课件：发光免疫检测技术的临床应用及其应注意的问题.ppt

发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题,*妇幼保健院 2009-6-15,由于化学反应（通常是氧化）产生电子能级处于激发态的物质，后者通过跃迁释放能量产生光子，从而导致的发光现象。,化学发光 （Chemiluminescence）,生物发光和化学发光均属于冷光，即发光不是由于发光体温度升高所至，发射波长也与其温度无关,单光子计数器是目前高灵敏度 发光分析仪的核心部件,光电倍增管,高压,高速放大器,高速比较器,高速分频器,发光样品 产生光子,激发光阴极 产生光电子,在阳极上形成较强信号,脉冲信号,相对发光单位 数字脉冲(RLU),在各打拿极之间得到 能量和数目的倍增,光生物学技术的应用范围,军事侦测 公安稽查 卫生检疫 药物筛查 医学诊断 环境检测 航天遥感 生命科学 ,已成为现代生物技术最活跃的领域之一,性激素六项,性激素,在男、女性的不孕不育、女性生殖内分泌功能紊乱、月经不规则、闭经等疾病的诊治中，生殖激素的测定是必须的手段之一。 临床上经常测定的激素有：垂体分泌的泌乳素（PRL），促性腺激素（ 卵泡刺激素 FSH、黄体生成素LH） ，性激素（雌激素E、孕激素P、雄激素T）。,性激素 定义：由性器官或肾上腺分泌的,维持和调节体内正常生命、生理活动和生殖功能的一类激素。,性激素检测最常见的临床应用,青春期前儿童性早熟，判断真性性早熟和 假性性早熟 青春期延迟及性幼稚症的诊断和判别 女性闭经和不孕症，有助于查找病因 女性多毛症、多囊卵巢综合征的诊断 男女性高催乳素血症的诊断 男性性功能减退和不育症，有助于查找病因 更年期综合征和卵巢功能衰竭的判断,垂体泌乳素（PRL）,PRL（Prolactin）是由垂体前叶PRL细胞合成和分泌的，除妊娠和哺乳外，人PRL含量极少。由下丘脑分泌的PRL释放因子（PRF）、PRL释放抑制激素（PIH）调节。 生理效应 促进乳腺生长、发育和分泌乳液。,临床意义 升高： 1、 高PRL血症可引起性腺机能低下（抑制垂体分泌 FSH、LH，抑制性腺分泌雌激素）， 女性出现黄体期期缩短，随后出现不排卵，月经稀发和闭经，不育；男性会出现睾酮分泌减少及生精障碍，表现为性欲减退，阳痿及不育 2、垂体泌乳素瘤：90%PRL升高。 3、肝、肾疾病：PRL代谢清除减少 4、胸壁病变：乳癌、乳头刺激、胸壁损伤、带状疱疹等 5、糖尿病、原发性甲减： ：也会引起PRL增高,减低： 1、垂体前叶功能减退：席汉氏综合症等。 2、药物：如左旋多巴能抑制PRL的释放。 ：PRL 升高是月经紊乱、闭经、不孕不育最常见的 原因之一。,促性腺激素（GTH）,垂体分泌的促性腺激素（GTH）有黄体生成素（ Luteinizing hormone,LH）和卵泡刺激素（Follicle stimulating hormone,FSH）。,生理效应 女性：FSH主要生理功能是刺激卵泡的生长和卵巢颗粒细胞的增生，在卵泡期LH和FSH共同促进卵泡的成熟，刺激卵巢分泌雌激素和孕酮，LH作用于成熟卵泡使它排卵。在月经中期 LH急剧升高，排卵后持续的LH分泌刺激黄体生成孕酮。,男性：FSH刺激睾丸支持细胞的发育，促进生殖细胞的发育分化产生成熟的精子。LH的主要作用是促进睾丸间质细胞的增生，促进其合成分泌雄性激素睾酮。,临床意义 增高: 1 .垂体促性腺激素瘤、多囊卵巢综合症。 2 .卵巢功能早衰、性腺发育不全 3 .更年期、先天性性腺机能低下症。 4 .真性性早熟 减低： 1、垂体性闭经 2、下丘脑性闭经 3、假性性早熟,雌激素（Estrogen, E）,成熟卵巢合成分泌许多激素，包括雌激素（E）、孕酮（P）等。