（生药学专业论文）大黄硫黄凝胶剂的药学研究.pdf

独创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进 行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容以外，本论文不包 含任何其他个人或集体已经发表或撰写过得作品成果。对本文的研究做出 重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本 声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名： 呵南 分类号基2 婴：鱼 硕士学位论文 大黄硫黄凝胶剂的药学研究 密级 毯蜜 编号! q 2 窆9 q 5 0 9 0 4 9 p h a r m a c e u t i c a lr e s e a r c ho fr h u b a r ba n ds u l f u rg e l 申请学位级别亟学科( 专业)生药堂 论文提交b 期 至q q 垒生曼旦 论文答辩日期 2 q q 昼生鱼旦 学位授予单位和日期 江菱太堂2 q q 璺生鱼旦 2 0 0 8 年5 月 评阅人 江苏大学硕士学位论文 摘要 痤疮( a c n e ) 属于皮肤附属器炎症疾病，发病率高。颠倒散处方出自医宗金鉴夕 、 科心法要诀，由大黄和硫黄两味药组成。方中大黄性寒味苦，清热解毒，硫黄性温味 辛，杀虫止痒。该方主要用于治疗肺风粉刺、酒齄鼻、紫白癜风，取其清热化毒之效。 因其组方简单，配药方便，功效显著，多年来一直应用于临床，成为皮肤科常用外用药 之一。 本研究以课题组前期工作大黄硫黄凝胶技术为研究基础，进一步完成药学研究 工作。创新性地将胶体硫与大黄中提取制备得到的游离葸醌为主药，卡波姆9 4 0 为凝胶 基质，尿素等为混合透皮促进剂，在凝胶剂型的基础上进一步改进，研制开发一种抑菌、 消炎治疗寻常性痤疮的同时，可改善炎症后色素沉着并预防瘢痕形成的中药制剂，并且 使用方便、疗效好、无毒副作用、使用安全可靠。 研究主要内容和结论如下： 1 、采用大黄游离葸醌含量测定方法，以大黄总游离蒽醌含量和含固量为指标优化了 大黄总葸醌提取工艺，得到最佳提取工艺为8 0 乙醇回流提取3 次，每次提取1 小时，每次 用溶剂量为1 0 倍药材。 2 、在单因素试验基础上，用响应面法优化大黄游离蒽醌水解工艺，得到最佳工艺条 件：5 4 m o l l 盐酸，反应温度为4 6 ，搅拌速度控制在5 0 1 5 0 r p m ，水解1 5 h ，水解率 在9 7 左右。 分别用大孔阴离子交换树脂和溶剂法纯化两条工艺路线制备游离葸醌中间体。 d 3 8 0 大孔丙乙烯阴离子交换树脂分离纯化游离蒽醌，0 4 m o l ln a o h 6 0 e t o h 解离 游离葸醌，制备所得中间体得率为2 1 ，含量为5 1 。 采用两相原位水解萃取分离纯化游离葸醌，最佳工艺条件：以药材1 0 倍量1 5 的 h 2 s 0 4 ，6 0 ，1 2 0r p m ，3 倍水解液量的氯仿量萃取1 h ，再以2 倍水解液的氯仿量萃取3 巧 次，制备所得中间体得率为1 6 7 ，含量为6 3 。 3 、用溶剂交换法将沉降硫制备为胶体硫，达到纳米级别。全面系统地考察胶体硫对 常见病原微生物的体外抑菌活性，研究发现胶体硫的抑菌、杀菌活性均强于硫黄聚乙二 醇溶液( 即硫黄p e g ) 。 4 、采用改良9 6 孔板微量二倍稀释法，研究发现胶体硫对痤疮丙酸杆菌的抑菌、杀 菌活性强于硫黄p e g ，而硫黄p e g 抑制作用相对较低，试验范围内无杀菌作用。胶体硫 对糠秕孢子菌的抑菌作用与硫黄p e g 相当，而杀菌作用要强于后者。 游离蒽醌、胶体硫联合使用时对痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌均为累加作用，说 明该复方符合联合用药原则。 江苏大学硕士学位论文 5 、针对痤疮的发病机制及并发症特点，研究该新型中药制剂在抑菌、防u v 紫外线、 抗炎症后色素沉着、溶解角栓、暗瘢修复等方面的作用。研究发现，大黄游离葸醌具有 较强的s o d 活性，有一定的清除羟自由基的能力，能显著抑制紫外线催化多巴生成黑色 素，但促进黑色素分解能力较弱。大黄游离葸醌对酪氨酸酶作用为竞争性抑制，并且为 可逆类型。 细胞试验发现，大黄游离葸醌能明显抑制b 1 6 小鼠黑色素瘤细胞增殖并抑制该细胞 内的酪氨酸酶活性、且降低黑色素含量；还具有一定的促进成纤维细胞的增殖作用。试 验结果说明大黄游离葸醌能在多途径抑制黑色素的形成，改善炎症后色素沉着，并且可 能具有加速暗瘢修复的作用。 6 、以制备所得游离葸醌和胶体硫作为原料药，以卡波姆作为基质，用单因素试验考 察溶剂a 、b 、甘油用量对游离蒽醌透皮渗透效果的影响，进一步优化大黄硫黄凝胶工艺。 