（流行病与卫生统计学专业论文）化妆品用防腐剂检测方法及使用现状研究.pdf

华中科技大学同济医学院 硬士学位论文 化妆品用防腐剂检测方法及使用现状研究 刘奋 指导老师聂绍发 摘要 目的： 1 建立化妆品中常用防腐剂及新型防腐剂i p b c 的实验室检测方法 2 了解深圳市售化妆品用防腐剂的使用现状，评估深圳市售化妆品中防腐剂使 用的安全状况。 方法： 1 液相色谱法( h p l c 法) 测定化妆品用防腐剂对羟基苯甲酸酯类( 甲、乙、丙、 丁酯) 、苯甲酸、苯甲醇。 2 气相色谱法( g c - f p d 法) 测定化妆品用防腐剂卡松c g 。 3 气相色谱法( g c f i d 法) 测定化妆品用防腐剂i p b c 。 结果 1 建立了液相色谱法( h p l c - i j v 法) 同时测定对羟基苯甲酸酯类、卡松c g 、苯 甲酸、苯甲醇的检验方法。对羟基苯甲酸酯类、苯甲酸、苯甲醇、卡松等在 1 0 1 0 0 1 1 咖l 范围内呈良好线性关系，相关系数r o 9 9 5 ，平均回收率为 9 1 5 - 9 5 5 ，相对标准偏差1 3 屯5 。 2 建立了气相色谱法( g c - f p d 法) 测定卡松c g 的检验方法。m i t 在0 8 4 4 2 0 l ig m l ，c i t 在0 3 2 1 6 0 l ig m l 范围内呈良好线性关系，相关系数r o 9 9 5 ： 回收率8 7 5 0 0 , - - 9 8 1 ；相对标准偏差3 2 6 6 3 建立了气相色谱法( g c - f i d 法) 测定i p b c 的检验方法。i p b c 在1 0 1 0 0 | l g l 玎1 范围内呈良好线性，相关系数r o 9 9 5 ，回收率9 0 2 - - 9 5 5 ，相对标准 偏差2 3 3 。 4 在所检1 3 6 份化妆品样品中，共有1 1 5 份样品检出加入一种或以上防腐剂， 总检出率为8 4 5 6 。检出率排前三位的防腐剂是对羟基苯甲酸甲酯，卡松、 对羟基苯甲酸丙酯，检出率分别为4 7 0 6 、3 3 8 2 、2 8 6 8 。 5 在检出防腐剂的1 1 5 份化妆品中，使用复配防腐剂的检出的共有7 7 份，占 6 6 9 6 ，其中主要是2 种防腐剂的复配，共5 2 份，占4 5 2 2 ；复配主要为 华中科技大学同济医学院 碗士学位论文 对羟基苯甲酸酯类混合复配，共有3 8 份，占复配防腐剂的4 9 3 5 。 6 使用频率居前三位的防腐剂依次为对羟基苯甲酸甲酯、卡松、对羟基苯甲酸 丙酯，使用频率分别为2 8 3 2 、2 0 3 5 、1 7 2 6 ，对羟基苯甲酸酯类合计的 使用频率为5 7 5 2 。 7 在洗面奶、护肤产品、眼霜中使用频率最高的都是对羟基苯甲酸酯类，使用 频率分别为5 9 5 7 、8 1 7 2 、8 2 6 1 ，其中主要使用的都是对羟基苯甲酸甲 酯、丙酯。洗发水、沐浴露中使用频率最高的是卡松，分别为5 8 6 2 和5 5 5 6 。 8 防腐剂使用安全性方面，总合格率为8 8 9 7 。沐浴露的合格率最低，仅为 8 0 ，而洗面奶和洗发水的合格率仅为8 6 9 6 和8 3 3 3 。眼霜和护肤产品的 合格率相对较高，其中眼霜的合格率为1 0 0 ，护肤产品的合格率为9 5 3 5 。 9 卡松超限量使用情况严重，在超标的1 5 份样品中有1 3 份是由卡松引起，在 洗面奶中的超标情况最严重，合格率仅为5 0 。在洗发水和沐浴露中合格率 为7 6 4 7 和7 0 5 9 。 结论 1 建立了液相色谱法( h p l c _ u 、r 法) 同时测定对羟基苯甲酸酯类、苯甲酸、苯 甲醇，气相色谱法测定卡松c g 、测定i p b c 的检验方法，可用于日常化妆品 中防腐剂的检测。 2 通过对8 种化妆品用防腐剂的检测结果表明，在洗面奶、护肤产品、眼霜中 主要都是对羟基苯甲酸酯类，其中主要为对羟基苯甲酸甲酯、丙酯；在洗发 水、沐浴露中使用最多的是卡松。 3 防腐剂复配使用的情况相当普遍，尤其以对羟基苯甲酸酯类的复配情况最为 常见 4 对深圳市售化妆品用防腐剂的使用安全情况进行评价，总合格率为8 8 9 7 。 其中用后冲洗掉的产品，包括沐浴露、洗发水和洗面奶的合格率较低，沐浴 露的合格率最低，用后存留在皮肤上的产品如眼霜和护肤产品的合格率相对 较高。 5 卡松超限量使用情况严重，在洗面奶中的超标情况最严重，说明卡松在化妆 品中的使用情况不容乐观，值得引起相关管理部门的重视。 