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第五章 血浆脂蛋白代谢紊乱的生物化学检验,广东医学院 临床生物化学教研室 Department of clinical biochemistry Of Guangdong medical college,Major Objectives,了解脂蛋白代谢紊乱和动脉粥样硬化的关系。 熟悉脂蛋白的特征、脂代谢有关酶类的特点和生理功能。 掌握血浆脂类组成及脂蛋白的分类、主要载脂蛋白和脂蛋白受体的特征与功能、高脂蛋白血症分型及其特征,血浆脂蛋白代谢紊乱的生物化学检验。 重点血浆脂蛋白的分类和特征、高脂蛋白血症分型及其特征血浆脂蛋白代谢紊乱的生物化学检验。 难点血浆载脂蛋白和脂蛋白受体的特征与功能。,Brief Contents,第一节 血浆脂蛋白及其代谢 第二节 脂蛋白代谢紊乱 第三节 脂蛋白代谢紊乱的生物化学检验,第一节 血浆脂蛋白及其代谢,一、血浆脂蛋白的分类 二、血浆脂蛋白的组成和特征 三、载脂蛋白的组成和特征 四、脂蛋白受体和脂蛋白结合蛋白 五、血浆脂蛋白的代谢,前言,血浆脂质总量为4.0g/L7.0g/L。 包括： 1. 胆固醇(total cholesterol，TC) 游离胆固醇 (free cholesterol，FC) 胆固醇酯 (cholesterol ester，CE) 2. 磷脂 (Phospholipid，PL) 3. 甘油三酯 (triacylglycerol/triglyceride，TG) 4. 游离脂肪酸 (free fatty acid，FFA),脂蛋白(lipoprotein，LP)的概念 血浆中脂质和蛋白质相结合形成的一类大分子复合物，是血浆脂类的主要存在形式与运输形式。 绝大多数脂蛋白是在肝脏和小肠合成，并主要经肝脏进行分解代谢。,（一）超速离心法(ultra centrifugation method) 依据LP在一定密度的介质中离心时，因漂浮速率差异进行分离的方法。蛋白质含量较高，脂类含量较低者，密度较大。 （二）电泳法(electrophoresis method) 电泳技术是基于脂蛋白分子所带的电荷和分子量大小不同进行分离。,一、血浆脂蛋白的分类,超速离心法与电泳法分离血浆脂蛋白的相应关系,（）,（）,中间密度脂蛋白(intermediate density lipoprotein, IDL),离心法和电泳法结合，可将各种脂蛋白分成多种亚组分：,将LDL分为LDL14 ，将HDL分为HDL13。 LDLA：大而轻，相当于LDL12； LDLB：小而重，相当于LDL34；又称小而密LDL（small dense LDL,SLDL/SD-LDL),二、血浆脂蛋白的组成与特征 1. 化学组成 相同点： 蛋白质+脂类(TG、PL、FC、CE) 不同点： (1)蛋白质和脂类的含量不同 依蛋白质含量：HDLLDLVLDLCM 依脂类含量：CMVLDLLDLHDL (2)蛋白质(Apo)的种类不同,2. 结构特征 相同点：球形 表层：Apo、PL的极性部分 核心区：TG、CE和 PL的非极性部分 不同点：Apo在表层的覆盖程度不同,表5-1血浆脂蛋白的组成和特征,富含甘油三酯的脂蛋白：CM、VLDL、CM残粒和VLDL残粒（IDL),富含胆固醇的脂蛋白：LDL，HDL,三、载脂蛋白的组成和特征,载脂蛋白(apolipoprotein，Apo) 定义：脂蛋白中的蛋白部分。 生理功能： （1）结合和转运脂质、稳定脂蛋白的结构。 （2）修饰脂蛋白代谢有关的酶并影响其活性。 （3）作为脂蛋白受体的配体，参与脂蛋白与 受体的结合及代谢过程。