（有机化学专业论文）色谱技术在中药制剂质量控制中的应用研究.pdf

硕士学位论文 m a s t e r st h e s i s 摘要 中药制剂的质量优劣是使其迈向国际市场的关键因素之一，而中药制剂的质量 判定也是使国外中药制剂准入国内市场的重要环节，这些都对中药制剂的质量控制 提出了很高要求。采用色谱技术对中药制剂的有效成分和有害成分进行分析与测试 是进行质量控制的可行方法。 本论文在查阅大量文献的基础上，对复方丹参滴丸和固经丸的质量控制方法进 行改进。主要内容包括三个部分。首先采用毛细管气相色谱法及反相高效液相色谱 法分别测定了复方丹参滴丸中冰片的含量。冰片具有挥发性，因此气相色谱法测冰 片含量的方法较为成熟。但是由于冰片无特征紫外吸收，所以直接采用高效液相色 谱检测比较困难。根据冰片结构中含羟基的特点，可采用高效液相色谱衍生法检测。 3 ，5 二硝基苯甲酰氯作为柱前衍生化试剂，在叔胺或吡啶类化合物的催化下可反应 生成具强紫外吸收的3 ，5 二硝基苯甲酸冰片酯。故将两种方法分别用于测定复方丹 参滴丸中冰片含量，以验证后者的准确性。冰片的平均回收率为1 0 1 2 ，r s d 为 3 1 。供试品溶液在8 h 内稳定。高效液相色谱法测定的实验结果表明，在1 1 0 衄o l 范围内，色谱峰面积与进样量呈线性关系。复方丹参滴丸中冰片的回收率为9 9 8 ， r s d 为1 6 ( = 4 ) 。对比发现，两种方法所测含量相当，均可用于测定冰片含量。 其次，采用反相高效液相色谱法测定了固经丸中有效成分芍药苷的含量，改进 了该中药制剂的质量控制方法。芍药苷在o 4 4 3 9 6 斗g 范围内的线性关系良好 ( ，= o 9 9 9 9 ) ，平均加样回收率为9 9 2 ( 聆= 5 ) ，重现性试验r s d 为o 8 2 ( ，z = 5 ) 。 供试品溶液在2 4 h 内稳定性良好。结果表明高效液相色谱法可用于含有效成分芍药 苷的中药制剂的质量控制。 最后以毛细管气相色谱法测定了复方丹参滴丸中有机氯农药的残留量。实验结 果表明，1 1 种农药在1 o 1 0 4 5 0 1 0 一幽m l 范围内的线性关系良好，相关系数在 0 9 9 8 8 o 9 9 9 9 范围之间。平均回收率在7 4 2 1 0 1 5 ( 刀= 6 ) 范围内，r s d 在2 4 8 7 之间，该方法可用于中药制剂中有机氯农药的残留分析。 关键词：色谱分析法中药制剂质量控制有机氯农药冰片芍药苷 硕士学位论文 m a s t e r st h e s t s a b s t r a c t q u a l i 够i so n eo ft h ec r i t i c a lf a c t o r st h a tc h i n e s em a t e r i am e d i c ae n t e ri n t ot h e i n t e m a t i o n a lm a r k e t ，a n dt h eq u a l i 够d e t e m i n a t i o no fc 【l i n e s em a t e r i am e d i c ai sa n i m p o r t a n tp r o c e s so f t h e i ra d m i s s i o nt oc h i n am a 血e t ，b o t ho fw h i c hb r i n gf o 刑a r ds o m e h i g hr e q u i r e m e n tt o t h eq u a l i t ) rc o n t r o lo fc h i n e s em a t e r i am e d i c a i ti saf e a s i b l e 印p r o a c hm a ta p p l y i n gc h r o m a t o g r 印h yt 0a 1 1 a l y z i n ga i l dt e s t i n gn o to n l ye 日e c t i v e c o m p o n e n t s ，b u ta l s oh a m m lc o m p o n e n t si nc h i n e s em a t e r i am e d i c af o rq u a l i 够c o n t r 0 1 r e f e r r e dt oal o to fl i t e r a t u r e s ，m i sp a p e ri m p r o v e dt h eq u a l i 够c o n t r o lm e t h o do ft h e c o m p o s i t es a l v i ap e l l e ta j l dg u ji n gp i l l s n l em a i nc o n t a j n st h r e ep a n s f i r s t ，t h e e 归睹c t i v ec o m p o n e n tb o m e o l i nt h ec o m p o s i t es a l v i ap e l l e t ，h a sb e