的天然植物成分，为植物多 酚类的代谢物，大多有颜色。从植物系统学的角度，植物体产生黄酮的能力与植 物体木质化性质密切相关。因此黄酮类化合物主要分布在维管束植物中，而在其 它较低等的植物类群中分布较少。而其中大多集中于被子植物中，如豆科、蔷薇 科等。在这些植物中此类化合物的类型最全，结构最复杂，含量也摄高。 11 12 黄酮类化合物特征 黄酮类化合物是色原烷或色原酮的衍生物。目前泛指由两个芳香环a 和b 通 武汉理上大学硕士学位论文 过中央三碳链相互作用连接而成的一系列化合物，其基本骨架具有c 。一c 。一c e 的 特点( 如图1 ) 。 3 o 4 3 5 图卜1黄酮类化合物分子结构式 4 5 1 天然的黄酮类化台物几乎在a 、b 环上均有取代基，一般是羟基、甲氧基和异 戊烯基等。在植物体中，黄酮类化合物因其所在组织不同，其存在状态也呈多样 化仨木质部多以苷元形式存在；在花、叶、果实等器宫多以糖甙形式 t 人体包括黄酮( f l a v o n e ) 、黄酮醇( f l a v o n 0 1 ) 、异黄酮( i s o f l a v o n e ) 、黄 溺( f l a v a n o n e ) 、查耳酮( c h a lc o n e ) 、双氢黄酮、花色甘等。 1 1 2 黄酮类化合物的生理活性 1 1 2 1 对消化性溃疡的保护作用 甘草黄酮对多种溃疡模型引起的药物性溃疡均有明显抑制作用，已作为消化性 溃疡药收入日本医药品集中，有抗渍疡作用的甘草黄酮是：l i q u i r i t i n ，l i q u i r i t i g e n i n ，l i c u r z i d ，i s o l i q u i r i t i n ，i s 0 1 i q u i r i t i g e n i n 等。李仁等从提取甘草 膏剩下的药渣中得到的富黄酮组分，已被我国批准为用于治疗溃疡病的二类药 物。最近，贾世山也证明甘草叶乙醇提取物中的富黄酮成分具有显著的抑制胃酸 过多的作用。索法酮是从豆科植物广豆根中提取的异戊二烯基查耳酮的衍生物， 能扩张胃粘膜血管，增加胃血流量，促进胃粘膜修复，增加胃组织内前列腺素含量 从而增加了防御机能，加快消化性溃疡病的愈合。宋必为“1 等研究表明金丝桃菅 ( h y p ) 对大鼠急性胃粘膜损伤的保护作用与c a ”拮抗有关。赵维中等研究表明h y p 呈剂量依赖性抑制小鼠胃粘膜损伤作用与抗氧化和促进n o 合成有关，银杏叶总 黄酮也在多种消化性溃疡模型上对胃溃疡损伤有显著保护作用。 对甘草根中富黄酮组分( g e ) 的保护肝脏作用，我国学者进行了较集中的研究， 它对四氯化碳和乙醇所致的小鼠肝损伤有保护作用，能显著降低四氯化碳所致的 武汉理工大学硕士学位论文 血清谷丙转氨酶和乳酸脱氢酶活性的升高，以及肝内丙二醇所致的肝脏坏死，但 对血清内酶的活性无抑制作用，也不减少正常小鼠血清中酶的活性。有实验表明 g f 对乙醇和四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用与其抗氧化作用有关。水飞蓟宾 ( s i l ) 的保肝作用已被药理实验证明。张俊平“1 等研究表明s i l 的保肝作用与抑 制肿瘤坏死因子( t n f ) 有关。临床资料表明s i l 对中毒性肝损害、急慢性肝炎、 肝硬化也有良好治疗作用。艾纳香总黄酮( c b s ) 对四氯化碳及多种自由基致原代 培养肝细胞损伤也有显著的保护作用。