,各种载脂蛋白的特征、分布及生理功能,载脂蛋白 脂蛋白中分布 生 理 功 能 AI HDL、CM LCAT辅因子， 识别HDL受体 B100 VLDL、IDL、LDL 参与VLDL合成与分解； 识别LDL受体 B48 CM 参与CM合成与分解； 运输外源性TG CI CM、VLDL、HDL 激活LCAT及LPL CII CM、VLDL、HDL LPL辅因子 E CM、 VLDL、IDL 、HDL 识别LDL受体 及肝ApoE受体 (a) LDL、HDL 抑制纤溶酶原活性,脂蛋白受体（Lipoprotein Receptor） 定义：一类位于细胞膜的糖蛋白，特异性结合脂蛋白并介导其进入细胞内代谢。 作用：参与脂类代谢,调节血脂和脂蛋白水平。 主要有LDL受体、清道夫受体、VLDL受体。,四、脂蛋白受体和脂蛋白结合蛋白,（1）LDLR结构,单链，由836个氨基酸残基组成36面体结构蛋白，分子量约115kD，由五种不同的区域构成。,识别 并结合ApoB100和/或ApoE,（一） LDL受体(LDLR) 又称ApoB-E受体,Goldstein和Brown于1973年发现，获1985年诺贝尔生理医学奖。,（3）LDLR受体的分布与性质 1.分布：广泛分布于肝、动脉壁平滑肌细胞、 血管内皮细胞、 单核细胞和巨噬细胞。 2性质 (1) 配体为ApoB100和ApoE。 (2) LDLR与LDL亲和力最高，也可结合VLDL，IDL，CM残粒。,LDL受体途径（LDL receptor pathway）, 1定义：由LDLR介导的、通过细胞膜吞饮作用而摄入LDL等含ApoB100、ApoE的脂蛋白的过程。,LDLR胞吞作用示意图,2.基本步骤（以摄入LDL为例）： 血浆LDL+细胞膜上LDLR LDL-LDL受体复合物，并相继形成“被膜小窝”、被膜小泡 LDLR与LDL解离，参加下一次循环；而被膜小泡与溶酶体融合后，LDL被降解:,LDL入细胞被降解： Apo 氨基酸 CE FFA+FC（代谢、利用） TG 甘油一酯+FFA,蛋白酶 酸性酯酶 LPL,3LDLR途径的调节,主要受细胞内FC浓度负反馈调节。 若胞内FC浓度升高 ，则 ： （1）减少细胞自身的胆固醇合成。 （2）促进FC变成CE储存。 （3）下调LDLR基因的表达，减少LDL 的摄取。,4.LDLR途径的生理意义：,反馈抑制内源性胆固醇和LDLR合成，避 免细胞CE过量堆积。,受体对LDL具有高度亲和力，使细胞 在血浆胆固醇浓度极低条件下也能得到 所需的胆固醇。 是肝清除VLDL残粒和CM残粒的途径 之一。,（二）VLDL受体 （1）结构与LDLR相似， 含5个结构域； （2）分布于肝外组织（如心肌、骨骼肌）； （3）配体为ApoE；结合含ApoE的脂蛋白， 如CM残粒、VLDL，IDL。 （4）不受细胞内FC浓度负反馈调节，脂蛋白的 摄取不受限制，利于巨噬细胞泡沫化，可 能促进早期As斑块的形成。可能与肥胖形 成有关。,1.结构 （1）糖蛋白，220KD， 三聚体。 （2）与LDLR相反，其N-末端在膜内侧，而C-末端在膜外侧。已知的、型均含6个结构域。,（三）清道夫受体(scavenger receptor, SR ),2.清道夫受体的配体 （1） 主要配体：修饰的LDL，如乙酰化LDL、氧化LDL（ox-LDL）; VLDL, LDL , HDL等。 （2）其它配体 多聚鸟苷酸、多糖、 某些磷脂、细菌脂多糖（内毒素） 3.清道夫受体的功能 1. 清除细胞外液中的修饰LDL，尤其是ox-LDL，清除血管过多脂质和病菌毒素等。,（四）LDL受体相关蛋白（LRP）,分布广泛，如肝细胞、巨噬细胞、平滑肌细胞、神经细胞。 功能： 特异性结合CM残粒、VLDL残粒。 能识别多种配体（蛋白酶一蛋白酶抑制剂、毒素的受体、某些病毒、乳铁蛋白、ApoE等）。 LRP与AS的形成有密切关系： LRP参与 LDL的氧化过程，与血管损伤有关。 LRP与泡沫细胞的生成有关。