e na n a l y z e db yg a s c h r o m a t o g r a p h ya i l dl l i 曲p e r f o n n a n c el i q u i dc 1 1 r o m a t o g r a p h y b o m e o lh a sv o l a t i l i 够s o i ti sam a t u r em e t h o dt od e t e 加1 i n et h ec o n t e n to fb o m e o lb yg a sc h r o m a t o 伊a p h y b u t b e c a u s em eu va b s o 叩t i o ns p e c 仃ao fb o m e o lh a sn oc h a r a c t e r i s t i c s ，s oi ti sd i f f i c u l tt o d e t e m l i n ei tb y1 1 i 曲p e 南r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h yd i r e c t l y a c c o r d i n gt ot h e f - e a t u r eo fh y d m x yi nt h eb o m e o l ，i tc o u l db ed e t e m l i n e db yh p l cd e r i v a t i z a t i o nm e t h o d b yp r e - c o l l h n nd e r i v a t i z a t i o nw i t h3 ，5 一d i n i t r o b e n z o y lc h l o r i d e ，c a t a l y z e db yt e r t i a r y 锄i n eo r p y r i d i n e s ， t h ei n t e n s i v e - u v a b s o r b e db o m e y l 3 ，5 一d i l l i t r o b e i l z o a t e w a l s g e n e r a t e d s ot h eb o m e o l i nt h ec o m p o s i t es a l v i ap e l l e t 娜d e t e 肌i n e db yt h et 、v o m e t h o d st ov a l i d a t et h ea c c u r a c yo ft h el a c t e r t h ea v e r a g er e c o v e r yo fb o m e o l i s1o1 2 a i l dr s di s3 1 1 1 1 et e s t i n gs o l u t i o nf o ra s s a yi ss 切b l e 谢“n8h o u r s 1 1 1 eh p l c e x p e r i m e n t a l r e s u l t si n d i c a t et h a tc l l r o m a t o 铲印h i cp e a k a r e a sa r e1 i n e a rw i t hq u a n t i 够o f i n j e c t i n gs 锄p l ei i lt h er a n g eo f1 10 m o lf o rb o m e 0 1 t h ea v e r a g er e c o v e d rr a t ei s 9 9 8 a l l dr s di s1 6 伽= 4 ) i tc a nb ef o u n d 行o mc o n t r a s t i n gt h a tt h em e a s u r e d c o n t e n t si nt h et w om e t h o d sa r ee q u i v a l e n t ，s o t h e yb o mc a nb eu s e df o rm e d e t e n n i n a t i o no fb o m e o lc o n t e n t a n dt h e n ，t h ec o n t e n to fp a e o l l i f l o r i ni ng 哂i n gp i l l sh a sb e e nd e t e r m i n e db y a p p l y i n gr p - h p l ct oi m p r o v em eq u a l i t yc o n t r o lm e t h o do ft h i sc h i n e s em a t e r i a m e d i c a ag o o dl i n e a rr e l a t i o n s h i pi si nt h er a n g eo f0 4 4 ，3 9 6 p gp = o 9 9 9 9 ) ，t h e i i 硕士学位论文 m a s t e r st h e s i s