（参考课件）疟原虫常识与镜检.ppt

,疟原虫常识与镜检技术的临床应用儋州市第一人民医院检验科范学成2010.12.13,1,主要内容：一.疟原虫的种类与分布二.疟原虫生活史与病症概述三.疟原虫的形态与镜检技术四.培训实时测验,2,“疟”字释疑：根据新华字典“疟”属多音字1.疟（读Yo）指疟疾，俗称。2.疟（读N）指疟疾，一种急性传染病，病原体是疟原虫，传染源是蚊子，为周期性发冷发热的症状。,3,历史回顾,3千多年前，“疟”的象形文字出现在隋代诸病源候论，及以后国内外某些医学家均认为疟疾是“瘴气”所引起的。,1880年法国人AlphonseLaveran在疟疾病人红细胞中发现疟原虫。1897年英国人RonaldRoss发现蚊虫与传播疟疾的关系。1948-1960年Shortt及Garnham证实了人类疟原虫的肝细胞外期。1977-1980年Lysenko和Krotoski等提出“休眠子”学说。经过一个世纪的研究，疟原虫生活史得以基本阐明。,4,疟原虫的分布与种类分布疟原虫主要分布在地球热带、亚热带各国，即非洲、东南亚、南美等地区，约有20亿人口在疫区。每年死于疟疾的儿童约100万。我国在华南、华中的某些地区，特别是云南和海南省，因此，疟疾仍是我国重点防治的寄生虫病之一。种类至今全球发现疟原虫有130多种，宿主：人类、哺乳动物、鸟类及爬行类。寄生于人体的疟原虫共有如下四种：,5,目前，我省只有间日疟和恶性疟。卫生部要求：我省应在2012年消除疟疾！,寄生于人体的四种疟原虫,6,通过按蚊叮咬进入人体,7,二.疟原虫生活史概述,子孢子,雌蚊吸血，经皮肤侵入人体,移入肝细胞,速发型子孢子迟发型子孢子（约6-12个月休眠）,无性裂体生殖,裂殖体,胀破肝C释放,裂殖子,某些因素刺激,侵入血流,进入RBC,环状体,裂体增殖,大滋养体,早期裂殖体,成熟裂殖体,裂殖子,胀破RBC,释放,经过几次,裂体增殖,雌配子体雄配子体,雌蚊吸血,进入蚊胃,雌配子雄配子,合子,配子结合,动合子,穿过胃壁,在胃壁下,卵囊,孢子增殖,侵入新的RBC,遗传基因多态性分型,自然气温16-30蚊体内P.V8-9天P.f10天,RBC外期P.V8天P.f5天,RBC内期P.V48hP.f36-48h,内潜伏期,外潜伏期,8,人疟原虫完成其生活史需要人和按蚊两个宿主。1.在按蚊体内进行有性繁殖，按蚊是疟原虫的终末宿主。2.在人体内进行无性增殖，人是疟原虫的中间宿主。,电镜下MP感染的RBC和裂殖子的释出（人卫版本科教材）,9,疟疾病症典型症状：周期性寒战、高热（T：39-40）、出汗,每次发作时间610h。热型：即周期性与红内期裂体增殖周期一致。P.v、P.o48hP.f3648h，渐不规则P.m72h贫血：A.与RBC大量直接破坏有关。B.脾亢，脾肿大、单核巨噬细胞增生所致，26倍大，巨噬细胞增多，吞噬增强。C.骨髓中RBC生成障碍。D.自身免疫破坏RBC。,10,发烧,发烧,裂体增殖,48h,隔日,PV热型与原虫发育的关系,11,海南省琼中县儿童因疟疾引起的脾脏肿大（人卫版本科教材）,12,疟原虫营养代谢胞饮、吞噬摄取营养蛋白质：氨基酸来自血红蛋白、血浆RBC珠蛋白+血红素疟色素（R除外各期消化分解Hb后的最终产物）能量：葡萄糖来自血浆，但要利用RBC中的G6PD缺乏G6PD的病人对疟原虫有选择抗性,13,疟原虫的寿命,疟原虫在人体内有一定的寿命，恶性疟原虫约1年，其中大部分只活到68个月；间日疟原虫为1年半至3年，不超过4年。