,（五）HDL受体和HDL结合蛋白,HDL受体（HDLR）：可特异性识别并以高亲和力与HDL结合，引发下游的生物学效应。 HDL结合蛋白（HBP）：可与HDL结合，但不产生或只产生较弱的效应。,功 能： 1. 参与HDL中的CE和VLDL、CM及残粒中TG、PL的转移。 2. 参与HDL的形成。,脂质转运蛋白（lipid transfer protein，LTP）,（六）胆固醇酯转运蛋白（CETP） (Cholesteryl Ester Transferase Protein),CETP对胆固醇的逆转运过程,五、血浆脂蛋白的代谢,（一）脂蛋白代谢相关酶,脂蛋白脂肪酶 (lipoprotein lipase, LPL) 肝脂酶（hepatic lipase, HL） 或肝甘油三酯脂肪酶（HTGL） 卵磷脂胆固醇脂酰转移酶： (lecithin-Cholesterol acyl transferase, LCAT),来源：由脂肪细胞、心肌、骨骼肌和乳腺细胞以及巨噬细胞等合成和分泌的一种糖蛋白。 生理功能： (1) 催化TG分解为FFA和甘油一酯，供组织氧 化供能和储存（主）。 (2) 分解PL，如卵磷脂、磷脂酰乙醇胺。 (3) 促进脂蛋白之间PL、Apo和Ch的转换。 (4) 促进CM残粒的摄取。 辅助因子：ApoC,1.脂蛋白脂肪酶 (lipoprotein lipase，LPL),2.肝脂酶（HL / HTGL） 来源：肝实质细胞，糖蛋白，53kD ApoA为HL的激活剂；被雄性激素 (+)和雌性激素、肾上腺素等 () HL的生理功能 (1) 水解VLDL及其残粒、CM残粒中的TG（主） (2) 调节Ch逆转运； (3) 使肝内VLDL LDL。,3.卵磷脂-胆固醇酰基转移酶(LCAT) (1) 肝合成，糖蛋白，含416个aa残基，6.3kD。 (2) 功能：催化HDL中的FCCE，CE进入 HDL核心储存(主要) ，参与Ch逆向转运。 (3) 辅助因子：ApoA；,（二） 血浆脂蛋白代谢,1.外源性代谢途径：指食物中摄入的胆固醇和甘油三酯在小肠中合成CM及CM代谢的过程 。,2.内源性代谢途径：指肝脏合成VLDL，然后转变为IDL和LDL，并被肝脏或其它器官代谢的过程,3.HDL的代谢 ：胆固醇的逆向转运,HDL参与将胆固醇从外周组织运输到肝脏的过程。,CM代谢,VLDL、IDL、LDL代谢,HL,3HDL代谢,肝和小肠合成未成形HDL, 继而获取CM、VLDL表层的PL和ApoA而变成圆盘状的新生HDL(nascent HDL, HDLn) HDLn从末梢组织细胞膜获得FC，经LCAT作用生成CE进入HDL内部，形成成熟型HDL3。 HDL3在CETP介导下，与VLDL、LDL交换CE/TG形成球型HDL2。 HDL2中的TG经肝脏的HL水解作用后， HDL2再变成HDL3。,参与脂蛋白代谢的主要生化因素,1.脂蛋白受体等： HDLR、VLDLR、 LDLR、SR、LRP,2. 酶：LPL、HL、LCAT,3.脂质转运蛋白：CETP,脂蛋白代谢紊乱： 高脂血症 低脂血症 低HDL血症 高HDL血症,第二节 脂蛋白代谢紊乱,一、高脂血症,高脂血症（hyperlipidemia)： 指血浆中Ch和（或）TG水平升高，是血浆中某一类或某几类脂蛋白水平升高的表现。 高脂蛋白血症(hyperlipoproteinemia)： 指血浆中CM、VLDL、LDL、HDL等脂蛋白有一种或几种浓度过高的现象。,黄色瘤:含有脂类的细胞在真皮或皮下组织内聚集，常在皮肤表面形成黄色的瘤状损害，因其颜色多为黄色、桔黄或棕红色而得名。,高脂血症的主要临床表现： 1.黄色瘤（脂质在真皮内沉积）。 2.动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS),原发性高脂血症 指原因不明的高脂血症。 