a v e r a g er e c o v e 珂i s9 9 2 = 5 ) ，a 1 1 dt h er e p e t i t i v er s d i s0 8 2 0 = 5 ) t h et e s t i n g s 0 1 u t i o nf o ra l s s a yi ss 协l ew i t h j n2 4h o u r s t h er e s u l t ss h o wt h a th p l cc a nb eu s e di n t h eq u a l i 够c o n t r o lo fc 1 1 i n e s em a t e r i am e d i c ac o n t a i n i n gt h ee f r e c t i v ec o m p o n e n t p a e o n i n o r i n f i n a u y ；t h eo r 苫a n o c h l o r i n ep e s t i c i d ei nc o n l p o s i t es a l v i ap e u e ti sd e t e n n i n e db y 印p l y i n gc 印i 1 1 a r yg a sc l l r o m a t o g r 印h y t h ee x p e r i m e n t a lr e s u l t ss h o wt h a tag o o dl i n e a r r e l a t i o n s h i po fm e1 1o 略a 1 1 0 c h l o r i n ep e s t i c i d e si si nt h er a j l g eo f ( 1 0 l o 4 5 o 1 0 。1 ) “m 1 ，a i l dt h ec o r r e l a t i o nc o e m c i e mi si nt h e 啪g eo f0 9 9 8 8 0 9 9 9 9 t h ea v e m g e r e c o v e 巧i si nt h e 啪g eo f7 4 2 1 0 1 5 = 6 ) ，a n dr s d i si nt h er a n g eo f2 4 8 7 t b j sm e t h o dc a nb eu s e df o rt h ed e t e m i n a t i o no fo r g a n o c h l o r i n ep e s t i c i d ec o n t e n ti n c h i n e s en l a t e r i am e d i c a k e y w o r d s ： c l l r o m a t o g r a p h y ， c h i n e s em a t e n a m e d i c a ，q u a l 时c o n t r o l ， o r g a n o c h l o r i n ep e s t i c i d e ，b o m e o l ，p a e o l l i n o r i n i i i 硕士学位论文 m a s t e r st h e s i s 华中师范大学学位论文原创性声明和使用授权说明 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下，独立进行研究工作 所取得的研究成果。除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或 集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在 文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。 作者签名： 葭曼褊 日期：五，孵石月日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权 保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借 阅。本人授权华中师范大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进 行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。同时授权 中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到中国学位论文全文数据库，并通 过网络向社会公众提供信息服务。 作者签名：黄蔓确 日期：1 力0 8 年占月日 导师签名：牟冲 日期：沙学年( 1 月涉日 本人已经认真阅读“c a l i s 高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的 学位论文提交“c a l i s 高校学位论文全文数据席”中全文发布，并可按“章程”中的 规定享受相关权益。同意论文提交后滞后：忉半年；口一年l 旦三生筮鱼! 