有研究表明c b s 的保护作用可能与其自由 基清除有关。其它一些黄酮类化合物如淫羊藿黄酮，黄芪素，黄芪苷能抑制肝组织 脂质过氧化，提高小鼠肝脏s o d 活性，减少肝组织脂褐素形成，提示对肝脏有保护 作用。 1 1 2 2 抗氧化及抗自由基作用 自由基( f r e er a d i c a l ) 是引起癌症、衰老、心血管等退变性疾病的罪恶之源嘲。 生物体内常见的自由基有，超氧阴离子自由基( o 。一- ) 、羟基自由基( 0 h ) 、烷氧 基自由基( r 0 ) 等，其产生过程为： o2 + o2 h2 02 - o h h2 0 o ：”形成最早，o h 作用最强，r 0 0 h 链锁反应循环最持久，一旦清除了o ，一，o h 的形成即中断，则可以从根本上预防体内形成过多的o h 和其它活性氧自由基， 达到防衰、抗癌、抗心血管病的目的。黄酮类化合物具有清除自由基和抗氧化的 能力，其作用机理在于它阻止了自由基在体内产生，可分为三个阶段：( 1 ) 与0 2 _ 畈 应阻断自由基的引发连锁反应；( 2 ) 与金属离于鳌合阻断自由基生成；( 3 ) 与脂质 过氧基( r 0 0 ) 反应阻断脂质过氧化过程“1 。 实验发现大白鼠服用广枣总黄酮( t f f c ) 后红细胞中s o d ，g s h px ，c a t 活性较 阿霉素组逐渐上升，丙二醛逐渐下降，说明t f f c 有清除自由基，抑制过氧化损伤 作用”1 。苦养麦麸皮类黄酮( t b f ) 与天然s o d 在清除氧自由基方面有着相同的 作用，在一定浓度的c u ”，0 2 一。m 9 2 御c d 2 + 存在下，其l _ s o d 活性分别有不同程度的 提高，表明t b f 有较强的l _ s o d 活性。采用电子顺磁共振技术，发现一枝蒿总黄酮 对的作用表现为高浓度清除，低浓度增强的双向作用：对o h 自由基的作用始终 表现为浓度依赖性地清除作用，而且清除作用很强。另有研究发现竹叶的总黄酮 含量及其清除活性氧自由基的能力均与银杏叶具有可比性”。黄芪总黄酮在实验 中对( o h ) 均有较强的清除作用，且清除能力与浓度呈明显的显效关系。 众多研究表明4 3 ，b 环、c 环是黄酮类化合物清除自由基的主要活性部位，且与b 环上羟基数目和所在位置直接相关。rb 环上羟基数目增加，活性增加：当b 环上 3 武汉理工大学硕士学位论文 酚羟基数目相同时，3 ，4 一邻位羟基比2 ，4 一间位羟基更易受到电子的攻击，因而活 性更强。如槲皮素的抗氧化活性高于桑色素。理论分析认为邻位羟基在形成半醌 式自由基后含有分子内氢键，使体系能量降低：其次，c 环上3 0 h 、2 ，3 之间的双 键以及毗邻的4 一羰基对抗氧化活性都有较大影响。a 环上的5 位和7 位常被羟基 化，以前人们普遍认为a 环是不易被氧化的，因而不直接参与抗氧化反应。近年来 的一些研究表明，a 环在抗氧化、清除自由基的过程中也起着一定的作用。到目 前为止，黄酮类化合物抗氧化活性的构效关系尚不完全清楚，有些甚至出现矛盾 的情况。如g a b r i c l s k a 的研究认为，黄芩苷7 位上葡萄糖醛酸的存在使它比未糖 基化的黄芩素的抗氧化活性大大增强，而y a l u n s u 等人“则认为c 7 - o h 糖基化完 全废除了其抗氧化活性。 