关键词：化妆品防腐剂使用现状检测方法 2 华中科技大学同济医学院磷士学位埝文 p r e s e r v a t i v ed e t e c t i o nm e t h o d sa n d s t u d yo ri n g r e d i e n to f o b j e c t i v e p r e s e r v a t i v eu s ei nc o s m e t i c s c a n d i d a t e ：l 纽f e n t u t o r ：p r o f e s s o r , n i es h a o f a a b s t r a c t 1 t od e v e l o pt e s tm e t h o d sf o rc o i m r t o l lp r e s e r v a t i v e sa n dn 辱wp r e s e r v 硝v e 一 强憋ci nc o s m e t i c s 2 t ou n d e r s t a n dt h eu s eo f p r e s e r v a t i v e si nc o s m e t i c s , a n dt oe s t i m a t et h es a f eo f t h e p r e s e r v a t i v ei nc o s m e t i c si ns h e n z b e n m e t h o d s i p a r a b e n s ( m e t h y l , e t h y l ，p r o p y l , a n db u t y l ) , b e n z o i ca c i d , b e n z y la l c o h o li n c o s m e t i c sw e r em e a s u r e ab yh i g h - p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ( h p l c ) 2 k a t h o nc gi nc o s m e t i c sw a sm e a s u r e db yg a sc h r o m a t o g r a p h y ( o c - f p d ) 3 i p b ci nc o s m e t i c sw a sm e a s u r e db yg a sc h r o m a t o g r a p h y ( c a ：- f i d ) r e s u l t s l 。am e t h o df o rs i m u l 衄o o u sd e t e r m i n a t i o no f p a r a b e n s ，k a t h o ne 毽b e n z o i ca c i d a n db e n z y la l c o h o li nc o s m e t i c sb yh i # - p e l - f o l i 和dc h r o m a t o g r a p h y f f a l c - l r v 3w a sd e v e l o p e d p r e s e r v a t i v e sh a dg o o dl i n e a f i t y w i t h i n1 0 1 0 0 r t 嘶呵( c o r r e l a t i o nc o e f f i c i e n tr 0 。9 9 5 ) ，a n dt h ea v e r a g er e c o v e r i e sw e r e 9 1 5 曲5 5 。t h er e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n $ ( r s d t ) w e r e1 3 也5 2 。a m e t h o d f o r d e t e r m i n a t i o n o f k a t h o n c g i n c o s m e t i c s h y g a s c h r o m a t o g r a p h y ( g c - f p d ) w a sd e v e l o p e d m i ta n dc 1 th a dg o o dl i n e a r i t yw i t h i n0 8 4 - - - 4 2 0 t t g 越a n d0 3 2 1 6 0 p g m lr e s p e c t i v e l y 台o 9 9 5 ) ，t h er e c o v e r i e sw e r e 8 7 5 一9 8 1 r s dw e r e3 2 6 6 3 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 3 am e t h o df o rd e t e r m i n a t i o no fi p b ci nc o s m e t i c sb yg a sc h r o m a t o g r a p h y ( g c - h d ) w a sd e v e l o p e d i p b ch a dg o o dl i n e a r i t y w i t h i n1 0 1 0 0 g m l 加9 9 5 ) ，t h er e c o v e r i e sw e r e9 0 2 9 5 5 ，r s dw a s 2 3 3 4 i n1 3 6c o s m e t i cs a m p l e s , o n eo rm o r ek i n d so fp r e s e r