作者签名： 黄女瑜 日期：z o d 阡6 月 日 导师签名：乓烨 日期：聊孑年月1 日 硕士学位论文 m a s t e r st h e s i s 第一章概述 1 1 中药及其制剂的质量控制概述 中药是以中医药学理论体系的术语表述其性味、功效和使用规律，并且按中医 药学理论指导其临床应用的传统药物，以中药为原料，按中医药学理论基础配伍、 组方，以一定制备工艺和方法制成一定剂型的药物制剂，称为中药制剂，即中成药。 中药及其制剂的质量控制是指以中医理论为指导，运用现代分析理论和方法研究中 药制剂质量的一门应用学科。 中药及其制剂与化学合成药及其制剂不完全相同。从原料药到制成一定剂型的 制剂有其特殊之处，如中成药的原药材有的生用，有的需经过炮制加工后投料；有 的直接打粉，有的经过提取；有的先煎，有的后下等。中成药的传统剂型很多，有 丸、散、膏、丹、酒、汤、茶、锭等；现在传统剂型基础上，结合现代制剂技术， 开发生产出一些新的剂型，如口服液、颗粒剂、片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、气雾 剂和注射剂等，使中药制剂的剂型种类日趋完整。我们把中药及其制剂按物态进行 分类，可以分为中药材及其炮制品、液体制剂、固体制剂和半固体制剂。 由于中药制剂的组成十分复杂，因此给分析测试带来一定的困难，中药制剂分 析的样品一般需要经过提取、纯化等预处理过程，以排除干扰组分的干扰。中药制 剂中有效成分的含量一般较低，因此要求检验方法有较高的灵敏度，色谱分析法的 分离效能高、专属性强、灵敏度高，特别适用于中药制剂的分析。 由于中医药学关于病因和治疗方法的理论与西医不完全一样，因此，对中药和 中药制剂的质量控制不能完全套用合成药的方法，应该在中医药学理论的指导下， 运用当代先进的科学技术，逐步探明其作用的机制，寻找评价和控制其质量的新方 法、新途径，使中国传统医学更加发扬光大。 目前，我国对中药的现代化研究及中药产业化发展极为重视，提出并已开始启 动实施“中药现代化科技行动纲要”。为加强我国中药现代化，让中药走出国门， 占领国际市场份额，提供了广阔的发展天地。要达到中药现代化必须做到中药质量 标准现代化，要加强这方面的研究力度。 总之，中药及其制剂分析的对象为化学成分复杂的混合物，有已知成分又有未 知成分。其不确定因素多，分析难度大，问题多，具有挑战性。 1 2 中药及其制剂的质量控制分析方法 中药及其制剂质量控制的基本程序一般包括：供试样品的抽取，检验依据和分 硕士学位论丈 m a s t e r st h e s i s 析方法准备，样品的真伪鉴别试验，样品的质量检查，样品中主药的含量测定和检 验记录等。其中本文主要讨论了检查和含量测定两方面的内容。 1 2 1 检查 中药及其制剂在不影响疗效，不影响人体健康的情况下，一般可以允许少量杂 质存在，而中药注射剂则不允许或只允许微量的杂质存在，但均要作限量检查，以 控制其质量。它包括杂质检查，一般理化检查项目，重金属检查等。 一般理化检查项目：包括浸出物及总固体测定，相对密度测定，旋光度测定， 折光率测定，水分测定，干燥失重测定，乙醇含量测定等。 杂质检查：包括杂质限量检查，灰分测定，酸碱度检查，氯化物检查，特殊杂 质与参伪物检查等。 重金属检查：包括铅盐、砷盐、铁盐的测定及其它重金属测定。 目前，国际上对中药及其制剂中有机溶剂残留和农药残留量限度的检查日趋严 格，这方面也是中药现代化研究的一个方面，正日益受到药物分析者的关注。 1 2 2 含量测定 由于中药所含成分复杂，加之大多数有效成分还不清楚，因此有效成分的含量 测定应用尚不普遍。在实际分析工作中根据实际情况，选择较为适当或具特征性的 成分进行分析。主要有以下几种方法： 有效成分含量测定：对于有效成分明确的中药及中成药，应进行有效成分的含 量测定以确保质量。 有效部位含量测定：某些中药及中成药，如能大致明确主要活性物质是哪一类 成分，亦可进行有效部位的测定，如总生物碱、总皂苷、总黄酮等，测定的是有效 部位的总量。 有效成分不明确的中药及中成药测定：可选择一个或几个认为可能的有效成分 或主要成分( 指示性成分) 进行测定；测定药物的总固体量，如水浸出物量，酸浸 出物量，乙醚浸出物量，以间接控制质量；对于在加工炮制，制备、贮藏过程中易 损失、破坏的成分进行含量或限量检查；可选用适当的生物效价或其它化学方法控 制质量。 贵重药材或含剧毒成分的中药测定：尽可能测定其中的有效成分或剧毒性成分 的含量。 含量测定方法主要根据待测成分的性质，并参考有关资料进行选择。目前在中 2 一， 硕士学位论文 m a s t e r + st h e s i s 药分析中应用最多的是色谱法和光谱法；其它方法如电化学方法、化学分析法、生 物化学方法等也有应用。 1 3 中药及其制剂中待测成分的提取纯化与分析方法 中药及其制剂中含有众多类别的化学成分，其药效应该是多种化学成分协同作 用的结果。因此，仅以其中某一有效成分为指标，进行定量分析，控制该药的质量， 一般不能完全反映该药物的实际疗效。这体现了中药的特点，更体现了中药现代化、 标准化的难度。尽管目前尚难于做到对中药的全面质量控制，但我们根据中医理论， 选择相关主要成分或组成，建立含量测定项目，对控制药品质量，保证每批药材或 制剂的稳定，仍然具有肯定和积极的意义。 