兔耳痤疮模型抗角化作用研究发现，大黄硫黄凝胶具有一定改善痤疮过角质化作用。 关键词：颠倒散，大黄，硫黄，游离葸醌，凝胶剂，痤疮，抑菌，色素沉着 t h ea i mo ft h er e s e a r c hi st od e v e l o pan e wp r e p a r a t i o nf o ra c r et r e a t m e n tb a s eo ne x = r e s e a r c hi no u r t e a m , w h i c hi so fg o o dt h e r a p e u t i ce f f e c t , n ot o x i c i t ya n ds i d ee f f e c t , c o n v e n i e n ta n ds a f e t h en e w p r e p a r a t i o nf o u n d e do nt h ep r e s c r i p t i o no f d i a n d a os a n , s u l f u rc o l l o i dt h a tb e c o m ef r o mp r e c i p i t a t e ds u l f u r a n dd i s s o c i a t i o na n t h r a q u i n o n et h a te x t r a c t e df r o mr h u b a r ba r eu s e da si t sp r i n c i p a la g e n t s ，t h ep o w d e r d o s a g ef o r mp r e v i o u s l yi sc h a n g e dt og e l s ，t h ep h a r m a c e u t i c a lr e s e a r c hi sf u l l - s c a l ea n df o c u s e so nn e w d r u gd e v e l o p m e n t t h em a i nr e s e a r c hc o n t e n t sa n dc o n c l u s i o n sa r el i s t e da sf o l l o w s ： l 、a s s a ym e t h o do ft h ed i s s o c i a t i o na n t h r a q u i n o n ei s e s t a b l i s h e d t oo p t i m i z et h ee x t r a c t i o n t e c h n o l o g yb yo n h o g o n a ld e s i g nw i t ht h ec o n t e n to fd i s s o c i a t i o na n t h r a q u i n o n ea n dt h ey i e l do fc r u d e e x t r a c ta st h et a r g e t s t h eo p t i m a le x t r a c t i o nt e c h n o l o g y ：u s e8 0 a l c o h o lt oe x t r a c tf o r3t i m e s ，e v e r yt i m e s f o r1h o u ra n du s e ss o l v e n t10t i m e sw e i g h to fm e d i c a lm a t e r i a l 2 、o nt h eb a s eo ft h es i n g l ef a c t o re x p e r i m e n t sa n dt h ep l a c k e t t - b u r m a nd e s i g ni ns a ss o r ，t h e t e c h n o l o g yw a ss t u d i e db yr e s p o n s es u r f a c ea n a l y s i sw i t ht h ed e g r e eo fh y d r o l y s i sa st h es e t e c t i v em a r k e r t h ep a p e rc o n c l u d e st h em a i nf a c t o r so f t h eh y d r o l y s i s ，t h e ya r et h et o t a lt i m e ，t h ed o s a