1 1 2 3 对心血管系统的作用 早在1 9 3 3 年，r u s y n y a k 和s z e n t g y o r g y i 就发现用“生物黄酮类化合物”周 期性静脉注射，在两周内恢复了正常毛细血管的抗力，以后不断有报道不同的黄 酮化合物可以改变毛细血管的渗透性。国内7 0 年代就有报道用含黄酮成份的毛 冬青、葛根治疗缺血性心脏病，并取得了一定疗效：2 0 年前华西医大对醋柳总黄 酮( t f h ) 的研究发现，与其它含黄酮成份的药物一样，其具有扩张冠状动脉、增加 冠脉血流量的效应，并自1 9 7 8 年最早应用该药治疗冠心病、心绞痛获得满意疗效 近期还发现t f h 有较好的降压作用。近年来，临床黄酮类药物应用日益增加，品种 也日益增多，该类药物具有良好的心血管综合保护效益，来源广泛，价格适宜，无 毒副作用，值得临床推广应用。 对抗心肌损伤的保护作用 李庆林等“研究显示黄蜀葵花总黄酮( 1 0 0 ，2 0 0 m g k g 一，i p ) 对注射垂体后叶 素的大鼠心电图t 波升高有抑制作用。对冠状动脉结扎造成的心肌梗死大鼠，黄 蜀葵花总黄酮( 1 0 0 m g k g d 1 3 ，i p ) 能够显著抑制血清中p k c ，l d h 的升高， 降低血清游离脂肪酸水平。同时可降低急性心肌梗死大鼠的梗死面积，对小鼠心 肌线粒体中的m d a 的生成有抑制作用，也能提高s o d 和g s h px 的活力。提示黄蜀 葵花总黄酮对心肌损伤有一定的保护作用，其作用机制可能部分在于对m i t 的功 能稳定及抗脂质过氧化，减少自由基生成相关。 抗心率失常作用 苦参总黄酮能明显对抗乌头碱、哇巴因及氯仿诱发的心率失常，其作用机制可 能是阻断b 一受体、阻滞心肌细胞钠一钾通道。黄芩茎叶总黄酮对实验性心率失常 有显著拮抗作用。张莎莎等“”将广枣总黄酮( t f c ) 作用于豚鼠右心室乳头肌， 武汉理一 大学硕士学位论文 发现t f c 使乳头肌的收缩力和收缩速率均减弱：给予t f c 时，c a c l 。量效曲线右移， 并呈较好的量效关系；t f c 浓度为3 0 4 “m o l l 。时可明显延长右心室乳头肌的功 能性不应期。提示t f c 可以浓度依赖性地阻滞细胞外c a “进入细胞内，具有拮抗 作用。 降血脂，抗动脉粥样硬化作用 实验显示麦胚总黄酮类提取物( f e w g ) 能显著提高实验性高脂血症大鼠血清 h d l _ c 含量，同时显著降低血清t c 和t g 含量，可能与提高了血清卵磷脂胆固醇酰 基转移酶活性有关。养麦种子总黄酮能抑制喂饲胆固醇和高脂食物大鼠血清t c 和t g 的升高，抑制肝脏脂质过氧化，可能与影响d a g p k c 通路有关“。显齿蛇葡 萄总黄酮( t f a g ) 可明显降低蛋黄性高脂血症小鼠血清t c ，t g 及a i 值，对实验性 高脂血症鹌鹑可明显降低血清t c 和t g ，升高血清h d l _ c ，降低a i 值，明显减少主 动脉及肝脏t c 含量，抑制动脉粥样硬化及肝脏脂肪病变。山楂总黄酮对氧化型低 密度脂蛋白( o x l d l ) 诱导的人内皮细胞损伤具有显著的拮抗作用，对o x l d l 促 m c e c 粘附作用有显著的抑制性，降低动脉粥样硬化( a s ) 发生的危险性，起到预 防a s 发生发展的作用。 抗高血压、血管壁扩张作用 有实验表明，淫羊藿总黄酮( t f c ) 对大鼠血清中内皮素有抑制作用，一氧化碳 含量明显降低，提示t f c 扩张血管，降低血压作用与阻断b1 受体及降低血浆内皮 素含量有关“。