中药及其制剂中待测成分在测定前需要进行提取分离与纯化。常用的提取方法 有萃取法，冷浸法，回流提取法，连续回流提取法，水蒸气蒸馏法，超声提取法， 超临界流体萃取等。纯化是指组分被提出后，还需作进一步的处理，以除去干扰组 分的干扰。容量法，紫外分光光度法，萃取，柱色谱法等都可用于提取液的纯化。 中药及其制剂含量测定常用的方法有化学分析法、分光光度法、薄层扫描法、 高效液相色谱法和气相色谱法等。 1 3 1 化学分析法 化学分析法包括重量法和容量法。化学分析法为经典的分析法，方法的精确度 高。但不如光谱法等仪器分析方法灵敏、专属，当测定组分含量较高时方可应用， 且多用于组成较简单的制剂，测定前一般还需进行提取、纯化等处理过程，以排除 干扰。如昆明山海棠片中生物碱的含量测定，和甘草浸膏中甘草酸的含量测定可用 重量法完成。而容量法中的提取酸碱滴定法可用于测定制剂中总生物碱的含量。 1 3 2 分光光度法 分光光度法灵敏、简便，在中药制剂分析中也有应用。由于中药制剂成分复杂， 不同组分的紫外吸收光谱往往彼此重叠、干扰，因此在测定前必须经过提取、纯化 等步骤，以排除干扰。同时应取阴性对照品在相同条件下测定，应无吸收。在中国 药典中，紫外分光光度法主要用于几个最大吸收波长较高，吸收较强的组分的含量 测定，如小檗碱、芦丁、黄芩苷、丹皮酚等。此外，比色法在中药制剂分析中也有 应用，一般用于一类成分总量的含量测定，如总黄酮、人参总皂苷的含量测定等。 由于分光光度法容易受到共存组分的干扰。所以其使用受到一定限制。 硕士学位论文 m a s t e r st h e s t s 1 3 3 薄层扫描法 薄层扫描法是用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱有吸收紫外光和可 见光的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分 数据用于药品的鉴别、检查和含量测定的方法。薄层扫描法具有分离效能高、快速、 简便等特点，因而适用于中药制剂的分析。薄层扫描法虽然精密度和准确度都不如 高效液相色谱法高，但它可以作为高效液相色谱法的补充，用于无紫外吸收，或不 能用高效液相色谱法分析的组分，如人参皂苷、贝母生物碱等。在药典中有几十种 药材和制剂采用本法测定含量。 薄层扫描法影响因素较多，测定时应注意以下几点：薄层的厚度应均匀，表 面应均匀平整，最好使用预制板；点样要准确，原点大小应一致；喷洒显色剂 应均匀，量应适中；某些斑点颜色易挥发或对空气不稳定，可用一洁净的玻板盖 在薄层板上，并用胶布加以固定；本法的线性范围一般较窄，注意应在其线性范 围内测定。 1 3 4 高效液相色谱法【h j 高效液相色谱在中药研究方面，早期主要用于中药化合物化学成分的分析。例 如1 9 7 8 年贺贤国等从中华五味子中分离得到五味子甲、五味子乙、五味子丙，解 决了薄层层析检查只有一个斑点，但药理实验毒性不稳定的问题。 h p l c 具有适用范围广，分离效率高，分析速度快，流动相和分析柱使用方式 及填料选择方便等特点，与其它传统的分析分离手段和仪器检测相比具有突出的优 越性，是中药制剂含量测定首选的方法。在中药成分的含量测定、物种鉴别、药材 加工炮制、采收和储存等方面已有大量的工作报道，因此成为中药质量控制的重要 手段之一。除了正相色谱外，反相色谱也得到广泛应用，并且出现了离子对高效液 相色谱、智能多柱高效液相色谱和络合高效液相色谱的应用。 中药制剂分析中，多使用反相高效液相色谱法【5 j ( r p h p l c ) ，即使用非极性的 固定相，其中又以十八烷基硅烷键合硅胶( o d s ) 应用最多，柱长1 5 3 0 c m ，填 料粒度5 l o l l m 。使用强极性溶剂或无机盐缓冲液作为流动相，如甲醇水，乙腈 水，甲醇磷酸盐，乙腈一硫酸盐。可适当调节组分的配比和流动相的p h ，个别流动 相中添加离子对试剂。检测器多为紫外检测器，紫外检测器灵敏、稳定。因此，一 般只有在紫外区具有吸收的组分才适宜用高效液相色谱法测定。定量方法有内标法 和外标法。在这种键合相色谱中，洗脱顺序恰好与正相色谱相反，即极性大的化合 4 硕士学位论文 m a s t e r st h e s i s 物先洗脱，极性小的化合物不易洗脱。因为键合相表面的官能团不易流失，溶剂的 极性可以很大范围内调整，因此应用范围很宽，加之由其派生的反相离子对色谱法 与离子抑制色谱法，可以分离有机酸、碱和盐等离子化合物，扩大应用范围。使用 反相色谱，制剂中极性的附加剂及其他干扰组分先流出，不会停留在柱上污染色谱 柱。若分离酸性组分，如丹参素、黄芩苷、甘草酸等，可在流动相中加入适量酸， 如醋酸、磷酸，以抑制其离解。对酸性较强的组分，也可使用离子对色谱法，常用 的反离子试剂有氢氧化四丁基铵。若为碱性组分，如小檗碱、麻黄碱等，多采用反 相离子对色谱法，在酸性流动相中加入烷基磺酸盐，有机酸盐，也可使用无机阴离 子，如磷酸盐作为反离子。 智能多柱高效液相色谱【6 】是在多柱切换高效液相色谱及智能化技术的基础上提 出的新概念，根据分析样品成分繁多、性质复杂等特点，利用切换技术的模块或分 离性能，把样品分块地切换进不同性质的色谱柱，再用合适的流动相洗脱。