g eo f a c i dh y d r o ca n d t e m p e r a t u r e ，t h e nt h o u g ht h er e s p o n s es u r f a c ea n a l y s i s ，t h ed e s i r e dc o n d i t i o n so f h y d r o l y s i sa r ec o n c l u d e d t h e ya r e1 5h o u r so f t h et o t a lt i m e ，5 4 m o l lh c l ，4 6 co f t h et e m p e r a t u r e ，a n d5 0 - 1 5 0 r p m t h e r ea r et w ot e c h n o l o g yl i n ef o rp u r i f y i n gd i s s o c i a t i o na n t h r a q u i n o n e t h ey i e l do fi n t e r m e d i a t e p r e p a r e di s2 1 a n dd i s s o c i a t i o na n t h r a q u i n o n ec o n t e n ti s51 b yd 3 8 0r e s i n t h et e c h n o l o g yo ft w o p h a s eh y d r o l y t i cd e c o m p o s i t i o nw i t ha b s t r a c t i o ni n s i t ui sa l s ou s e dt op u r i f y d i s s o c i a t i o na n t h r a q u i n o n e t h eo p t i m a le x t r a c t i o nt e c h n o l o g y ：u s e1 0t i m e sw e i g h t15 h 2 s 0 4t o h y d r o l y z ef o rl h o u rw i t h12 0r p m ，c o n t r o l i n gt h et e m p e r a t u r ea t6 0 ，a n du s e ss o l v e n t10t i m e s t r i c h l o r m e t h a n e t h ey i e l do fi n t e r m e d i a t ep r e p a r e di s 1 6 7 ，a n dd i s s o c i a t i o na n t h r a q u i n o n ec o n t e n ti s 6 3 3 、u s es o l v e n tc r o s s o v e rm e t h o dt op r o d u c en a n o m e t e rs u l f u rc o l l o i df r o mp r e c i p i t a t e ds u l f u r p o w d e r t oi n s p e c tb a c t e r i o s t a s i se f f e c to fs u l f u rc o l l o i da g a i n s tm a i np a t h o g e n i c b a c t e r i aa n de u m y c e t e t h e r e s u l ti st h a ts u l f u rc o l l o i dh a sb a c t e r i o s t a s i se f f e c tb e t t e rt h a ns u l f u r - p e g 4 、t os t u d yt h ea c t i v eo ft h es u l f u rc o l l o i dw i t hi m p r o v e dm i c r o d i l u t i o nm e t h o d c o n c l u s i o n s ：s u l f u r 江苏大学硕士学位论文 c a ni n h i b i tp a c n e sa n dm a l a s s e z i af u r f u r , t h ee f f e c tb e t t e rt h a ns u l f u r - p e g t h ei m p r o v e dm i c r o d i l u t i o n m e t h o di sa c c u r a t ea n dr e