人体免疫力对疟原虫的生存是有影响的，所以，这里说的疟原虫的寿命与指疟原虫在一定条件下的寿命；或者说是感染后的疟疾病程。,14,疟原虫的形态与镜检技术1.形态人体疟原虫的基本构造：胞核、胞质和包膜疟原虫形态检查三要素：胞核、胞质和虐色素胞核即细胞核或染色质粒。在正常情况下核呈鲜红色，呈圆形或不规则的颗粒状。核的结构致密，只有在个别发育阶段较为疏松。例如间日疟原虫雄配子体的核，有时因胞浆厚密或染色深蓝，使核呈暗红或紫红色。胞质被染成蔚蓝色或深蓝色，随着虫体发育长大，细胞浆逐渐增多。间日疟原虫发育到大滋养体阶段，胞浆呈阿米巴样活动，胞浆内有空泡。疟色素不着色，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而异。间日疟原虫的色素颗粒呈细小杆状，黄褐色；恶性疟原虫色素呈块状，黑褐色；三日疟原虫的色素呈砂粒状，深褐色；卵形疟原虫的色素与间日疟原虫相似。疟色素在虫体内散在分布或聚集成团块。,15,各期疟原虫形态比较英文缩写代号：MP疟原虫P.v间日疟原虫P.f恶性疟原虫P.m三日疟原虫P.o卵形疟原虫R环状体（小滋养体）T大滋养体S裂殖体G配子体P.f的T、S主要在皮下、脂肪和内脏微血管中发育，G成熟后，约在无性体出现后710天才见于外周血液中。因此，通常外周血检查只见到R和G这两期的P.f，这是鉴别P.v、P.f的要点之一。,16,被疟原虫寄生的RBC变化虫种RBC大小RBC颜色间日疟胀大变淡恶性疟正常或缩小正常,17,薄血膜中P.v的形态环状体(P.v.R),P.v.R,约占寄生红细胞的1/3，很少见到一个红细胞寄生2个环状体和一个环状体有2个核。,P.v.R,18,大滋养体(P.v.T),经810小时，虫体增大，胞质增多，伸出伪足。出现黄褐色的疟色素。红细胞胀大，变形，颜色变淡，并出现数量较多，淡红色的小点，称薛氏小点,19,成熟裂殖体（P.v.S）,红细胞：胀大，褪色，可见薛氏小点。大小：个体较大。胞浆和核：裂殖子1224个平均16个，排列不规则，核红色，胞浆浅兰色。色素：黄褐色常集于疟原虫的一边。,20,P.v.S,实体标本镜检形态（吉氏染色）,21,间日疟原虫雄配子体(P.v.G),间日疟原虫雌配子体(P.v.G),虫体较小，占满胀大的红细胞胞质浅蓝核大疏松，淡红色，多位于虫体的中央。疟色素分散,虫体较大，占满胀大的红细胞胞质致密，色深蓝核小致密，深红色，多位于虫体一侧疟色素分散,22,P.V雄配子体,P.V雌配子体,实体标本镜检形态（吉氏染色）,P.V.G的雌雄实体,23,间日疟大滋养体(T)与配子体(G)的区别,TG虫体：较小较大胞浆：边缘不规则可见空泡边缘规则无空泡核：较小、不规则较大有不染色带色素：较少、分布不匀，色素分布均匀,T,G,24,薄血膜中P.f的形态,虫体：约占RBC的1/5-1/6,环状。常见几个虫同时寄生在同一细胞核：小致密规则、常见2个核胞浆：纤细完整,P.f.R,25,P.f.G,P.f.G,26,疟原虫厚、薄血膜镜检的主要形态变异,薄血膜：原虫寄生在红细胞里,形态典型,易鉴别,但一般只用于教学和虫种鉴别.