叶希韵等通过研究发现7 5 乙醇提取银杏叶总黄酮对肾性高血压 大鼠及自发性高血压大鼠均有明显降压作用：妊娠高血压患者尿蛋白减少，n o 含 量及e t 活性降低。吴锦晖等发现醋柳黄酮在一定浓度下能有效抑制自发性高血 压大鼠血管平滑肌细胞原癌基因c m y c 表达和c m y c 蛋白质合成，提示其降压机 制可能涉及原癌基因c m y c 的调控环节。 黄酮类化合物对高血压引起的头痛、项强、头晕、耳鸣等症状有明显的疗效， 尤以缓解头痛、项强为显著。葛根素对正常和高血压动物都有一定的降压作用， 静注葛根素能使正常麻醉犬的血压短暂而明显地降低，也能显著降低清醒自发性 高血压大鼠( s h r ) 血压 抗心绞痛作用 周兰兰等“”研究显示黄蜀葵花总黄酮( t f a ) 2 0 ，4 0 ，8 0 m g k g “显著延长夹闭气 管后小鼠心电图的时间和断头后喘息时间，并呈量效关系，在2 0 8 0 m g k g “范围 内，t f a 显著降低心脑组织中m d a 和n o 含量，提示t f a 对心脑缺氧有显著保护作 用，其作用可能与抗自由基及减少n 0 有关。 抑制血小板凝集作用 武汉理工大学硕士学何论文 黄酮类化合物对凝血因于具有较强的抑制作用，故表现出较好的抗凝血作用。 实验表明不同浓度的黄酮类化合物可以不同程度地抑n - 磷酸腺苷( a d p ) 诱导 的大鼠血小板凝集，对5 一羟色胺和a d p 联合诱导的家免和绵羊血小板凝集也有 同样的抑制作用”“。此外黄酮类化合物还可降低血管内皮细胞羟脯酸代谢，使内 壁的胶原或胶原纤维含量相对减少，利于防止血小板粘附凝集和血栓形成，有利 了防治动脉粥样硬化。 对血管的影响 舒张血管平滑肌：研究发现”。”3 t f h 、m f a 可明显对抗k c l 、c a c l 。和去甲肾上腺 素对离体血管平滑肌的收缩反应，使量效曲线右移，最大反应压低：t f h 还可明显 抑制家兔主动脉条c a 2 + 内流依赖性收缩，许多黄酮化合物具有扩张冠状动脉血管、 增加冠脉血流量的效应“2 “。 保护血管内皮细胞功能：研究证实槲皮素。”可抑制不同状态下的内皮细胞释放 内皮素( e t ) ：t f h 降压时能改善高血压病人一氧化氮( n o ) 和e t 的异常合成分泌， 纠正内皮功能不良。 抑制血管平滑肌细胞( v s m c s ) 增生：研究发现槲皮素和异鼠李素对v s m c s 的增 殖、d n a 合成尤其是对去甲肾上腺素( n e ) 刺激的v s m c s 增生、d n a 合成有很强抑 制作用的天然黄酮类化台物。 1 1 2 4 抗凝血作用 银杏黄酮可延长出血时间，有良好的抗凝作用另有实验表明水杉总黄酮有抗 血小板聚集活性，改善血液流变性的作用，其作用机制可能与抑制血小板释放反 应，增加体内n o 合成及c a 2 + 拮抗作用有关。“。穿心莲黄酮可明显抑制a d p 。从和 l g 上腺素诱导的血小板聚集，明显降低凝血酶诱导的g m p 一1 4 0 水平，抑制从诱导 的血小板t x b 2 的释放，并可明显升高血小板内才ca m p 的含量，后者可能为其作 用机理之一。 1 1 2 5 抗肿瘤作用 黄酮类化合物抗癌抗肿瘤作用的研究由来已久，目前己发现具有抗癌抗肿瘤作 用的黄酮类化合物比较多，主要有槲皮素、水飞蓟素、芦丁、柚皮苷、杨梅黄酮 和芹菜配基等研究发现黄酮类化合物主要通过三种途径来达到抗癌、抗肿瘤作 用，即抗自由基作用、直接抑制癌细胞生长和抗致癌因子等“ 黄酮类化合物是通过促进肿瘤坏死因子，抑制致癌剂及抗氧化等多途径发挥疗 效的。