l i a b l e 5 、d i s s o c i a t i o na n t h r a q u i n o n ew e r es c r e e n e db yt h ea s s a yo ft h et y r o s i n a s ei n h i b i t i o n , a n dw e r ef u r t h e r i n v e s t i g a t e db ya n t i - d o p a c h r o m e a u t o x i d a t i o n a c t i v i t y , s o d - l i k ea c t i v i t y , f r e e - h y d r o x y r a d i c a l a c t i v i t y , a n t i - d o p aa u t o x i d a t i o na c t i v i t y , a n t i - u l t r a v i o l e tc a t a l y s i sa c t i v i t y , a n dp r o m o t i n gd e g r a d a t i o no f m e l a n i n t h e nt h em e c h a n i s mo ft y r o s i n a s ei n h i b i t i o nw a ss t u d y u s i n gt h e mw i t hp o t e n tt y r o s i n a s e i n h i b i t i o na c t i v i t y d i s s o c i a t i o na n t h r a q u i n o n es h o w e dh i i g ha c t i v i t ye x c e p to fp r o m o t i n gd e g r a d a t i o no f m e l a n i n i nb i o l o g i e a ls t u d i e s ，t h ee f f e c to fm e l a n o g e n i s i si n h i b i t o r so nt h em e l a n i nr e l e a s eo fb16 m e l a n o m a c e l l sw a si n v e s t i g a t e d d i s s o c i a t i o na n t h r a q u i n o n es h o w e dt ob ee f f e c t i v ei nt h ed e t e r m i n a t i o no fi n h i b i t o r y e f f e c to nt h em e l a n i nr e l e a s eo fb1 6m e l a n o m ac e l l s a n o t h e re x p e r i m e n ts h o wt h a td i s s o c i a t i o n a n t h r a q u i n o n ec o u l dp r o m o t ef i b r o b l a s tc e l lg r o w i n g 6 、s i n g l ef a c t o re x p e r i m e n t sa r ed e s i g n e dt oc o n s i d e rt h ee f f e c to f t h ef a c t o ro f a 、b 、u r e aa m o u n t , t o s e l e c tt h eo p t i m a lt e c h n o l o g yo f p r e p a r a t i o n w ef o u n dt l l eg e lh a sa b i l i t yo fi m p r o v i n gc u t i n i z a t i o ni nt h e r a b b i t sm o d e l k e y w o r d s ：d i a n d a os a n , r h u b a r b ，s u l f u r , d i s s o c i a t i o na n t h r a q u i n o n e ，g e l ，a c h e ，b a c t e r i o s t a s i s ， a n t i - i n f l a m m a t o r ，h y p e r p i g m e n t a t i o n i v 江苏大学硕士学位论文 第一章绪论 目录 l 1 1 痤疮病理l 1 1 1 痤疮主要病理过程2 1 1 2 外源性冈素2 1 1 3 内源性冈素3 1 1 4 痤疮并发症3 1 2 痤疮的治疗5 1 3 处方及文献考证。