v a t i v e sw e r ed e t e c t e di n 1 1 5 ( 8 4 5 6 ) s a m p l e s m e t h y l p a r a b e n , k a t h o nc ga n dp r o p y l p a r a b e nw e r et h e t o p t h r e ek i n d so f p r e s e r v a t i v e st h a tw e r ed e t e c t e di nc o s m e t i c ，a n dt h ed e t e c t a b l e r a t e sw e r e4 7 0 6 ，3 3 8 2 a n d2 8 6 8 r e s p e c t i v e l y 5 i n1 1 5d e t e c t e ds a m p l e s ，t w oo rm o r ek i n d so fp r e s e r v a t i v e sw e r ed e t e c t e di n 7 7 ( 6 6 9 6 。煳s a m p l e s a m o n gt h e m , 5 2s a m p l e s ( 4 5 2 2 ) c o n t a i n e dt w ok i n d so f p r e s e r v a t i v e sa n d 3 8s a m p l e s ( 4 9 3 5 、c o n t a i n e dp a r a b e n sm i x - t l l r e s 6 m e t h y l p a r a b e n , k a t h o nc g a n d p r o p y l p a r a b e n w e r et h em o s tc o m m o n p r e s e r v a t i v e su s e di nc o s m e t i c s t h eu s ef r e q u e n c i e so ft h e mw e r e2 8 3 2 ， 2 0 3 5 a n d1 7 2 6 r e s p e c t i v e l y t h eu s ef r e q u e n c yo ft h et o t a lp a r a b e n sw a s 5 7 5 2 ， 7 i nf a c ec l e a n i n gm i l k , s k i nc a r ep r o d u c t sa n de y ec a r ep r o d u c m ，t h ep a r a b e n s w e r et h em o s tc o m m o np r e s e r v a t i v e s ，t h eu s ef r e q u e n c yo ft h ep a r a b e u si nt h e m w e r e5 9 5 7 ，8 1 7 2 ，8 2 6 1 r e s p e c t i v e l y i np a r a b e n s ，m e t h y l p a r a b e na n d p r o p y l p a r a b e na c c o u n t e dt h em a i np r o p o r t i o n k a t h o nc g w a st h em o s tc o m l n o n p r e s e r v a t i v ei ns h a m p o o sa n db a t hl i q u i d , t h eu s ef r e q u e n c yw e l e5 8 6 2 a n d 5 5 5 6 r e s p e c t i v e l y 8 a sf o rt h es a f eo f u s i n gp r e s e r v a t i v e s ，t h et o t a lq u a l i f i c a t i o nr a t ew a s8 8 9 7 t h e q u a l i f i c a t i o nr a t eo fb a t hl i q u i d , w h i c hw a so n l y8 0 0 0 ，w a st h el o w e s t t h e q u a l i f i c a t i o nr a t e so f f a c ec l e a n i n gm i l k sa n ds h a m p o o s w e r e8 6 9 6 a n d8 3 3 3 r e s p e c t i v e l y t h eq u a l i f i c a t i o nr a t e so fs k i nc a r ep r o d u c t sa n de y ec a r ep r o d u c t s w e r em g h e r , t h eq u a l i f i c a t i o nr a