厚血膜：经染色血红蛋白溶解，轮廓消失，但有时尚留下残骸的“影子”或点彩。厚血膜由于细胞重迭，干燥缓慢，虫体形态发生较大变化,特别是小滋养体和大滋养体变化就更大，常呈分号“；”和感叹号“！”状；飞鸟“.”、“V”状。而大滋养体空泡消失，胞浆断裂成块是它的特点。裂殖体和配子体的形态则无明显变化。虽然大、小滋养体形态千变万化，但只要掌握疟原虫的核、胞浆、色素三个要点是不难鉴别的。,27,厚血膜一般门诊须检查2001000个油镜视野（相当于0.52.5l血量），才能确保镜检的敏感性和可重复性。通常的敏感性可达约1020个原虫/l血。由于厚血膜比薄血膜用血量大，涂布面积小，阳性检出率较高。查出疟原虫数是薄血膜的1525倍。因此，疟疾诊断性镜检应以检查厚血膜为主。均应查完整个厚血膜，未查见疟原虫则判为阴性。,28,间日疟原虫,恶性疟原虫,厚血膜集中视野,29,各种不同时期疟原虫形态的比较,30,薄血膜,P.v.RP.f.R大小：约占RBC的1/3约占RBC的1/5部位：RBC里少见多个虫同时寄生RBC的边缘、常见多个虫同时寄生核：大、较松、两核少见小、致密、两核多见胞浆：较粗、不规则纤细、规则,31,P.v.R对比P.f.R,厚血膜,32,厚血膜,P.v.G对比P.f.G,33,血片中的PC、杂质,注意杂质与疟原虫的区分,PC,杂质,34,镜检技术,1.采血时间：P.v发作后10小时内采血，各期（R、T、S、G）疟原虫均可查见。P.f发作时采血可查到R；发作后10天左右采血可查见G。2.厚薄片的制作：厚血膜取约4ul血液置于玻片合适位置上，用推片一角由里向外旋转2-4圈，涂成直径0.8-1厘米大小的圆形均匀血膜。薄血膜取约1ul血液置于玻片合适位置上，推成宽2厘米、长2.5厘米的血膜。同片可制作两个厚血膜，一个薄血膜（见下图）。玻片头可粘贴患者信息，亦可在薄片头以铅笔写上患者姓名、编码等。,35,3.染色（1）首先晾干血片，以甲醇或无水酒精固定薄血膜。应用吉氏染色法，每张玻片约需染液1ml。（2）配制染色工作液：1ml清洁水（Ph7.0-7.2）+1-2滴吉氏原液/血片，混匀。须现配现用。（3）将配好的吉氏染液滴入血片，并均匀分布染色10-20分钟。然后用清水轻轻将染液冲洗干净，晾干待检。4.镜检（1）一般只查厚片，薄片仅作为疟原虫分类参考和编号用。（2）可先以油镜头配合5X低倍目镜镜检，有疑问时可调换10X目镜进行观察。（3）检查时应从厚血膜的上缘开始，按下图示意的顺序方向，视野稍叠视野地查完整个血膜。,36,厚血膜镜检示意图,37,5.结果报告,阴性：报告“未查到MP”阳性：报告“查到XXXMP”厚血膜疟原虫镜检“记号”报告法：全血膜同种同期疟原虫10个以内均记实际数，10个以上但还不到平均1个/视野则记为“少”。报告格式如P.v.T.S.G,P.f.R.G。平均每个视野同种同期疟原虫：1-5个“+”如P.f.R6-10个“+”如P.f.R10-100个“+”如P.v.R.G100个以上“+”如P.f.R注意：A.抗凝血制作的血片其粘附力差，染色冲洗易于脱落，可先用生理盐水洗涤2-3次后，再制作厚、薄片。B.油镜与玻片的清洗：加清洗液（7份乙醚3份无水乙醇）适量，用搽镜纸吸去。,