6 1 3 1 处方组成与处方分析。6 1 3 2 颠倒散处方各昧药研究进展6 1 4 研究背景及总体技术路线1 0 第二章大黄游离蒽醌的分析及提取工艺研究 2 1 药材的鉴定和前处理1 2 2 1 1 药材的产地与鉴定1 2 2 1 2 药材的前处理1 2 2 2 大黄葸醌含鼍测定方法的建立1 2 2 2 1 仪器和试剂13 2 2 2 分析方法的建立1 4 2 2 3 标准曲线的建立1 5 2 2 4 稳定性试验1 6 2 2 5 精密度试验1 6 2 2 6 同收率试验1 6 2 2 7 药材总醌含量的测定1 7 2 3 总葸醌提取工艺优选1 7 2 3 1 提取下艺条件止交试验1 7 2 3 2 结果与讨论1 7 2 4 本章小结19 第三章大黄游离蒽醌的纯化工艺研究2 0 3 1 仪器和试剂2 0 3 2 分析方法2l 3 3 人黄总醌水解j ：艺的研究2 l 3 3 1 水解催化条件试验2 1 3 3 2 单冈素试验2 1 3 3 3 主要冈素的确定t w o - l e v e l 试验2 1 3 3 4b o x b e h n k e n 式验2 2 3 3 5 结果与分析2 2 3 4 游离总醌离子交换树脂纯化1 ：艺条件研究2 6 3 4 1 大黄游离蒽醌上柱液的制备2 6 3 4 2 树脂的预处理2 7 3 4 3 树脂的筛选2 7 3 4 4d 3 8 0 树脂动态交换试验2 8 3 4 5 试验结果2 8 3 4 6 树脂的再生与重复使用3 l 3 4 7 中间体的制备与含鼍分析3l 3 5 游离总醌两相原位水解萃取法纯化上艺条彳， ：研究3 2 3 5 1 单冈素试验3 2 3 5 2 两相原位水解萃取正交试验3 2 v 江苏大学硕士学位论文 3 5 3 萃取累积试验3 2 3 6 试验结果3 3 3 6 1 搅拌速度对两相原位水解萃取的影响。3 3 3 6 2 氯仿茸= 对两相原位水解萃取的影响3 3 3 6 3 正交试验结果及验证3 4 3 6 4 萃取累积试验结果3 5 3 6 5中间体的制各与含量分析3 6 3 7 游离葸醌中间体定性鉴别技术研究3 6 3 7 1 试验方法3 6 3 7 2 试验结果3 7 3 8 本章小结3 7 第四章胶体硫的制备及抑菌活性的研究 4 1 仪器与试剂3 8 4 2 胶体硫的制备3 9 4 3 显微观察4 0 4 3 1样品制备。4 0 4 3 2 制片及观察4 0 4 4 电镜观察4 l 4 5 药物对常见病原菌的抑菌试验方法4 2 4 5 。l 供试药液的制备4 2 4 5 2 培养基的配制4 2 4 5 3菌悬液的制备4 2 4 5 4 药敏试验4 3 4 5 5 最低抑菌浓度( m i c ) 的评定。4 3 4 5 6 最小杀菌浓度( m b c ) 的评定。4 3 4 5 7 杀菌曲线的测定4 3 4 6 药物对常见病原菌的抑菌试验结果4 3 4 6 1 硫黄- p e g 对常见病原菌的m i c 以及m b c 的试验结果4 3 4 6 2 胶体硫对常见病原菌的m i c 蚍及m b c 的试验结果盯 4 6 3 胶体硫与硫黄的抑菌作用比较4 7 4 6 4 阳性药物对病原菌的试验结果4 7 4 6 5 菌数一时间曲线图。4 7 4 7 本章小结4 8 第五章颠倒散处方体外抑菌活性的研究 4 9 5 1 仪器与试剂4 9 5 1 1 仪器与设备4 9 5 1 2 试剂与材料4 9 5 2 药物抑菌试验方法5 0 5 2 1 培养基及供试药液的制备。5 0 5 2 2 菌悬液的制备5 0 5 2 3 药敏试验5l 5 2 4 最低抑菌浓度( m i c ) 和最小杀菌浓度( 船c ) 的评定5 l 5 2 5 大黄、硫黄联合药敏试验5 l 5 3 试验结果5 l 5 3 1 阳性药物试验结果5 l 5 3 2 胶体硫对痤疮丙酸杆菌的作用5 2 5 3 3 胶体硫对糠秕孢子菌的作用5 3 5 3 4 大黄游离总醌及溶胶硫联合药敏试验结果5 4 5 4 本章小结5 5 江苏大学硕士学位论文 第六章大黄游离蕙醌药效研究 6 1 仪器和试剂5 8 6 2 体外黑色素试验5 9 6 2 1 酪氨酸酶活性测定5 9 6 2 2s o d 样活性的测定6 0 6 2 3 羟自由基( o h ) 清除活性测定6 0 6 2 4 抗紫外线的催化作用的测定6 l 6 2 5 促黑素分解作用的测定6 l 6 2 6 酪氨酸酶动力学试验6 1 6 2 7 抑制酪氨酸酶反应类型6 2 6 3 药物对b 1 6 黑色素小鼠瘤细胞的作用研究6 2 6 3 1 b 1 6 黑色素小鼠瘤细胞株及其培养6 