如大豆异黄酮的a 环5 ，7 位及b 环的4 位的羟基是抑制乳腺癌和前列腺癌 的主要基团。在f i i j - y , j 腺细胞增殖阶段大豆蛋白对其有抑制作用，减少了前列腺肿 武汉理_ = 大学硕十学位论文 瘤的发生。在甲基亚硝基脲( m n u ) 诱导的l o b u n dw i s t a r 鼠癌变前喂食大豆异黄 酮，降低了对前列腺精囊液转移性腺癌的敏感性。高剂量大豆异黄酮还可抑制乳 腺肿瘤细胞增殖、分化，可减少乳腺癌的发生率。 氧自由基在肿瘤发生的某一阶段也发挥重要作用，因而应用抗氧化剂预防肿瘤 日益受到人们的重视。有实验证实甘草中含有的黄酮类具有明显的抗氧化作用， 对巴豆油诱发的不同细胞的脂质过氧化有明显对抗作用且能有效抑制促癌剂诱 发的磷脂合成增加，还能明显对抗环磷酰胺引起的小鼠骨髓微核细胞增多，具抗 突变作用。h u a n g ”“等的实验结果提示黄芩素的抑制增殖作用在于直接抑制与生 长相关的信号因予、蛋白酪氨酸激酶以及减少生长因子m r n a 的表达。 许多致癌因子导致自由基在体内富集，引起脂质细胞的脂质过氧化使细胞d n a 解链断裂，从而引发癌症黄酮类化合物具有抗自由基作用和抗氧化作用，可以通 过抑制脂质的过氧化引起的细胞破坏而达到抗癌的目的在对槲皮素抗自由基作 用的研究中发现，槲皮素在m m o l l 1 浓度时就具有抗癌作用，是有效的自由基捕 获剂和抗氧化剂槲皮素可通过三种形式起到抗自由基的作用，即与超氧阴离子 结合减少氧自由基的产生：与c u ”、f e ”、m n ”络合阻止羟自由基的形成：与脂质过 氧化基r 0 0 反应抑制脂质过氧化的反应黄酮类化合物还可作用于肿瘤细胞的m 期或s 期，来干扰肿瘤细胞的细胞周期来抑制肿瘤的增殖，如查尔酮可抑制蛋白 激酶cp k c 的活性，改变细胞蛋白质的磷酸化过程来抑制肿瘤细胞的生长黄芩苷 b a i c a l e i n 能强烈抑制3 种肝癌细胞株柘扑异构酶活性，且能抑制肝癌细胞增殖 研究发现芹菜苷配基a p i g e n i n 具有诱导c 5 0 和3 0 8 小鼠皮肤细胞和人自血病 h l 一6 0 细胞周期停止于g 2 m 期的作用，从而起到抑制肿瘤细胞增殖的作用，此作 用在除去芹菜苷配基2 4 h 后可被逆转。b r o w n s o n d m 研究发现普通食物大豆中的 黄豆苷和染料木黄酮也具有抑制癌细胞生长的生物活性此外，黄酮及黄酮衍生 物对一些致癌因子有抑制作用或拮抗作用，研究结果证明，槲皮素能有效诱导微 粒体芳烃羟化酶、环氧化物水解酶，使多环芳烃和苯并芘等致癌物质通过羟基化， 水解失去致癌活性，起到抗癌的效果 黄酮类化合物抗癌抗肿瘤药理作用的构效关系s a r 研究表明：黄酮抗癌抗肿瘤 作用与其抗氧化抗自由基作用有很大的关系，而黄酮类化合物抗自由基作用强弱 受其结构影响，如c 。一c 。位双键，酚羟基取代模式及数目和羟基甲氧基取代以及b 环上存在邻二酚羟基，都影响其抗癌效果1 朱振勤等。”研究了1 2 种黄酮的构效 关系发现：羟基在b 环上时比羟基在a 环上具有更强的抗自由基能力：c 。位的羟基 或配糖体也影响其清除自由基的活性此外，一般来说，查尔酮a 环c 位羟基是对 蛋白激酶cp k c 抑制的必要基团，当其被修饰后，往往会引起黄酮类对p k c 抑制活 武汉理上大学硕十学位论文 性的降低甚至完全丧失 1 1 2 6 对脑血管疾病的作用 冠心病严重地危害人体的健康，心绞痛是冠心病的常见症状，由于管腔狭窄，心 肌血液供应不足，造成心肌缺血：心绞痛发作时，交感神经活性提高，心率加快，心 肌收缩大大加强，心肌耗氧量增加。