全过程 采用智能化控制。智能多柱高效液相色谱可以较好地解决中药成分复杂，难以全面 掌握其他成分，特别是有效成分而不便于控制其质量的问题，是中药质量控制较全 面和先进的技术。 络合高效液相色谱【7 】是通过形成络合物，利用h p l c 来分离和测定无机物的方 法，络合高效液相色谱具有灵敏度高，选择性好，能多元同时测定，并可进行价态 分开法分析等特点。中药及中药制剂中含有大量微量元素与重金属，一方面这些微 量元素参与了药物的作用，是中药发挥独特疗效不可或缺的一部分；另一方面，由 于有害重金属的存在，增加了中药的毒副作用，影响了中药的国际化进程。络合高 效液相色谱在这方面的有益探索具有积极作用。 h p l c 在中药质量控制中主要用于有效成分含量测定。其常用程序和方法如下： ( 1 1 试样的提取：药材及中药制剂在测定前应根据其剂型和待测成分的理化性 质，选择适当的溶剂和提取方法，将待测成分从剂型中提取出来。方剂小丸和冲 剂研成细粉；药材粉末，散剂直接取样，准确称取适量，选择适当溶剂。常用甲醇 或乙醇，浸泡一定时间，超声波振荡后提取或加热回流提取。口服液：常用有机 溶剂萃取，或者取适量口服液拌入适量硅藻土，混匀，干燥后用超声波振荡提取或 索氏提取。蜜丸：先剪碎，称取一定量，拌入适量硅藻土研匀，干燥，再根据待测 成分选择适当溶剂提取。 ( 2 ) 试样纯化：过大孔树脂柱，可除去糖的干扰。用聚酰胺柱纯化黄酮类 成分。生物碱类，先调p h 值至碱性，再用氯仿提取。过氧化铝和活性炭混合 柱，可除去试样中少量杂质及色素。用滤膜过滤或过p t 系列色谱预处理小柱。 5 硕士学位论文 m a s t e r st h e s l s ( 3 ) 色谱条件的选择：色谱柱：常用y w k 、y b k 、c 1 8 。流动相：常用甲醇 水、甲醇水冰醋酸、甲醇正己烷等。检测器：多为紫外检测器，根据组分的吸收 度，选择最佳波长。 ( 4 ) 定量方法：定量方法为内标法和外标法，由于中药制剂成分复杂，出峰多且 密，故多采用外标法。以试样的标准品作对照物质，相对比较以求得试样的含量， 常用工作曲线法和外标一点法。 1 3 5 气相色谱法【8 】 能够用g c 分析的中药有效成分有两类，一类是挥发性成分。如蒙药白豆蔻中 桉油精【9 1 、沉香中苄基丙酮【10 1 、土木香中土木香内酯【】等，以及许多中药制剂中的 龙脑和异龙脑( 冰片) 【1 2 1 6 】、薄荷脑【1 7 1 9 】、丁香酚【2 0 】等。另一类是通过衍生化再进 行g c 分析的成分，如经酯化后可用g c 测定齐墩果酸和熊果酸【2 l 】，经硅烷化后可 测定糖类成分【2 2 】，经甲酯化后可测定高级脂肪酸2 3 】等。复旦大学中山医院的沈锡中 研究小组采用顶空固相微萃取和g c m s 测定了血浆中的芍药酮【2 4 】；还用加压热水 萃取和固相微萃取处理样品，用g c m s 分析了菊花中的药效成分桉叶油素、樟脑 和冰片【2 5 1 。 1 4 中药及其制剂的杂质检查与一般质量控制方法 中药及其制剂的杂质检查项目有水分、灰分、酸不溶性灰分、砷盐和重金属限 量、有机磷和有机氯农药残留量，一般质量控制项目还有浸出物、挥发油、总氮测 定、辅料的质量检查、与剂型有关的检查等内容。其中，有的检查项目和方法，与 化学药品及其制剂类似，有的在中药及其制剂的检查中有特殊要求或更为必要。后 者如测定药用植物及其制剂中残留农药的量正日益引起关注。 药用植物在栽培过程中为减少虫害，常需要喷洒农药，土壤中残存的农药也可 能引入药材中。多数农药的残留期短，其中有机氯类如艾氏剂、氯丹、d d t 等以及 少数有机磷农药能长期残留，所以需要加以控制。接触农药不明的样品，一般可测 定总有机氯量和总有机磷量；使用过已知农药的样品多采用气相色谱法检查有关的 农药。 中国药典( 2 0 0 5 年版一部) 保留2 0 0 0 版有机氯农药残留量“检查 项目，如 规定甘草、黄芪的六六六和滴滴涕残留量均不得高于千万分之二，五氯硝基苯残留 量不得高于千万分之一。 6 硕士掌位论文 m a s t e r st h e s i s 1 4 1 总氯量的测定 总氯量的测定可按以下方法进行。取供试品细粉适量，加约1 0 倍量的乙腈水 ( 6 5 ：3 5 ) ，高速搅拌后过滤，取滤液用石油醚( 3 0 6 0 ) 萃取出农药，浓缩萃取液后 滴加于不含氯化物的滤纸上，待溶剂挥干后，照氧瓶燃烧法燃烧破坏。取吸收液， 按硫氰酸铵呈色法测定氯的量。 1 4 2 总磷量的测定 供试品按1 4 1 法用石油醚萃取后，为进一步除去干扰，过弗罗里硅土柱，用 乙醚石油醚( 3 0 6 0 ) 混合溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩后，用氧瓶燃烧法破坏 处理，使有机磷转化为无机磷酸盐，再用磷钼酸比色法测定。 1 4 3 农药残留分析【2 6 州】 气相色谱法分离效能高，具有高灵敏度的专属的检测器，是对残留农药进行定 性和定量分析的最常用的方法。g c 方法测定中药制剂中农药残留的方法与其他样 品基质中农药残留的测定方法相同或相似，而样品处理方法则与蔬菜或食品的农药 残留测定的样品处理方法类似。