部分E可来源于睾丸、胎盘、肾上腺等。其17位上的氢被羟基置换则为雌二醇（E2）、加上16位上被取代则为雌三醇（E3）、17位上的氢被酮基置换则为雌一醇。 正常育龄妇女E2的活性最强，E2:E3:E1=100:30:20。绝经后E1/E2 值显著增高，E1为绝经妇女体内主要的雌激素。E3为E1、E2的降解产物，活性最弱，但孕期是非孕期的几百倍乃至上千倍。故孕晚期测定E3 对评价胎儿、胎盘功能具有重要价值。,雌二醇（E2） 生理效应 (1)促进女性正常的性成熟，刺激阴道、子宫、输卵管及第二性征的发育。刺激乳腺的发育。 (2)促进子宫平滑肌的生长及子宫内膜的发育，维持正常的月经周期。 (3)在排卵调控中起核心作用。 (4)对蛋白质、糖、脂肪、水、电解质代谢有一定的 影响。 (5)促进女性性欲、维持女性性功能 (6)使女性有生育能力,临床意义 E2增高 生理性增高: 排卵期和黄体期比卵泡期高得多,妊娠期E2逐渐上升,分娩以后才逐渐下降到正常水平。 病理性升高： 1、多胎妊娠：胎盘合成雌激素增多。 2、男性女性化、肥胖男子、男性吸烟者 3、肝硬化、系统性红斑狼疮、冠心病。 4、卵巢肿瘤、无排卵功血。 E2减低 1、妊高症 2、原发性卵巢疾病：性腺不发育、卵巢功能早衰。 3、葡萄胎、卵巢囊肿。 4、继发性性功能低下：下丘脑或垂体疾患使促性腺激素分泌不足，导致E2下降。 5、下丘脑、垂体、卵巢性不孕及闭经，绝经期等。,孕酮（ P）,孕酮是卵巢分泌的，妊娠期主要来源于胎盘，男性主要来自肾上腺。,生理效应 1、对子宫的作用：促进子宫肌肉松弛、使子宫内膜转变为分泌期、维持妊娠。 2、对乳腺的作用：使乳腺腺泡发育成熟。 3、对垂体、下丘脑促激素的分泌有反馈作用。 4、产热作用：兴奋下丘脑体温调节中枢，排卵后基础体温可升高0.51.0，临床上将这种基础体温的变化作为判断排卵期的一个标记。 5、促进新陈代谢。,临床意义 P 增高： 葡萄胎、轻度妊高症、多胎、卵巢瘤等。 P 减低： 无排卵月经、卵巢功能减弱、闭经、黄体功能不全，胎儿发育迟缓，死胎，严重的妊高症。,：主要是判断是否有排卵，黄体功能是否健全，因此要求在月经前一周采血。,睾酮（T）,睾酮为循环中的主要雄激素。是睾丸间质细胞在LH的作用下，连续不断的生成和分泌睾酮。在女性主要由肾上腺产生。,生理效应 1、刺激外生殖器生长，维持男性性欲、性功能。 2、刺激第二性征的产生并维持它们的正常状态。 3、促进蛋白质的合成并抑制其分解。 4、与FSH协同作用维持正常的生精作用。 5、对垂体LH分泌有反馈性抑制作用。 6、促进肾脏合成促红细胞生成素，刺激骨髓造血。,临床意义 T 增高： （1）睾丸良性间质细胞瘤； （3）畸胎瘤； （4）女性男性化、女性多毛症。 （5）卵巢肿瘤、多囊卵巢综合症。 （6）性早熟 T 减低： （1）性功能减退； （2）手术、感染、病理损伤等造成睾丸功能低下，引起T分泌减少。 （3）男性更年期。 （4）性幼稚、垂体功能低下、甲低、男性乳房发育等。,生殖激素测定中需注意的问题,1、年龄：患者的年龄是判断性激素、促性腺激素是否正常的重要依据。青春期前性激素、促性腺激素均处于低水平，女性更年期后性激素明显减低，而LH、FSH在5065岁间持续高于40IU/L，而65岁以后随着垂体的衰老，LH、FSH逐渐下降，到80岁只有幼儿的水平。,2、周期：月经周期是判断女性性激素是否正常时需考虑的问题。如要考察是否排卵，应在月经中期测定LH峰值。观察黄体功能应在经前1周左右采血。女性生殖激素的申请单上必须注明末次月经时间，以便分析结果时参考。