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文档简介
培养基的制备 和高压蒸汽灭菌,2007.11,目的与要求,1、了解培养基的配制原理,掌握制备培养基的过程。 2、学习高压蒸汽灭菌操作技术。 3、初步掌握划线和涂布平板的技术。 4、了解抗生素对细菌的抑制作用。,配培养基,灭菌、倒平板,划线、涂布平板,抑菌圈实验,实验流程,任何培养基一旦配成,必须立即进行灭菌处理,培养基,培养基(medium):由人工配制的适合微生物生长、繁殖或适合积累代谢产物的营养基质。,在微生物学研究和生长实践中,配置合适的培养基是一项最基本的要求。,培养基的配制过程,计算用量:200ml固体培养基 称量:托盘天平 溶解:自来水 调pH:自然pH 灭菌: 一般培养基, 121 0C, 15-30min:20min; 含糖培养基: 112 0C, 15-30min; 易产生沉淀的物质:分别灭菌后再混合 倒平板,3g/L 牛肉膏,10g/L 蛋白胨,5g/L NaCl,2% 琼脂粉,灭菌,灭菌(Sterilization)是指利用物理、化学等手段杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子的过程。,灭菌方法,化学药品灭菌,辐射灭菌,过滤除菌,加热法,干热灭菌,湿热灭菌,火焰灼烧,热空气灭菌,煮沸消毒法,常压蒸汽灭菌法,高压蒸汽法,高压蒸汽灭菌锅的构造,Be careful!,高压蒸汽灭菌锅的使用,待灭菌物品的包扎,装锅、加水,加盖 (对角线均匀拧旋),升温、排气(放大气5min),恒温,切断电源、冷却,开锅取物,121 20min,Attention!,倒平板,融化的琼脂培养基,冷却至50左右(以手背能忍受的温度为准),平板划线的基本程序,灭菌接种环,沾取菌液,接种,灭菌接种环,杀灭接种环沾染的细菌,以免污染标本,杀灭接种环沾染的细菌,以免污染环境,连续划线法,灭菌过的移液管,吸取菌液0.1ml滴在培养皿中央,用灭菌的涂布棒均匀涂布: 将菌悬液先沿一条直线轻轻地来回推动,使之分布均匀, 然后改变方向沿另一垂直来回推动,平板内边缘处可改变方向用三角玻扒再涂布几次。,三角铁扒,平板涂布的基本程序,抑菌圈实验,每组4人,需要灭菌的东西: 固体培养基200ml(2g蛋白胨,0.6g牛肉膏,1gNaCl,4g琼脂,自来水200ml,自然pH) 培养皿10个(每人倒平板两个,一个划线,一个涂布;涂布的那个用于抑菌圈实验) 1ml移液管4支(每人1支) 滤纸片,每人两片,每组需剪10片,装入培养皿中灭菌,Ready? GO!,思考题,1、总结一下,配制培养基应注意哪些问题。 2、高压灭菌的关键是什么? 3、加入青霉素滤纸的涂布平板究竟会产生什么样的效果,为什么?,Game Over!,(1)加入适量自来水于灭菌锅中(至水位线)。 (2)放入需要灭菌的东西。 注意:不要摆得太挤,以免影响蒸汽流通和灭菌效果。 (3)加盖旋紧螺旋,使蒸汽锅密闭不漏气(对角线均匀拧旋) (4)打开放气阀,打开电源,自开始产生大气后5分钟(此时蒸汽锅内的冷空气由排气阀排尽),关紧放气阀,让温度随蒸汽压力上升而上升,当达所需压力时(即温度上升到121),控制热源维持所需时间(20分钟),然后停止加热,让其自然冷却。 注意:应用此法灭菌是否彻底的一个重要关键是在压力上升之前,必须将锅内的冷空气完全排尽。 (5)待压力降至0磅时,打开
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