比如，田金改等人报道了g c 测定中药制剂中有机 氯农药残留的方法。先用非极性有机溶剂萃取出残留农药，一般需再过硅藻土或弗 罗里硅土柱进一步纯化。分析时多以硅氧烷类为固定液，如o v - 1 7 ，o v - 2 1 ，s e 3 0 等，氮气为载气。测定有机氯时，使用电子捕获检测器( e c d ) ；测定有机磷时， 使用火焰光度检测器( f p d ) 。 1 5 选题思想 中药质量控制和含量测定是影响中药现代化和影响中药出口的重要问题，建立 快速、灵敏、可靠、规范的检测方法己势在必行。国内外对中药中农药残留，溶剂 残留和有效成分分析的研究日益增多，但其深度和广度还较欠缺。( 1 ) 中药材中有机 氯农药残留的g c 测定较多，而中药制剂中有机氯农药残留分析较少；( 2 ) 单一做中 药质量控制或有效成分含量测定的研究较多，而对同一中药材及其制剂展开农药残 留，溶剂残留及有效成分含量测定等多层次研究较少；( 3 ) 所采用的检测方法以气相 色谱法或液相色谱法为主，而将气相色谱法和高效液相色谱法结合在一起研究同一 中药制剂的研究较少。 我国第一个中药进出口质量标准药用植物及其制剂进出口绿色行业标准已 于2 0 0 1 年7 月1 日正式实施，复方丹参滴丸成为该标准颁布后第一批达标产 7 ： 。 硕士学位论文 m a s t e r st h e s i s 品之一，成为“绿色中药”。 复方丹参滴丸是在现代高科技条件下提取丹参、三七的有效成分再加入适量冰 片而制成的新型纯中药滴丸剂，是中医的传统理论与现代药学新技术相结合的结 晶，具有剂量小、服用方便、溶出速度快、起效迅速、可直接经粘膜吸收入血、生 物利用度高、疗效高及无胃肠刺激、无明显毒副作用的特点。长期以来用于冠心病、 心绞痛等心血管疾病的治疗，现已成为国内心血管市场上的主导品牌之一。它是药 典复方丹参片的改良剂型，但无论从药理作用还是疗效上，都明显优于复方丹参 穴。 最新基础与临床研究表明，复方丹参滴丸还可用于以下疾病的预防和治疗： 糖尿病微血管并发症，如糖尿病视网膜病变、糖尿病肾病；动脉硬化斑块：消除 软斑，稳定硬斑；高脂血症：降低总胆固醇、甘油三脂，并对升高高密度脂蛋白、 降低低密度脂蛋白有一定作用；老年性高血压：对单纯性老年高血压有一定的降 压作用：高粘血症：对多种类型的高粘血症有治疗作用。 2 0 0 5 年版中国药典( 一部) 对复方丹参滴丸已用高效液相色谱法进行含量测定 m 】，测得本品每丸含丹参以丹参素( c 6 h 1 0 0 5 ) 计，不得少于o 0 8 m g 。而检查项下则只 有简单的说明：应符合滴丸剂项下有关的各项规定( 附录ik ) 。而在公开发表的论文 中，虽然关于复方丹参滴丸的药理学，药效学的实验及临床研究报道非常多，但国 内对其有害成分及有效成分的研究不多【4 6 ，4 7 】，内容主要涉及：采用高效液相色谱法 测定复方丹参滴丸中丹酚酸b 和丹参酮i i a 的含量，建立同时测定复方丹参滴丸中丹 参素和原儿茶醛含量的高效液相色谱法，采用高效液相色谱法检测复方丹参滴丸中 三七皂苷r 1 的含量，采用高效液相色谱蒸发光散射检测法( h p l c e l s d ) 测定三 七药材及其制剂中三七皂苷r1 和人参皂苷r ( 9 1 ) 、r ( b 1 ) 的含量等。仅有一篇论文 用气相色谱法测定复方丹参滴丸中冰片的含量【4 8 j 。而运用气相色谱法和高效液相色 谱法一起对其有害成分及有效成分进行分析则还未见报道。本文不仅在测定其冰片 含量方法上做了改进，更是对复方丹参滴丸中有机氯农药残留进行测定，从而更好 的对该药品进行质量控制，形成了比较系统的分析方法。 本论文的主要工作包括三个部分，首先采用气相色谱法及反相高效液相色谱法 分别测定复方丹参滴丸中冰片的含量。冰片具有挥发性，因此气相色谱法测冰片含 量的方法较为成熟【4 9 ，5 0 】。但是因为冰片化学结构无特征紫外吸收，直接采用高效液 相色谱检测比较困难。根据冰片结构中含羟基的特点，3 ，5 二硝基苯甲酰氯可作为 此类化合物的衍生化试剂，在叔胺或吡啶类化合物的催化下可和冰片反应生成具强 紫外吸收的3 ，5 二硝基苯甲酸冰片酯。这就是高效液相色谱衍生法，这种方法较少 硕士学位论文 m a s t e r st h e s i s 见于报道。故将两种方法分别用于测定中药制剂中冰片含量，以验证后者的准确性。 这一研究内容对于高效液相色谱衍生法的研究很有价值。其次以h p l c 法测定了固 经丸中有效成分芍药苷含量。以前固经丸中芍药苷的含量曾经有过报道，但采用的 是薄层扫描法，结果重现性不佳。本文采用高效液相色谱法测定固经丸中芍药苷的 含量，改进了中药制剂的质量控制方法。最后以气相色谱法测定复方丹参滴丸中有 机氯农药的残留量。中药材中有机氯农药的残留研究较多，而中药制剂中有机氯农 药残留的研究较少。复方丹参滴丸作为中药进出口质量达标产品，其有机氯农药的 残留应该符合相关规定，因此对复方丹参滴丸中有机氯残留进行检测很有意义。 