继发性高脂血症 继发于全身系统性疾病，高糖或高脂、嗜酒、服用某种药物等也可诱发高脂血症。,1.基于是否继发于全身系统性疾病,（一）高脂血症的分型,遗传缺陷分类：,1. 脂蛋白合成，组成或分泌缺陷 2. 载脂蛋白结构缺陷 3. 酶类缺陷： 如LPL和LCAT缺陷 4. 细胞识别、内吞和降解脂蛋白缺陷。,2. WHO分型，1970,类型 脂 蛋 白 变 化 血脂变化 I CM增加 TG TC正常或 IIa LDL增加 TG正常 TC IIb LDL及VLDL增加 TG TC III IDL增加（ 宽带 ） TG TC IV VLDL增加 TG TC 正常或 V VLDL及CM增加 TG TC,低高密度脂蛋白血症：血清HDL-C水平减低,3.简易分型,高胆固醇血症：血清TC水平增高。,混合型高脂血症：血清TC与TG水平均增高。,高甘油三酯血症：血清TG水平增高。,高脂血症分型的生化检验依据为： (1) 血清(血浆)外观：在4冰箱放置16hr 后的血清外观。 (2) 血脂浓度：血清TG、TC含量 (3) 血清LP电泳图谱：某种(些)LP含量(%) 是否升高(相应区带是否深染、加宽?),血清（浆）静置试验,将患者空腹12h后采集静脉血分离出血清置4冰箱中过夜(16-24h)，然后观察其分层现象及混浊程度。,正常空腹血清应清澈透明。,高HDL血症,定义：血浆HDL-胆固醇（HDL-C）含量超过2.6mmol/L。 主要病因：CETP及HL活性降低。 CETP缺陷，HDL的CE蓄积，HDL增多； HTGL活性降低，HDL2HDL3转换过程减慢，HDL被肝细胞摄取减少，浓度增加。 分两类：原发性、继发性,二、低脂蛋白血症(自学）,诊断（满足下面三项之一） 血清TC3.3mmol/L TG0.45mmol/L LDL-C2.1mmol/L 病因 原发性：ApoA缺乏或变异、LCAT缺乏 症、无-脂蛋白血症（Tangier病）、无-脂蛋白血症、低-脂蛋白血症等。 继发性：内分泌疾病,三、脂代谢紊乱与动脉粥样硬化,2019/8/20,59,可编辑,动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）： 指动脉内膜的脂质、血液成分的沉积，平滑肌细胞及胶原纤维增生，伴有坏死及钙化等不同程度病变的一类慢性进行性病理过程。 AS主要损伤动脉壁的内膜，严重时累及中膜。 引发冠心病、缺血性脑卒中.,冠心病的主要危险因素,高血压,年龄,冠心病家族史,血脂紊乱,吸烟,糖尿病,不可改变的,可改变的,NCEP. Circulation 1994;89:13291445. Eur Heart J 1994;15:13001331. Wood D et al. Eur Heart J 1998;19:14341503.,冠心病,(一) 脂蛋白残粒,CM残粒与VLDL残粒（IDL）,凡能增加动脉壁Ch内流和沉积的脂蛋白如LDL、-VLDL、ox-LDL等，都是导致AS的因素。,一、致动脉粥样硬化的脂蛋白,(二) 变性的LDL,定义：LDL的蛋白组分经化学修饰，其正常的立体构像发生改变，生物学活性也有相应的变化，这种经化学修饰的LDL称为变性LDL或修饰LDL .主要包括乙酰LDL、氧化LDL（ox-LDL）和糖化LDL。 通过SR途径清除，使巨噬细胞内Ch大量堆积形成泡沫细胞。 ox-LDL对单核细胞有趋化作用；促使凝血酶形成，引起血小板聚集，血栓形成。,(三) B型LDL（小而密LDL ，sLDL ）,LDL中TG被水解，LDL便转化为sLDL。 富含TG的sLDL颗粒较小，与LDLR亲和力较低，在血浆中停留时间较长，有更多机会进入动脉内膜下。 内膜下的sLDL比大而轻的LDL更易被氧化而促进泡沫细胞形成。,(四) Lp(a)与AS,Lp(a)是AS的独立危险因素。 