抗心绞痛的作用：减轻心脏工作负荷，以降 低心肌耗氧量。扩张冠状动脉，促进侧枝循环的形成，以便增加心脏耗氧量。黄 酮类化合物正是具有这两方面的作用。 黄酮类化合物能够阻断b 受体在亚细胞水平上对线粒体能产生正性影响以及 可以抑制心脏磷酸二脂酶p d e 的活性而具有变时性调节心肌收缩的作用心乐 片主要成分为大豆总黄酮，可以明显增加冠脉血流量和脑血流量，并有减慢心率， 使心肌收缩力减弱和降低血压等作用，有利于改善心肌耗氧和供养的平衡，可有 效地防治高血压和冠心病 黄酮类化合物具有扩张血管的作用，可以改善心肌平滑肌的收缩舒张功能，其 作用机制与黄酮类化合物调节平滑肌细胞膜外c a ”内流和细胞内c a “释放有关 甲基黄酮醇胺盐酸盐m f a 前期研究表明：m f a 有抗实验性心率失常、实验性心肌 梗塞和实验性血栓形成的作用，可以抑制钾钙引起的兔主动脉条及平滑肌收缩” 此外淫羊藿苷也具有扩张血管的作用 医学研究发现自由基是引起心脑血管疾病的罪恶之源，而黄酮类化合物是一种 极强的自由基清除剂，分子中心的n 、b 不饱和吡喃酮是其构效关系的核心，其中 抑制磷酸二脂酶活性与此类化合物中的羰基和a 环c 一4 羟基有关c h a n 在黄酮和 黄酮醇舒张大鼠离体胸主动脉的试验中研究得出：c - 3 位的羟基取代对黄酮醇刺 激内皮依赖性血管舒张是很重要的，同时还发现a 环缺少羟基时会提高黄酮对血 管的舒张能力3 1 1 2 7 抗炎及抗免疫作用 黄酮类主要通过影响细胞的分泌过程，有丝分裂及细胞间的相互作用而起抗炎 及抗免疫作用。这也是许多黄酮类化合物共有的作用。多数黄酮类化合物能抑制 大鼠肥大细胞和嗜碱性细胞对多种刺激引起的组胺及慢反应物质的释放，抑制 p g e 2 ，白三烯的合成和释放，抑制透明质酸酶的活性，抑制大鼠中性粒细胞溶酶体 酶的释放及其脱颗粒。如黄芩类黄酮抑制甲酰基甲硫氨酰基亮氨酰基苯丙氨酸 ( f m l p ) 激活的人多形核细胞( p m n ) 和单个核细胞( m n c ) 或调理酵母多糖( o z ) 激活 p m n 产生的化学发光( 化学发光是中性粒细胞呼吸爆发的标志，与毒性的氧衍生物 包括过氧化物，过氧化氢，羟自由基的形成和释放有关) ，也可显著抑制的植物血 武汉理：】_ = 大学硕士学1 ：i ) = 论文 球凝集素( p h a ) 诱导的淋巴细胞增殖。研究表明，慢性炎症疾病通常伴有氧自由基 和n o 提高，过量的氧自由基及其中间产物是引起组织多种病理改变的原因之一。 常见的氧自由基有：超氧阴离子( 0 ：一) 、过氧化氢( h 2 0 。) 、羟自由基( o h ) 、氧化 氮( n o - ) 、脂过氧化物( l 一，l o 一，l 0 0 ) ，二氧化氮自由基( n o z 一) 、过氧亚硝酸阴 离子( o n 0 0 一) 等黄酮类化合物是一类很强的o 。捕捉剂和0 2 淬灭剂。这是因为该物 质易于氧化故可清除氧自由基。黄酮结构中的2 ，3 双键和4 位羰基以及3 或5 位 羟基对黄酮的抗氧化作用有重要贡献。如炎症灶内吞噬细胞产生的大量 o i ，0 ：，o h 和h 2 0 可攻击细胞膜性结构引起组织细胞的直接损伤，也可氧化蛋白 酶抑制荆，导致蛋白酶的释放，间接引起组织细胞的损伤。另外h ：o 。