t eo fe y ec a r ep r o d u c t sw a s1 0 0 ，a n dt h e q u a l i f i c a t i o n r a t eo f s k i nc a r ep r o d u c t sw a s9 5 3 5 9 t h eu s eo fk a t h o ne x c e e d e dt h el i m i td o s e ，a n di tw a sv e r ys e v e r e i n1 5 u n q u a l i f i e ds a m p l e s 1 3s a m p l e sw e r ea c c o u n t e df o rk a t h o n t h ee x c e e d i n g t i s e o fk a t h o ni nf a c ec l e a n i n gm i l k sw a st h em o s ts e v e r e a n dt h eq u a l i f i c a t i o n 翰t e w a so n l y5 0 t h eq u a l i f i c a t i o nr a t e so fs h a m p o o sa n db a t hl i q u i dw b 玎e7 6 4 7 4 兰主型垄壁旦芝墨! 堡 竺主兰丝! ：兰 a n d7 0 5 9 r e s p e c t i v e l y c o n e l u s i o n s 1 am e t h o df o rs i m u l t a n e o u sd e t e r m i n a t i o no fp a r a b e n s ，b e n z o i ca c i da n db e n z y l a l c o h o li nc o s m e t i c sb yh i g h - p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ( h p l c - u v ) w a gd e v e l o p e d am e t h o df o rd e t e r m i n a t i o no f k a t h o nc ga n di p b ci nc o s m e t i c s b yg a gc h r o m a t o g r a p h y ( g c - f p d ) w a sd e v e l o p e d a l lt h i st e s tm e t h o dc a nb e u s e dt od e t e c tt h ep r e s e r v a t i v e si nd a i l yc o s m e t i c s 2 t h ed e t e c t i o nr e s u l to f8p r e s e r v a t i v e su s e di nc o s m e t i c ss h o w e dt h a tt h e p a r a b e n sw g r et h em o s tc o m m o np r e s e r v a t i v e si nf a c ec l e a n i n gm i l k , s k i nc a p r o d u c t sa n de y ec a r ep r o d u c t s ，a n dm e t h y l p a r a b e na n dp r o p y l p a r a b e n a c c o u n t e d t h em a i np r o p o r t i o n ；k a t h o nc gw a gt h em o s tc o m i n o np r e s e r v a t i v e si n s h a m p o o sa n db a t h q l l i d 3 t h eu s eo fp r e s e r v a t i v e s l l i x l l l r e sw a gv e r yp o p u l a r ；e s p e c i a l l yt h eu s eo f p a r a b e u sn l i x t l 】r e sw a s t h em o s tc o i n l l l o i l 4 t oe s t i m a t et h es a f eo fu s i n gp r e s e r v a t i v e si nc o s m e t i c ss o l di ns h e n z h e n , t h e t o t a lq u a l i f i c a t i o nr a t ew a s8 8 9 7 t h eq u a l i f i c a t i o nr a t e so ff a c ec l e a n i n gm i l k s a n ds h a m p o o sw