apo(a)与纤溶酶原竞争性抑制与内皮细胞表面结合，有助于血栓形成。 早期病损中，与纤溶酶原竞争性结合纤维蛋白并聚集陷入病损区栓子中； 绝大部分与病损部位紧密结合，增加局部胆固醇的沉积； 与动脉壁平滑肌细胞糖胺聚糖结合，促进巨噬细胞吞噬胆固醇。,二、抗动脉粥样硬化的脂蛋白,血浆HDL水平与AS性心脑血管疾病的发病率呈明显负相关： 血浆HDL-C每下降0.03mmol/L，冠心病事件的相对危险性增加2%3%。 抗氧化，抑制内膜下ox-LDL生成； 抑制单核细胞粘附；诱导内皮细胞NO的合成，减轻AS早期不正常的血管收缩；,第三节 脂蛋白代谢紊乱的 生物化学检验,一、血浆脂质测定 二、血浆脂蛋白测定 三、血浆载脂蛋白测定 四、血浆脂代谢相关酶的测定 五、脂质相关蛋白基因突变分析 六、血脂和脂蛋白检测的临床应用,一、血浆脂质测定,（一）TG测定 1化学法 2酶法测定 （二）TC测定 1化学法 2酶法测定 （三）FFA测定 （四）磷脂测定,标本采集,空腹12hr后采血，72hr不饮酒，否则检测结果升高； 及时分离出血浆（清）标本，以免红细胞膜PL分解产生FG，或者抗凝剂存在导致血浆稀释而影响检测结果；,（一） 血清（浆）甘油三酯测定,基本操作：,1.化学测定法,TG的抽提分离（有机溶剂）：提取和纯化TG； 皂化：TG水解生成甘油；多采用KOH作皂化剂。 氧化：过碘酸在酸性溶液中将甘油氧化成甲醛和甲酸。 显色定量甲醛。,4、显色：甲醛的定量主要有两种方法：,甲醛与变色酸在硫酸溶液中加热生成紫色化合物，570nm测定吸光度。灵敏度高，颜色稳定。,甲醛与乙酰丙酮反应生成黄色的二乙酰二氢二甲基吡啶，412nm测定吸光度。,2酶 法 测 定 （1）磷酸甘油氧化酶法（GPO-PAP法）,评价：操作简便，快速准确，适合自动化分析，线性范围较宽。 所测结果包括了血清中FG，如何解决？,去除FG干扰可用下列方法： 1.外空白法：同时用不含LPL的酶试剂测定FG作空白。需做双份检测，成本加倍。 2.内空白法：又称两步法或双试剂法 将LPL和4-AAP组成试剂2，其余部分为试剂1，为中华医学会检验分会推荐方法。,血清TG一般随年龄增加而升高，体重超过标准者往往偏高。 血清TG参考范围： 成人0.45mmol/L 1.69mmol/L 合适范围：1.69mmol/L； 升高：1.69mmol/L。,【参考值】,【临床意义】,原发性高TG血症:多有遗传因素,如家族性高TG血症； 继发性高TG血症:DM、糖原累积病、甲减、肾综、妊娠、口服避孕药、酗酒等。 富含TG脂蛋白是CHD的独立的危险因子。 TG增加表明患者存在MS，需治疗。 TG降低较少见，见于甲亢、肾上腺皮质功能减退和肝功能严重损伤。,（二）血清（浆）总胆固醇测定,化学法,酶法,血清中胆固醇：CE占70；FC占30,1化学比色法,四个阶段：抽提；皂化；毛地黄皂苷沉淀纯化；显色比色。,代表性的方法： （1）硫磷铁法（Bowman法）：用无水乙醇沉淀蛋白质，提取Ch，提取液中加硫磷铁试剂显色。 （2）Abell法：血清中加入氢氧化钠乙醇溶液，使CE皂化为FC；加入正己烷-水提取后，FC进入正己烷相，以醋酐-硫酸试剂显色定量。国际公认的参考方法。,2.酶法测定,特点：,常规方法；特异性好，精密度和灵敏度达临床实验室的要求； 适合手工操作和自动分析； 出现了不同程度的基质效应。,测定血清TC的常规方法： 胆固醇氧化酶过氧化物酶4氨基安替比林酚法（COD-PAP法）,CHER：胆固醇酯酶，COD: 胆固醇氧化酶 原理： CEH2O FCFFA FCO2 4-胆甾烯酮H2O2 H2O24-AAP酚 醌亚胺H2O,方法学评价：,主要缺点是：,优点：灵敏度高、准确度高、精密度好，线性范围宽。,某些CHER对CE的水解不完全，不能用纯胆固醇结晶配制的溶液作为TC分析的校准液，而应以准确定值的血清作为标准。