可选择性破坏 对之敏感的t s 细胞，t s 细胞活性下降，t h 细胞活性相对升高，使关节损伤加剧， 而黄酮类化合物可使之改善。淫羊藿总黄酮可抑制炎症渗出物中丙二醛含量，抑 制脂质过氧化，提高过氧化氢酶( c a t ) 活力。大豆异黄酮抑制白细胞介素l ( i l l ) ， 肿瘤坏死因子( t n f ) ，脂质过氧化酶( l p o ) 诱导的n o 产物的生成及n o 合成酶激活 和m r n a 表达，且可抑制血管内皮生长因子( v e g f ) 诱导的血管通透性增强作用，抑 制( v e g f ) 表达和释放。增强鼠的巨嗜细胞功能，提高脾重量，外周血淋巴细胞含 量增加。槲皮素体外能抑制有丝分裂原刺激的i g m ，i g g ，i g a 的分泌。以上都说明 黄酮类化合物通过多种途径起到抗炎和抗免疫作用。 黄酮类化合物抗炎活性的构效关系研究当中发现，银杏双黄酮的抗炎活性随甲 基数目的增加而降低另外，p a n t h o n g 等对姜科植物b o e s e n b e r g i ap a n d u r a t a 中 的1 4 个黄酮化合物进行了抗炎活性实验发现，黄酮和黄烷酮a 环的5 和7 位有甲 氧基时，显示最强的抗炎活性：c 环2 和3 位的双键对活性并不重要：5 位上有羟基 时活性明显降低；c 环3 位甲氧基对活性无影响：b 环上的甲氧基可使抗炎活性有 中等程度的降低黄烷酮5 和7 位有羟基存在则无活性：无吡喃环可使查尔酮的活 性大大降低黄酮类化合物亲脂性可能是影响抗炎活性的主要因素，因为亲脂性 对抑制脂氧化酶是必须的o s a r t o r l 等通过2 7 种黄酮化合物抑制白细胞胰肽酶 e 和白明胶酶的试验发现，抑制白细胞胰肽酶e 活性对应的结构是由c 一3 位为羟 基或半酰基、b 环上的有3 个羟基、c 一4 、位上有一个羟基、并且c 一2 、c 一3 位是 双键结合的：抑制自明胶酶的作用是由a 环或8 环的3 个羟基决定的，并且c - 3 位 的半酰基是必需的 综上所述，总黄酮化合物对心血管、脑血管、肿瘤等方面均有显著的药理作用， 说明此类化合物确有多种生物学活性。该类化合物种类繁多，存在植物体中含有 多种的药理作用，如黄蜀葵花总黄酮可保护心肌受损、抗心绞痛、保护缺血性脑 损伤：银杏黄酮则具有镇痛、降血压、抗凝血、保护脑血管等作用。故其作为新 武汉理工大学硕士学位论文 药研究开发的先导化合物，是一个值得重视的资源，具有重要的现实应用意义。 1 2 磷脂复合物研究进展 磷脂是含磷酸根的脂类物质的总称，主要有卵磷脂( p c ) 、脑磷脂( p e ) 、肌醇磷 脂( p i ) 和磷脂酸( p a ) 等。它们是动植物细胞中细胞膜、核膜和类脂膜的基本成分， 广泛存在于动物的脑髓、内脏、血液、乳汁、蛋黄及植物的种子中，其生理功能 有：可使巨噬细胞应激性增强。可使血红蛋白明显提高。增加红细胞对低 渗溶液造成溶血的抵抗力。影响胆固醇与脂肪的运输和沉着，促进血管粥样硬 化斑的消散等。其结构式为： r - c 0 0 c h r c 。o 一亡h 0 ii c h ! - - o - - l 0 一x 0 r ，、r 。为构成磷脂的饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸 磷脂具有一定的药理活性，而且无毒无不良作用：作为药物辅料，磷脂能增强药 物活性，降低药物毒性，提高药物稳定性，使药物靶向释放到病灶区，延长药效，利 于药物吸收，使活性成分充分发挥效力o 。”