e r el o w e r , b a t hl i q u i dw a gt h el o w e s t t h eq u a l i f i c a t i o nr a t e so f s k i nc a r ep r o d u c t sa n de y ec a r ep r o d u c t sw h i c hs t a y e di nt h es k i na f t e ru s i n gw e r e r e l a t i v e l yh i g h e r 5 t h es i t u a t i o nw a sv e r ys e v e r et h a tk a t h o ne x c e e d e dt h el i m i td o s e t h ee x c e e d i n g u s eo fk a t h o ni nf a c ec l e a n i n gm i l k sw a gt h em o s ts e v e r e i ts u g g e s t e dt h a tt h e u s eo fk a t h o ni nc o s m e t i c sw a sw o r r i e d , a n dt h ec o r r e l a t e dm a n a g e m e n tm u s t p a y m o ma t t e n t i o no ni t k e yw o r d s ：c o s m e t i c , p r e s e r v a t i v e ，c u r r e n tu s i n g ，d e t e r m i n a t i o nm e t h o d s 5 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 第一部分化妆品用防腐剂检测方法的研究 前言 化妆品用防腐剂是加入化妆品中以抑制微生物在该化妆品中生长为目的的 物质，是化妆品组分的限用物质【1 】口由于化妆品中加入了许多营养物质，而它们 却有可能成为微生物增生和繁殖的培养基，也就有可能使产品受到微生物污染而 产生异味或外观改变。化妆品中添加防腐剂的作用是防止化妆品在生产、使用及 保质期内发生腐败变质，而防止二次污染主要依靠防腐剂【2 】，因此绝大多数化妆 品都添加一定的防腐剂。但化妆品用防腐剂多为化学物质，由于大多数化妆品配 方中含有防腐剂，而大多数防腐剂对人体均有一定毒性，所以防腐剂在化妆品中 的应用受到一定限制。世界各国的相关部门如欧盟化妆品管理委员会、美国的 f d a ( f o o da n d d r u g a d m i n i s t r a t i o n ) 、日本的m n w ( m i n i s t r y o f h e a l t h a n d w e l f a r e ) 以及中国的卫生部等都制定了相应的法规来保证化妆品的安全性。其中对化妆品 用防腐剂都有明确的使用限制，包括限用防腐剂的种类，使用条件和使用浓度， 以保证其使用的安全性。我国卫生部2 0 0 2 年重新修订的化妆品卫生规范中 规定了5 5 种限用防腐剂的使用条件及使用浓度。 检测化妆品中是否添加了防腐剂，以及添加防腐剂的种类、使用浓度是否符 合规范要求，是化妆品卫生监督管理的一个重要组成部分，也是评价化妆品安全 性的一种重要手段，对保护消费者的安全有着重要的意义。由于化妆品防腐剂的 种类繁多，理化性质也各有差别，导致检测方法也各不相同。目前报道的测定方 法主要有高效液相色谱法( h p l c ) 【3 - 1 1 1 、气相色谱法( g c ) 1 1 2 - 1 4 等，也有采用气 相色谱一质谱法( g c 一| l s ) 【1 5 】、薄层色谱法( t l c ) 【峋、毛细管电泳i 切，凝胶电 泳u s - 1 9 l 的报道。由于大多数防腐剂都具有紫外吸收基团，使高效液相色谱法成为 应用最为广泛的检测方法。但从报道的测定防腐剂的种类来看，大多局限于对羟 基苯甲酸酯类、苯甲酸、苯甲醇等，对新型防腐剂如卡松，i p b c ( 丁氨基甲酸- 3 一 碘代2 丙炔基酯) 等测定方法的报道不多。 本次研究的目的是建立化妆品中常用防腐剂及新型防腐剂卡松，i p b c 的实 验室检测方法，通过对深圳市售化妆品中防腐剂的检测，了解深圳市售化妆品中 防腐剂的使用现状。 6 华串辍搜六学露济医学巯 繇童学位论文 重。高效滚裙色谱法潮定纯牧晶孛常焉防腐裁懿研究 对羟基苯甲酸酯类、卡松、笨甲醇、苯甲酸是化妆品中常用防腐剂，由于均 含裔紫外吸收基团，最誊用的测定方法是赢效液楣色谱法，它可以同珏萼分离检测 多释防腐帮。我鬻征妆品卫熏簸范中蕊定的纯教晶串秘瘸帮的涎定方法也是 采用高效液相色谱法。本次方法研究是在化妆品卫生规范所采用的方法的基 礁上，辩色谱条 譬进霉改进，馊测定更加简便、快速、灵敏。 1 1 辑辩与方法 1 1 1 主要试剂 攀酵：滚相色渣纯。 艺酸铵溶液( o 0 2 m o l l ) ：称敬1 5 4 9 乙黢铵，拥水至1 0 0 0 m l ，溶解，经0 4 5 p m 滤膜过滤。 