硕士学位论丈 m a s t e r st h e s i s 参考文献 1 刘文英药拗毵人民卫生出版社，2 0 0 6 ，第5 版，3 4 7 3 7 0 2 】潘旭初，吴继洲刀珍国渤乒究1 9 9 8 ，9 ( 1 ) ：5 【3 】贺贤国，蒋福祥，周倩如稽饬蝴1 9 7 8 ，2 0 ( 1 ) ：7 7 4 张仁斌府缴液裙彦学荭医药研窟尹崩丝朔：上海科技出版社，1 9 8 3 ，第1 版 【5 杨军珂珍自豸嘭既密1 9 9 8 ，9 ( 2 ) ：1 2 6 6 】赵芝兰药笋荬残袭南1 9 9 8 ，16 ( 2 ) ：9 7 f 7 1 李华斌尹包刀茔检验犯舂，1 9 9 8 ，8 ( 2 ) ：1 2 3 8 】刘虎威气耜彦学方搓及应夕形化学工业出版社，2 0 0 7 ，第2 版，9 9 1 2 0 9 】张志兰等尹国民藐医药条j 考2 0 0 3 ，9 ( 1 ) ：3 8 【1 0 】王凌，季申乒掌至览2 0 0 3 ，3 4 ( 3 ) ：2 2 6 1 1 邵彩云，刘永喜尹目尾族医墨荔势亳2 0 0 3 ，9 ( 1 ) ：3 7 1 2 周祥敏，谢静尹厚! 劾纥2 0 0 4 ，1 3 ( 6 ) ：4 6 1 3 】聂少平，王远兴，谢明勇乒成药2 0 0 4 ，1 6 ( 1 ) ：8 0 【1 4 解荷芝，何志强，陈吴苏等医药t 笋烈2 0 0 4 ，2 2 ( 8 ) ：15 6 0 1 5 魏学冰乒成药2 0 0 4 ，2 6 ( 1 ) ：7 6 1 6 杨立新，崔淑莲，刘岱等尹厚荬验方材学袭盖2 0 0 3 ，9 ( 6 ) ：5 1 7 刘杰，张正行，都恒青尹医历乒寇2 0 0 4 ，1 7 ( 1 ) ：1 9 1 8 周利贤，吴陈军尹廖药矩2 0 0 4 ，7 ( 6 ) ：4 3 0 4 3 1 1 9 】刘振，潘诗海，段更利乒目旌庆药学袭，矗2 0 0 4 ，1 3 ( 1 ) ：3 2 2 0 田薇，陈朝晖，柳春晖等手戎药2 0 0 4 ，2 6 ( 8 ) ：6 2 4 2 1 】周静，刘垣升尹包新药与旌痴旁，表2 0 0 3 ，2 2 ( 1 0 ) ：5 9 6 2 2 】崔莉凤，王微彦辔2 0 0 3 ，2 1 ( 1 ) ：8 8 2 3 丁旭光，张捷莉，郑杰等纠：珍目筐 国药2 0 0 5 ，16 ( 3 ) ：2 0 2 2 4 l i n gd o n g ，c h u i l h u id e n g ，j i y a o 、7 g ，e ta 1 么，z 口，c 忍i ，押彳c 砌2 0 0 7 ，5 8 5 ( 1 ) ：7 6 2 5 l i n gd o n g ，j i y a ow a n g ，c h u n h u id e n g ，e ta 1 ，- 印f 2 0 0 7 ，3 0 ( 1 ) ：8 6 2 6 田金改，高天兵，张曙明等尹国乒药袭，舂2 0 0 0 ，2 5 ( 5 ) ：2 7 9 2 8 2 2 7 何笑荣，邹定，姜文清等尹国药笋袭毒2 0 0 6 ，4 1 ( 9 ) ：7 0 4 7 0 6 2 8 1 郭素华，廖华军乒戚至多2 0 0 5 ，2 7 ( 2 ) ：1 1 6 4 2 9 】王智华，朱静建，洪筱坤乒成至笏1 9 9 4 ，l6 ( 7 ) ：4 2 4 4 硕士学位论文 m a s t e r st h e s i s 3 0 汪锡灿，周素娣，盛娟芬等尹凰药移尤学蝴：1 9 9 6 ，2 7 ( 1 ) ：3 2 3 5 3l 】田金改，金红宇，杜庆鹏等乒卣药事2 0 0 6 ，2 0 ( 1 2 ) ：7 5 5 7 5 8 【3 2 z u i nvg ，哳i w a k ej h ，b i c c l l ic 一一c 办加聊口f o 么，2 0 0 3 ，9 8 5 ：1 5 9 3 3 h w a n gb h ，l e em r 一c 向阳m 口，d 么，2 0 0 0 ，8 9 8 ( 2 ) ：2 4 5 3 4 】b a r r i a d a - p e r i r am ，c o n c h a - g r a i l a e ，g o n z a l e z - c a s t r om j c 厅厂d 聊口f d 矿彳，2 0 0 3 ， l 0 0 8 ( 1 ) ：1 1 5 1 2 2 3 5 l i n g ，y c ，t e n g ，h c ，c a r t w n g h t c ，c 向，d 聊口f d 舌z 么，1 9 9 9 ，8 3 5 ( 1 - 2 ) ：1 4 5 - 1 5 7 3 6 c g o n c a l v e s ，m f a l p e n d u r a d a ，c 向阳m 口f d 9 7 ：彳，2 0 0 4 ，1 0 2 6 ：2 3 9 - 2 5 0 3 7 】l c a i ，e ta 1 c 厅，d m 口，d g z 么，2 0 0 3 ，1 0 1 5 ：1 1 2 1 3 8 f s m e d e s ，j d eb o e r 2 7 聆( 如么门口正c 办p 聊，1 9 9 7 ，1 6 ：5 0 3 3 9 v a n d e r h o f f gr ，v - a n z o o n e np ，c 厅加聊口幻g z 么，1 9 9 9 ，8 4 3 ：3 0 1 - 3 2 2 4 0 t o r r e sc m ，p i c oy ，m a n e sj 一加聊口，d 彳