,表面活性剂，吐温-40可以干扰CHER的作用，而聚乙烯醇6000可使结果提高12。 表面活性剂的作用：促进Ch从脂蛋白中释放出来。,本法具有氧化酶反应途径的共同缺陷，易受到一些还原性物质如尿酸、胆红素、维生素C和谷胱甘肽等的干扰。,【参考值】,血清TC参考范围： 成人2.85mmol/L5.69mmol/L （110mg/dl220mg/dl） 合适范围：5.17mmol/L 边缘升高：5.20mmol/L5.66mmol/L 升高：5.69mmol/L,影响TC水平的因素,年龄与性别； 长期的高胆固醇、高饱和脂肪酸和高热量饮食可使TC增高； 遗传因素； 其它：缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使TC升高。,TC除了作为高胆固醇血症的诊断指标之外，不能作为其它任何疾病的诊断指标。 TC与冠心病的发病率呈正相关. TC升高：各种高脂蛋白血症、梗阻性黄疸、肾病综合征、甲低、慢性肾衰、糖尿病等。此外，吸烟、饮酒、紧张、血液浓缩等也可使TC升高。 TC降低：各种脂蛋白缺陷状态、肝硬化、恶性肿瘤、营养不良、巨细胞性贫血等。,【临床意义】,（三）FFA测定 (自学),血浓度很低，成人0.4mmol/L0.9mmol/L；儿童和肥胖成人稍高。受脂代谢、糖代谢和内分泌功能等因素影响。 半寿期为1min2min。血清中的FFA是与清蛋白结合进行运输。 FFA测定标本：4分离和测定血清。贮存的标本仅限于24hr内。因血中各种脂肪酶易使血中TG和PL分解成FFA，使血中FFA上升。,血清FFA测定方法： 1非酶法测定 包括滴定法、比色法、原子吸收分光光度法和高效液相层析法。前三种方法准确性差，高效液相层析法仪器太昂贵，不便于批量操作。 2酶测定法 主要用脂肪酶测定。可分别定量测定产物乙酰CoA、AMP或辅酶A。结果准确可靠快速，易于批量检测。,（四）磷脂测定(自学),血清中PL包括： 卵磷脂(60)和溶血卵磷脂(210)； 磷脂酰乙醇胺 (2)； 鞘磷脂(20)。,血清PL定量方法: 1化学测定法 抽提分离；灰化； 显色定量。 2酶测定法 利用磷脂酶分解测定其产物进行定量，多采用磷脂酶D(PL-D)。该法快速准确，便于自动化批量检测。,二、血浆脂蛋白测定,（一）电泳法 （二）超速离心法 （三）脂蛋白胆固醇测定 1沉淀分离法 2均相测定法 3间接法 （四）Lp(a)测定,（一）电泳法,原理：不同脂蛋白因蛋白质含量不同、其电荷量不同，故可用电泳方法进行分离，并根据血浆脂蛋白电泳迁移率不同予以判断确认。 方法：分为预染法和电泳后染色法两大类。 预染法：操作较简单，分离效果直观。 将待测血清和苏丹黑染料按一定比例混合进行预染处理，离心后取上清液进行电泳分析。 电泳后染色法：用电泳方法先将血浆脂蛋白各成份分开，再用苏丹黑或油红O进行染色。,预染法： （1）预染、电泳: 亲脂染料如苏丹黑B等进行预染再电泳； （2）扫描、计算：置于光密度计内进行扫描，计算出各种脂蛋白的百分比，该数值乘以血浆总脂量，即可求出-脂蛋白、-脂蛋白和前-脂蛋白含量。 电泳支持物 ： 醋酸纤维薄膜、琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶。,血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳： 正常参考值(百分比)： -脂蛋白 25.7%4.1% 前-脂蛋白 21.0%4.4% -脂蛋白 53.3%5.3% 乳糜微粒：阴性。,【参考值】,（三）血浆脂蛋白胆固醇测定,脂蛋白中胆固醇含量较为稳定，因此目前以测定脂蛋白中胆固醇总量的方法作为脂蛋白的定量依据。 