瓣羟基苯甲酸熬类椽准撩备液：准确称取黠羟基苯甲黢学酝、乙酝、嚣酯、 丁酯各0 1 0 0 0 9 ，甲醇溶解定容聪1 0 0 m l ，浓度为1 0 0 m p j m l 。 笨甲酸标准溶液：1 0 0 m g m l ，g b w ( e ) 1 0 0 0 0 6 ，图家标准物质研究中心。 港学醇耘准赣镰滚：准确稔敬苯译醇0 1 0 0 0 9 ，甲醇滚瓣定套至1 0 0 m l ，浓 度为1 0 0 m g m l 。 卡松标准储备溶液配制：准确称取卡松( 购自三博生化科技( 上海) 有限公 司，卡橙含量1 4 4 8 ，c i t m i t ( w w ) ：2 。6 2 ) 1 0 0 m l ，攀簿溶解定容麓5 0 m l 。 c l t 浓度为1 0 3 5 m # m l ，m i t 浓度为2 7 1 5 m g m l 。 标准系列：取上述标准储备液用甲醇稀释至浓度分别为l o ，2 0 ，5 0 ，1 0 0 1 1 斛。- v 捡系翻隽c i t1 0 3 5 ，2 0 。7 0 ，5 0 。7 5 t , tg m l ，1 0 3 。5 ；m i t 2 7 。1 5 ，5 0 。3 ，1 3 5 。7 5 ， 2 7 1 1 5 i l 劝d 。 1 1 2 主要仪器 蹇效渡程色渗役( h p l l 0 0 ，美鏊安捷稔公霹) ，豢鑫魂送襻器，嚣元攥麦泵， 在线脱气机，柱濑箱，二极管阵列( n a d ) 棱测器 i 1 0 万电子灭平( 删2 0 2 ，爨国) 怒声波涛洗纹( a s 2 6 6 ，美溺) 满速离心机( s i g m a 3 1 5 ，德国) 7 华中科技大学同潞驻学院 磷士学位论文 1 1 3 分析方法 1 1 3 1 样品处理 猴确称取样品约1 0 0 9 于舆塞离心管中，必要时，水浴去除乙醇等挥发性肖 凝溶裁，黧甲簿至1 0 r i d ，摄攒，超声摄取1 5 r a i n ，3 0 0 0 r p ，m 离心1 0 分铮，上潦 液作为待测样液，测定前过0 4 5pm 滤膜。 1 1 3 2 色谱条件 色谱柱：o d sh y p e r s i lc 1 8 ，5 i tm 不锈钢柱，1 2 5 m m x 4 m m ； 流动相：梯度洗脱，梯度洗脱程序觅表1 。 表1 ：h p l c 法测定化妆品中防腐剂梯发洗脱稳j 筝 流速：1 0 m l m i n 。 柱温：4 5 。 检测波故# 专栓捻测波长：2 8 0 r i m ，带竟：1 6 n m ；其他成分检测波长程序见 表2 ；参比波长：3 6 0 n m ；带宽：1 0 0 n m 。 表2 ：h p l c 滋溅定纯姣螽孛黪瘗裁检测波长疆净 1 1 3 。3 据准藏线剃各 墩标准系列1 0 | i1 迸样测定，保留时间定性，外标法绘制峰面积一浓度的标 灌鞠线。 1 1 3 4 样品测定 敬2 0 # l 祥液避样，保赘时闯及稷浚光谱鬻定毪，峰面积定量。 l 。1 3 5 计算 按下式计算样品中各防腐剂的浓度 8 华中科控大g - 同济医学院 硕士学位论文 = 旦兰蔓 残维1 0 0 0 0 式中：样品中各防腐剂的质量分数， 争：稃鑫穗娄子搽准懿蠢，n g ； v i ：样品进样体积，p l ； v 2 ：祥菇定容体积，m l ： m ；样品质量，g a 1 1 3 6 标准色谱图 图1 ；h p l c 测定纯城晶中防腐剡撂准图谱 1 辈甲酸；2 ：m i t ；3 ：c r r ；4 ：苯甲薛：5 ：辫羟基苯带酸甲蘸； 6 ：对羟基苯甲酸乙酪；7 ：对羧基苯甲酸丙酯；8 ：对羟纂笨甲酸丁醣 1 2 缭莱 1 2 1 方法线性范围 爽验研究表疆，对弪基苯学酸酯类、苯荦酸、苯甲黪、卡松簿在1 0 1 0 0 l l 酚越 范围内，浓度与峰面积之间璺良好线饿关系，回归方程及相关系数见表3 。 9 华中科投太学同济鞋学院 酾士学位论文 表3 ：回归方程及相关系数 1 2 2 方法西农攀及精密度 通过进行6 次加标嘲收试验，方法平均回收率为9 1 5 一9 5 5 ，相对标准偏 差为1 3 , - - 2 5 ，结果觅表4 。 表4 ：加标回收试验结果( n = 6 ) 1 2 3 方法灵敏发 方法检出鼠按3 倍空白噪声对应的质量表示，定量下限为1 0 倍空自噪声对 应的质萤。方法检出浓度及定爨浓度分剃为按方法规定豹取样爨和定容俸积连行 操终对，检出凝及定量下限所对应豹榉品浓度。本法的穷法灵敏度如袭5 所示。 表5 ；各爨瘸剜的捡感限、定篷下限、检出浓撵、定爨浓度 l o 华中科技大学厨济医学院硕士学位论史 1 3 讨论 零方法的撂晶兹姥磐按化妆晶卫生趣蕊豹方法进行1 2 0 】，在参考萤内终文 献的基础上，通过反复试验，主要在色谱分离条件方面进行了改进，使测定方法 更热甓便、浚遽、灵敏度嵩。嚣耱方法色谱条 睾懿毙较是表6 。 表6 ：两种方法色谱条件比较 巍表6 哥见，逶避采爱短柱，撵瘦洗驻等改送，褒保证色谱分离效率豹兹提 下，分析时间由3 0 分钟缩短到1 0 分钟，大大提高了工作效率。在选择流动捅方 蓉，袋震簿鼙豹乙酸铵甲酵髂系，健滚动稳豹琵鞠篱荜纯。