2 6 3 2 试验方法6 2 6 4 药物对成纤维细胞的作用研究6 4 6 4 1 成纤维细胞细胞株及其培养6 4 6 4 2 试验方法6 4 6 5 试验结果6 4 6 5 1 体外黑色素试验结果6 4 6 5 2 细胞试验结果7 2 6 6 本章小结7 6 第七章大黄硫黄凝胶剂制备工艺研究及初步药效学研究 7 1 仪器与试剂7 7 7 2 凝胶基质的选择7 8 7 3 体外透皮吸收试验7 9 7 3 1 离体皮肤的制各7 9 7 3 2 试验装置和测定方法7 9 7 3 3 考察凝胶剂中不同溶剂的用量8 0 7 3 4 离体透皮试验8 0 7 3 5 试验结果8 0 7 4 兔耳痤疮模犁抗角化作用研究8 2 7 4 1 试验材料8 3 7 4 2 试验方法8 3 7 4 3 试验结果8 4 7 5 本章小结8 8 第八章全文总结和工作展望。 8 1 本项目的主要研究内容及结论8 9 8 2 研究创新及展望9 0 参考文献9 2 1 1 5 【 谢5 t i 在学期间发表论文及成果9 7 v 是一种皮肤毛囊皮 的皮疹为特点，或 节、囊肿、疤痕、 男性患病率高于女 i 两狮鲫p 肇t 鞠 雠2 c ；啦m n l 掰嘲婚曲f i g o l 跏翻嘲i o i 搠眦o l a c n e 黼积椎l 嘲燃t 嗍陬删玩稍蜘p 台帅蝴l r a b ，因素a 的最佳水平为3 ，因素b 的最佳水平为1 ，因素c 的最佳水 平为3 。试验的最佳组合为a 3 8 1 c 3 ，且1 j 8 0 乙醇回流提取3 次，每次提取1 小时，每次用 溶剂量为1 0 倍药材。 方差分析结论：在水平a = o 0 5 下，因素c ( 提取次数) 具有显著性，因素a ( 乙 醇浓度) 和b ( 提取时间) 均不显著。 效应曲线图2 5 可知，因素c 的最佳点在实验范围的边界外，提示原定实验范围 还应扩大，但是从节约能源和提取率出发，选定提取次数为3 次，故最佳组合为a 3 b l c 3 。 表2 - 5 正交试验结果 t a b l e 2 5r e s u l t so fo r t h o g o n a le x p e r i m e n t 表2 _ 6各因素水平方差分析袁 ：! 璺垒! 竺兰堑璺望璺垃璺堕旦! 里垒! 鲤垡璺望堕! ! ! ! 堕 因素偏差平方和 自由度f 比 f 临界值显著性 1 8 注：“辜枷表示极显著性，“枷表示显著 江苏大学硕士学位论文 图2 5 效应曲线图 f i 9 2 - 5p r o f d eo ff a c t o ra n di n d e x 2 3 2 2 验证试验及结果 由正交试验结果的数据见表2 7 ，分析可知：最佳组合为a 3 b l c 3 。考虑到节约时间 能源，可选用水平3 ，即提取3 次进行试验。因此可选用最佳工艺a 3 b l c 3 重复三次试验， 验证工艺的最佳性及稳定性。 表2 7 验证试验结果 t a b l e 2 7r e s u l t so fv e r i f i c a t i o nt e s t 查鲨笪堕堡堡圣! 型咝!鱼回量! 丝1 1 7 5 2 2 3 1 8 2 a 3 b i c 317 6 8 8 3 0 9 8 1 7 5 1 93 1 6 6 由验证试验结果的数据分析可知：最佳组合为a 3 b l c 3 ，重复性好，工艺稳定可行， 大黄总游离葸醌含量为1 7 6m g g ，但含固量为3 1 ，含杂质较多，需要进一步纯化。 2 4 本章小结 采用大黄游离葸醌含量测定方法，以大黄总游离葸醌含量和含固量为指标，用正 交方法优化大黄总葸醌提取工艺，得到最佳提取工艺为8 0 乙醇回流提取3 次，每次提 取1 小时，每次用溶剂量为1 0 倍药材。 1 9 江苏大学硕士学位论文 第三章大黄游离葸醌的纯化工艺研究 大黄游离葸醌甙元包括大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等， 结合葸醌大部分为葡萄糖甙。大黄游离葸醌一般采用从大黄中提取蒽醌类化合物再水 解的方法制备，但关于大黄总蒽醌水解条件的研究报道不一，且不详尽。大黄游离葸 醌的纯化方法很多，有超临界c 0 2 、溶剂( 多为乙醚、氯仿) 萃取或抽提分离法、大 孔交换交换树脂法等等。 由本课题组前期的研究工作中：未对总葸醌的水解条件做深入研究；在游离葸醌 离子交换树脂纯化工艺条件研究中，所使用的d 3 9 2 弱碱性阴离子交换树脂工作p h 范 围为1 - 9 ，而要使游离葸醌在碱液达到溶解状态，需要调节碱液p h 到1 1 以上，超出了 d 3 9 2 树脂的工作p h 范围，但如果使用p h 范围为1 1 4 的d 2 9 6 强碱性阴离子交换树 脂，则很难将交换在树脂上游离葸醌洗脱下来。