,女性月经周期中各种激素浓度变化,3、综合判断结果：需几个激素同时测定，联合分析。如雌激素水平持续低于100pmol/L ，究竟是卵巢本身功能问题还是垂体或下丘脑问题，只有与LH、FSH同时测定才能判断。如这时 LH、FSH持续高于100 IU/L，则表明卵巢本身出了问题，否则，是垂体以上部分功能问题，进一步诊断需作垂体兴奋试验。,总的来说，性激素的分泌虽不似肾上腺皮质激素和生长激素的分泌那样存在明显的昼夜节律，但每日中仍有一定波动。通常清晨高于下午，青春期这种差异更大。为便于比较，一般均在晨8点取血。必须指出，上述时间取样测定的结果，虽能代表取样时的血清浓度，但是并不一定能真实地反映性腺的内分泌功能，特别是女性，更存在着月经周期中不同期的每一天的差异，有时这种天间差异可相当巨大，如排卵日与前后日间。,小结,因此为真实地了解性激素内分泌功能，除确定病人的发育阶段、生育期女性取样日处于月经周期的什么阶段外，大多需进行必要的动态功能试验，观察有关性激素的变化，才有利于诊断。此外在血清性激素测定结果的评价中，应注意可能存在的干扰因素。甲亢、肝硬化等疾患时，肝脏降解功能减低,血清中睾酮、雌二醇等浓度升高.,激素含量的常用单位及其转换系数,性激素检测项目及相关疾病,性激素检测项目及相关疾病,hCG游离亚单位试剂 亚单位特异且不与完整的hCG分子结合的单抗 专门测定hCG的游离亚单位 多用于唐氏综合征的早期筛查。,绒毛膜促性腺激素（hCG）,临床意义,早孕、先兆流产的监护、异位妊娠、葡萄胎、绒癌、精原细胞瘤 肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、肝癌、畸胎瘤、唐氏综合征等。,普通型试剂 多抗 受其它激素干扰 灵敏度不高,hCG试剂 亚单位特异单抗 特异性和灵敏度较高, 亚 单 位, 亚 单 位, 亚 单 位,普通HCG, 亚 单 位,HCG, 亚 单 位, 亚 单 位,HCG游离亚单位, 亚 单 位,X,抗体选择HCG (TSH、PRL、LH、FSH类似),多抗或无选择性单抗,针对掩蔽性抗原, 亚单位特异,亚单位特异, 亚单位特异, 亚单位特异,免疫学检测技术 应注意的问题,正常值参考的意义及灰色区域的存在,如果测定结果处于灰色区域（约在正常值上下限以内20%）内，则需要进一步追踪检查。,95%或99%,-20%,+20%,自身基础数据 最佳“正常参考值”,对于患者来讲，最佳的参考值是自己以往的测定数据，即自身对照； 因此积累病人的基础数据非常重要。 尤其是性激素、生长激素、胰岛素等具有周期性分泌或释放规律的激素。,时间,FSH,卵泡期 排卵期 黄体期 月经期,正常人平均值变化规律,正常参考值范围,某一患者变化规律（无排卵峰）,灵敏度（真阳性率）：对真阳性病例的检出率，即=检出阳性病例数/总受检阳性病例数 特异度（真阴性率）：对真阴性病例报阴性的比率， 即=报阴性结果数/总受检正常人数 若某肿瘤筛查法的指标达到理论极限，即灵敏度100%，特异度99%（正常值为99%可信限） 而肿瘤的发病率多在十万分之三十以下，因此其应用于正常人群体检时，总阳性病例可能为： 30+（100,000-30）（1-99%）=30+999.71030； 其中，假阳性率=999.7/1030 100%=97% 绝大部分为假阳性！ 因此，筛查指标的意义在于高危人群的早期预警，而决不是疾病确诊！ 改进办法：采用多个厂家的产品或多指标联合测定（艾滋、肿瘤） 串联实验：多个检测均阳性才定为阳性，假阳性（误诊），假阴性（漏诊） 并联实验：一个指标阳性就定为阳性，假阳性（误诊） ，假阴性（漏诊） 取舍原则：分别对误诊和漏诊带来的医学