梭羲l 波长器改遴方 面，妇于各防腐剂的最佳吸收波长各不相同，对羟基举甲酸醮类的最佳吸收波长 均为2 5 4 n m ，苯甲酵为2 0 5 r i m ，苯甲酸为2 3 0 h m ，卡裣为2 8 0 n m 。纯妆品羹生 规范采用2 5 4 n m 为单一波长进行检测，导致苯甲醇和苯甲酸的灵敏度降低， 本法利用仪器提供的程序可变波长功能，在备组份出峰时间，设置各融最灵敏的 猃测波长进纾捡测，丈大提舞了灵敏发，对予灵敏度要求更巍戆卡松，单独设鬟 一个2 8 0 n m 的检测通道对其进行检测。两种方法灵敏度的比较见表7 。 华中科技大学耐济睫学院 磁士学位论史 表7 ；两种方法灵敏度比较 a 法：本法：b 法：让投燕卫生觏范方法 从表7 可见，卡松的定量稔出浓度为c i t 0 0 0 1 1 ，m i t o 0 0 0 7 ，化妆品溅 生甄魏方法定量检爨浓度麓0 0 0 1 3 ，嚣豫教燕里生翘范黠卡毁瓣使用嫩 量很低，仅0 0 0 1 5 。因此采用高效液相色谱法测定卡松的方法灵敏度不足以臌 谤对毒 ：妆蒹串睾裣翡是鲎要求，需要嚣麴灵敏翡弱定方法。 2 气稷也谱法( g c - f p d 法) 测定卡松( k a t h o n ) 的方法研究 卡松化学名称为黔氯一2 甲基- 4 一异噻唑啉- 3 - 酮( c i t ) 和2 一甲基一 异噻唑 辩一3 一嗣蕊i 辞豹混合貔( 3 ：i ) 。亿较懿卫生黼范蕊定箕限爨为0 0 0 1 5 ( 1 5 l lg g ) 。 化妆品激生规范的测定卡松的方法采用高效液相色谱法，文献报道也多 采用巍效渡樱色谱法。但由予卡松豹限量很低，仅为1 5 斗g g ，通过裳验证明， 高效液相色谱法的灵敏度较难满足其限量的要求。 气提色谱法孛豹火焰走疫捡嚣器( f p d ) 又稼巯骥检测器，是据对含臻磷携 质有响应的特异性检测器，具肖极高的灵敏度。本检测方法参考国外文献口1 1 ，利 焉卡松分子串含硫的萼等往，采稽气穗色谱法分蔫，f p d 检溅嚣裣溅纯教晶孛的卡 松。方法灵敏度得到犬大提商，定量浓度为1i lg g ，比液相色谱法灵敏度提嵩 1 0 倍，完全w 以满足隈量要求。同时出于f p d 检铡器只对含s 成分裔响应，样 品基演对测定于扰提对液楣色谱法要小，因此在对卡松定性和定量测定方面，零 法相对液相色谱法，具有较大的优越憔。 肇串辩绞大学霹舞医学麓 颈士拳经论文 2 1 材料与方法 2 1 。1 蹇要试裁 甲醇：分析纯。 卡松：购自三博生化科技( 上海) 有限公司，卡松含量1 4 4 8 ，c i t m i t ( w w ) ： 2 。6 2 。 标准储备溶液配制：准确称取卡松约1 o o g ，甲醇溶解怒容至2 5 m l 。c i t 浓 度为4 1 9 m m l ，m i t 浓度为1 6 0 m g m l 。 稼准系歹l 琵裁；淑标准 凑备漆滚遥量，配裁稼疆系歹g 浓度磐鞠菇：m i t ：0 3 2 、 1 6 、1 6 、3 2 、1 6 0p 鲈n l ，c i t ：o 8 4 、4 2 、4 2 、8 4 、4 2 0 ”妫丑l 。 2 1 2 主要仪器 气耪色渗纹( g c 2 0 1 0 ，基零麓津公司) ，零久熄光瘦捡溅豢( 即d ) ，s 滤走 片 1 1 0 万电子天平( 舵0 2 ，荧国) 怒声浚潼洗纹( 矗s 2 6 s ，美嚣) 高速离心机( s i g m a 3 1 5 ，德国) 2 i 3 分折步骤 2 i l s 。i 榉燕素萋签瑗 准确称取1 0 9 样品于2 5 m l 离心管中，必簧时，水浴去除乙醇等挥发性有机 溶剂，加入甲醇麓1 0 m l ，超声提取1 5 分钟，加入2 9 无水硫酸钠，3 0 0 0 r p m 离 ，冬l o 分锋，取款游滚壹揍上税溺定。 2 1 0 2 色谱条件 偬谱柱：s u p e l c o s p b 1 ，3 0 r e x 0 2 5 r a m x 0 2 5 1 t m 弹性石英毛纲管柱； 检测器：火焰毙度检滋器( f p d ) ，硫( s ) 滤竞冀； 程序升温；初始l o o x 3 ，2 0 c l m i n ，至2 5 0 c ，保持3 r a i n 载气 氮气，1 0 m l m i n ，艇流； 避祥方式：分流，分流i t ；2 0 ：l ； 进样口温度；2 5 0 ： 捻测器温度：2 8 0 ； 氯气：6 0 m l m i a ； 华中科技大学同斑医学院 颧士学位论文 空气；7 0 r a l r a i n 。 2 。1 3 - 3 掭准熬线裂冬 取标准系列1 0 ”i 进样测定，保留时间定性，外标指数计算法绘制峰面积一 滚发豹标准魏线。 2 1 3 4 样品测定 取1 01 tl 样滚避祥，傈窝辩阉定髋，蜂舔袄定量。 2 1 3 5 计算 按下式计算样品中防腐剂的浓度 p 致 国2 瓦意蕊 式孛；襻赫孛茨纛裁翡蒺壁分数，； p ：样晶相当予标准的羹，n g ； v l ：样菇透群体积，鼙l ； v 2 ：样鼎定容体投，m l ； 2 1 3 6 色谱嗣 标准色谱銎冕图2 。 