高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C) 低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C) 极低密度脂蛋白-胆固醇(VLDL-C),1. 沉淀分离法,原理：在不同pH值条件下，脂蛋白与聚阴离子、2价金属离子(Mn2+，Mg2+、Ca2+、Ni2+、Co2+)结合形成复合物沉淀，以达到分离定量各种脂蛋白的目的。,方法： （1）肝素-锰 沉淀血清中VLDL和LDL，离心沉淀，HDL则留在上清液，再定量HDL-C量。 （2）聚乙烯硫酸盐 沉淀LDL，离心去上清液留沉淀。再定量沉淀其中的LDL-C，即血浆的LDL量。 （3） 磷钨酸-镁法 常规方法 评价：操作简单，无需昂贵的仪器，是临床应用的检测方法。,2均相测定法 （1）HDL-C测定,原理：利用脂蛋白与表面活性剂的亲和性差异进行测定。 CM、VLDL、LDL在多聚阴离子存在下与试剂发生凝集形成遮蔽圈，抑制其表面的FC反应或试剂与CM、VLDL、LDL中的Ch反应生成H2O2，并将H2O2清除； 试剂与HDL形成可溶性复合体，使HDL中的胆固醇直接与酶试剂反应。,血清HDL-C参考范围： 成年男性 1.16mmol/L1.42mmol/L （ 45mg/dl 55 mg/dl） 女性 1.29mmol/L 1.55 mmol/L （50mg/dl60mg/dl） 危险阈值0.90mmol/L,【参考值】,【临床意义】,HDL-C与冠心病发病呈负相关， HDL-C1.55mmol/L是冠心病的“负”危险因素。 HDL-C0.9mmol/L是冠心病危险因素。 HDL-C下降多见于脑血管病、DM、肝炎、肝硬化病人。也见于吸烟、肥胖者及高TG血症。 适量饮酒、长期体力劳动和运动HDL-C升高。,（2） 血浆LDL-C测定SUR法,SUR法检测原理： 试剂中的表面活性剂1能改变LDL以外的脂蛋白结构并解离，所释放出来的胆固醇与酶试剂反应，产生的H2O2在缺乏偶联剂时被消耗而不显色； 试剂中的表面活性剂2使LDL解离释放胆固醇，参与Trinder反应而显色，色泽深浅与LDL-C量呈比例。,血清LDL-C参考范围： 成人 2.07mmol/L3.11 mmol/L （80120 mg/dl） LDL-C合适范围：3.10mmol/L； 边缘升高：3.13 mmol/L 3.59mmol/L； 升高：3.62mmol/L。,【参考值】,【临床意义】,LDL-C增高是AS发生发展的主要脂类危险因素。 因TC水平也受HDL-C水平的影响，所以以LDL-C代替TC作为冠心病危险因素指标。 美国全民胆固醇教育计划(NCEP) 的成人治疗专家组(ATP ) 均以降低LDL-C 为首要治疗目标值。,3间接法,指利用血清中TC、TG和HDL-C含量，按公式推算出LDL-C的量。 Friedewald于1972年发明的一个经验式： LDL-C=TCHDL-CTG/2.2（以mmol/L计） 或 LDL-C=TCHDL-CTG/5（以mg/dl计）。 应注意运用这一公式有如下条件： 空腹血清不含CM TG浓度在4.60mmol/L以下 型高脂血症除外,（四）Lp(a)测定,Lp(a)测定可有两类方法,1.测定Apo(a) 2.测定Lp(a)-C 目前大都用免疫学方法测定。避免或减少因为抗原Apo(a)多态性不同所造成的Lp(a)定量的准确性。,正常人群的Lp(a)水平呈明显的偏态分布，Lp(a)水平高于医学决定水平（300mg/L），冠心病危险性明显增高。,【参考值】,【临床意义】,血清Lp(a)水平是AS的独立危险因素。,三、血清载脂蛋白测定,免疫化学法：,单向免疫扩散（RID） 电免疫分析（如火箭电泳法） 放射免疫分析（RIA） 酶联免疫吸附分析（ELISA）等,早期,目前：,目前较适合临床实验室的是免疫浊度法，包括