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文档简介

实验四 人类基因组DNA 提取【目的】掌握人基因组DNA的抽提方法。【原理】从不同组织细胞或血细胞中提取高质量的DNA是进行基因诊断的先决条件。基因组DNA可以从任何有核细胞中提出，人外周血中的淋巴细胞是抽提基因组DNA最方便的材料。由于DNA在细胞核内是与蛋白质形成复合物的形式存在的，因此提取过程中必须将其中的蛋白质除去，SDS可将细胞膜、核膜破坏，并将组蛋白从DNA分子上分离，使核蛋白上的核酸游离。EDTA可抑制细胞中DNase活性。蛋白酶K可以用于消化细胞核膜以及核内蛋白质，RNase除去核酸中的RNA。再用苯酚氯仿抽提可进一步使蛋白质变性而与核酸分开，再经无水乙醇沉淀，最后可得到比较纯净的DNA。【试剂】外周血基因组DNA提取试剂盒【操作步骤】1. 取200ul新鲜、加入抗凝剂的血液。2. 加入20ul蛋白酶K（20mg/ml），混匀。3. 加入200ul缓冲液GB，充分颠倒混匀，70度放置10分钟，溶液应变清亮，简短离心以除去管盖内壁的水珠。4. 加200ul无水乙醇，充分振荡混匀15秒，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以除去管盖内壁的水珠。5. 将上一步所得的絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管），12000rpm离心30秒，倒掉废液，吸附柱CB3放回收集管中。6. 向吸附柱CB3中加入500ul去蛋白液GD，12000rpm离心30秒，倒掉废液，吸附柱CB3放回收集管中。7. 向吸附柱CB3中加入700ul漂洗液PW，12000rpm离心30秒，倒掉废液，吸附柱CB3放回收集管中。8. 向吸附柱CB3中加入500ul漂洗液PW，12000rpm离心30秒，倒掉废液。9. 将吸附柱CB3放回收集管中，12000rpm离心2分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。将吸附柱置于室温或50度水浴锅数分钟，以彻底凉干吸附材料中残余的漂洗液。10. 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜中间部位悬空滴加50-200ul经56度水浴预热的洗脱缓冲液TE，室温放置2-5分钟，12000rpm离心30秒。11. 离心得到的溶液再加入吸
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