图2 ；c - c - f p d 溅定诧投最孛卡投标准围落 2 2 结果 2 2 。1 方法灵敏度 方法检出限以3 倍基线噪音所对成的量，定量下限以1 0 倍基线噪音所对应 1 4 华中科技大学嘲济医学院 额士学位论文 的量，本法c i t ，m i t 的检出限为o 0 1 、o 0 3 n g ，定羹下限为0 0 3 n g 、o 1 n g ，以 取撵爨l g ，遴撵量蕊1 弘l 计算，检出浓度必o 1i t g g 、o 3 彗g ，g ，定量浓度为0 3 l a g 、1 g g 。 2 2 。2 线缝蕊嚣 c i t 在0 + 9 4 4 2 0 i lg m l ，m i t 在o 3 2 1 6 0 p 咖1 范围内，峰面积与样品浓 度量指数对藏关系，瞬薅方穰及裙关系数觅袋s 。 “ 7 衾鼓7 画岿芳袒复翔关素薮“7 ”一一“ 跨瘸裁名称疆爨方獠 攘美系数， 姗y = x ( 1 6 1 5 1 3 ) e x p ( 1 1 1 3 3 0 6 ) 0 9 9 6 9 c i ty ；x ( 1 。8 3 2 2 5 ) e x p ( 1 0 5 6 4 3 8 ) 0 9 9 9 9 2 2 3 方法准确度及精密度 农样品孛分裂添搬低、中、商浓发标准溶液，掇敬爱测定回收率，回收率在 8 7 5 9 8 1 之间，相对标准偏差稳3 2 6 6 之问，结果见表9 。 表9 ：鸯瑟标题牧试验缀果( n = 6 ) 名称 加嚣韵回收馥t n g ) 平均回觜 福时标准蠕 m g j l _ j b ， 、月7 2 3 讨论 ， 在样晶嚣处理方灏，本方法采用了与渡麴色谱法蹲撵豹处理方法，只是加入 了无水硫酸钠脱水，去除处理液中的水分，以适应气相色谱分析。样晶处理液可 璐溺瓣进行泼攘窝气耱分援，蔻处理方法县鸯逶月楼。 采用弱极性的s p b - 1 弹性石英毛细管柱对卡松进行分离，m i t 与c i t 在5 分 锋之癌得蜀完全分离，分析辩阕短，效率离。 采用高灵敏度，岗特异性的火焰光度检测器( f p d ) ，使梭测灵敏度较高效液 相色谱法提离l o 倍，3 种方法检出隈的眈较觅表l o 。 表1 0 ：3 秘方法灵敏度比较 矗法：毫效渡攘色谱按；b 法：传教晶翼生翅范方法；c 法：气鞠色谱法 1 5 华中科技大学同游医学院 硕士学位论文 值得注意的是，f p d 检测器的响成值( 峰面积) 舅浓度之间是呈指数对应关 系，定量计算要采用攘数计冀法。 3 气裙色谱法 9 8 。 i p b c 标准德冬渡：糖确称取t p b c 0 1 0 0 0 9 ，曩甲浆定容至1 0 0 m l ，浓度1 0 0 0 pg m 1 i p b c 标准系蘩；敬标准德蓄滚爱擎释努羯稳释栎准系燕浓度为l e ，5 0 ， 1 0 0 i tg m l 。 3 。1 2 主要仪器 气楣色谱仪( g c 2 0 1 0 ，豳本岛津公司) ，带氢火焰离子化( f i d ) 检测器 1 1 0 万电子天平( h 眈0 2 ，美国) 超声波瀵洗纹( a s 2 6 6 ，焚蜜) 商速离心机( s i g m a 3 1 5 ，德国) 3 1 3 分辑方法 3 1 3 1 样品前处理 准确称取1 0 9 样箍于2 5 m l 离，t l , 瞽中，努簧露，承浴去酴乙醇等撵发牲裔祝 溶剂，如a q 3 醇至1 0 m l ，越声提取1 5 分钟，加入2 9 无水硫酸钠，3 0 0 0 r p m a 离 心5 分钟，取上清液直接上机测定。 3 1 3 2 色谱条终 色谱柱；8 p b i ( s u p e l c o 公司1 ，3 0 mx o 2 5 m i n x 0 2 5 “n a t 1 6 华中科技大学葡济医学院 硕士学位论兜 气化室温度：2 5 0 ： 梭测器瀑发：2 5 0 ； 糕温：初始8 0 ，保持1 分钟，3 0 e r a i n 至2 8 0 ，保持3 分钟： 避样方式；不势浚送撵，l 。o 彗l ； 裁气：氮气，恒流i m l m i n ： 鬣气：4 7m l m i n ： 空气：4 0 0m l m i n 。 3 1 3 3 标准曲线制备 取标准系列l ，o 弘l 进群测定，保鼷对闯定性，外橡法绘制蜂殛积浓瘦的标 准曲线。 3 1 3 。4 群鑫溅定 墩1 0 pl 样液进样，保留时间定性，蜂面秘定量。 3 。l j 5 诗算 按下式计算样品巾防腐剂的浓度 国= 旦兰奠 k m x l 0 0 0 0 式中：样鼎中防腐剂的质量分数，； 妒：榉箍提兰予标准豹鬟，琏； v l ：样黯进样体积，l l l ； v v 榉菇定容髂税，m l ： 3 1 3 6 色谱豳 标准及样品色谱图觅图3 。 蛰3 ：c , - c - f i d 测定l 瞪e 标雄图谱( 2 0 r i g ) o 9 9 5 。 3 2 3 方法回收率和精密度 精确称取样品1 o g ，样品中添加1 0 0 0 l lgi p b c 标准溶液，前处理后，g c - f i d 测定。样品平行测定6 次，平均回收率为9 2 2 ，相对标准偏差为2 6 。 3 3 讨论 i p b c 易溶于低级醇类，参照化妆品卫生规范中防腐剂测