1 。由磷脂和胆固醇制成的双分子层模 拟生物膜已经在医药领域中广泛应用，多例由磷脂双分子膜包裹药物制成的脂质 体注射剂已通过临床实验。但是，脂质体稳定性差和包封率低的问题仍然困扰着 该领域的研究者。其主要原因在于小分子磷脂制成的双分子膜很容易发生相变和 其它破坏性变化，这不仅影响脂质体的稳定性和药物的包封率，甚至威胁用药的 安全性。 近年来许多国外文献报道，将天然活性成分与磷脂在一定条件下进行复合，得 到天然活性成分磷脂复合物( p h y t o s o m e s ) 。天然活性成分磷脂复合物的理化性质 和生物特性较原化合物均有不同程度的改变，具有较强的亲脂性。磷脂酰胆碱为 体内细胞膜的基本组成物质，与细胞膜的亲和力强，通过与磷脂复合而形成载体 系统或前体药物，可有效地提高天然活性成分的体内吸收，显著地改善其生物有 效性。经实验证实，天然活性成分磷脂复合物的药理作用更强，且迅速持久。天然 活性成分磷脂复合物有着很好的研究前景，其对于探索我国天然药物及中药新药 的开发方法和途径，加速传统中药制剂的现代化研究进程，提高中药工业技术水 平及临床应用质量，均将具有重要的理论和实际意义。 1 0 武汉理一 人学硕十学位论文 1 2 1 天然药物成分磷脂复合物药理活性 研究据文献报道”“，具有抗炎作用的天然药物与不具此类活性的磷脂复合后 对其药理作用产生了较大的影响。对动物实验。以药物对巴豆油引起的小鼠耳肿 胀的抑制率为抗炎活性评估指标：对健康受试者，以通过测定由紫外线引起的红 斑面积作为评估标准。实验表明，这些天然药物磷脂复合物所表现出的抗炎活性 比相同剂量的原药物的活性明显增强，且作用更迅速和持久。 b o m b a r d e l l i m “1 等将甘草次酸磷脂复合物以水分散物或水凝胶物的形式局部 用药，发现磷脂复合物保持了三萜类成分的特殊药理活性，且延缓了作用时间。甘 草次酸的抗水肿活性随时间雨逐渐减弱，2 4 h 后，其作用几乎消失：而同条件下，甘 草次酸磷脂复合物仍能产生8 0 的抑肿率。与此类似，水飞蓟素磷脂复合物对水 肿的抑制作用也比原药物更强，水飞蓟素在1 2 h 的抑制率为3 3 ，而其磷脂复合物 在6 h 的抑制率高达7 6 ”。甘草次酸、水飞蓟素等的磷脂复合物对紫外线辐射 的防治作用的结果也令人满意o ”“3 。 b o m b a r d e l l i 等还考察了白果内酯”1 、水飞蓟素。“、新木脂素( n e o l i g n a n e ) ” 与磷脂复合后对抗菌活性的影响，同样显示出复合物比原化合物作用强的特点。 天然活性成分磷脂复合物的药理作用的改善，与其极性基团被掩蔽所获得的较 强亲脂性有关。对加入普通赋形剂的天然药物外用制剂的透皮测试，结果反映出 由于表皮屏障作用的存在，阻碍了大部分药物的透皮吸收，其余少部分则仅由于 赋形剂的较强吸水性引起角质层细胞间隙的增大，而产生的微弱扩散过程进行渗 透及吸收；而复合物的透皮吸收是通过与皮肤结构相互作用而进行的，由于亲脂 性强而易于渗透。在皮肤网状层的某些理化因素如p h 值、粘度、亲水性等与表 皮层不同，复合物结构中的药物则逐渐地释放，产生了强大而持久的药效作用。”。 i i 对水飞蓟素磷脂复合物防治各种类型肝病的药理学研究较多“2 “。用四氯化 碳、鬼笔碱等处理大鼠，造成肝损伤的病理模型，灌胃给予水飞蓟素复合物，结果 显示谷草转氨酶( a s t ) 和谷丙转氨酶( a l t ) 明显降低，