基于前期工作需要对游离蒽醌纯化工 艺条件作进一步摸索。 故本章将对大黄总葸水解条件进一步研究；采用改良经典的氯仿萃取法及大孔丙 乙烯阴离子交换树脂两条路线，优化大黄游离葸醌分离纯化工艺。 3 1 仪器和试剂 仪器与设备 m p 5 0 2 b 型电子天平上海精科天平 a e 2 4 0 分析天平梅特勒托利多仪器有限公司 h h s 数显电热恒温浴锅中国江苏省金坛市医疗仪器厂 f w 8 0 型微型高速万能试样粉碎机天津泰斯特仪器有限公司 b 4 9 0 旋转蒸发仪德国b u c m 紫外可见分光光度计日本岛津制作所 鼓风干燥箱雷蒙特科学实验室设备有限公司 试剂与材料 生大黄( 产地甘肃，镇江江扬国药有限公司，批号2 0 0 6 0 6 1 5 ) 大黄素对照品( 纯度为9 9 ，供含量测定用，购于江苏淮安市巍伟植化研究所，为 中国药品生物制品检定所授权) d 3 1 8 大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂( 安徽省皖东化工厂) d 3 1 1 、d 3 8 0 大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂( 安徽三星树脂科技有限公司) 乙醇，氯仿，盐酸，甲醇，三氯化铁，氯化钠。均购自中国医药( 集团) 上海化 学试剂公司。 2 0 二童 并滤 合并 1 0 液， 取一定量的大黄粉末，1 0 倍量8 0 的乙醇提取三次，合并，浓缩至无醇味，定容。 取等量大黄提取液，先后按照不同水解液温度、盐酸浓度、时间及搅拌速度进行单因 素优化水解试验，每一步骤优化得出的条件值即用于其后的优化试验，按3 2 项下方法 测定水解后游离葸醌含量，并计算结合葸醌的水解率。 3 3 3 主要因素的确定t w o - l e v e l 试验 根据单因素试验结果，采用s a s 软件中的“t w o l e v e l ”设计，以水解率为指标， 对以上四个因素进行主要因素的筛选。1 表示每个因素里面的最高响应值所对应的水 平，1 则表示每个因素里的最低相应值所对应的水平，见表3 1 。 表3 1t w o - l e v e l 试验因素水平表 t a b 3 - 1 l e v e io ft w o - l e v e le x p e r i m e n tf a c t o r s 因素 水平1 丽广蔼夏1 丽涿夏孵通更一 ( h ) ( ) ( m o l l ) ( r p m ) - 10 55 04 0 11 6 2 56 1 0 0 2 1 江苏大学硕士学位论文 3 3 4b o x b e h n k e n 试验 根据单因素试验及t w o l e v e l 试验结果，采用响应面b o x b e h n k e n 设计分析，按3 2 项下方法计算水解率，以其为响应值，对主要三个因素( 盐酸浓度、温度和时间) 三 水平进行优化，试验设计见表3 2 。 袁3 - 2 响应面分析试验因素水平表 t a b 3 - 2l e v e lo fr e s p o n s es u r f a c ee x p e r i m e n tf a c t o r s 3 3 5 结果与分析 3 3 5 1 水解催化条件试验结果 由图3 - 1 可知，酸水解效果稍高于碱水解，故选择用酸水进行水解。 盐酸溶液的浓度是影响水解程度的最重要的一个因素，随着浓度的增加，水解程 度也在加大，但是酸的浓度只能保持在稀酸的水平，若浓度过大，则可能对游离葸醌 产生分解及破坏作用。 酸醇碱醇酸水碱水 图3 - 1 水解催化条件试验结果 f i g 3 - 1t h e s e l e c t i o nr e s u l to fd i f f e r e n tc o n d i t i o n 3 3 5 2 单因素优化试验结果 由图3 2 可知，水解液温度条件在4 0 时，水解率最高。而温度太高则可能引起 游离葸醌的降解，造成损失。 8 6 4 2 o 8 6 2 o s_v静旺盛蛳艇粒 硕士学位论文 r i g 3 - 2i n f l u e n c eo f t h et e m p e r a t u r e ( h c i6 m o l l ，l h ，5 0 r p m ) 9 0 a 5 - 、一 鼍 量7 5 * 7 0 o1234 时目( h ) 图3 - 4 水解时间对水解的影响 f i g 3 4i n f l u e n c eo ft h et i m e ( 4 0 ，h c i4 m o l l ，5 0 r p m ) 伸o 7 口 v 需 羹 柚 2 0 234507 盐酸浓度( l 几) 图3 - 3 盐酸浓度对水解的影响 f i g 3 - 3i n f l u e n c eo ft h