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实验三 细菌的简单染色和革兰氏染色,一 细菌的简单染色,(一)目的要求 (二)基本原理 (三)实验材料 (四)无菌操作过程 (五)简单染色操作步骤,(一)目的要求 学习制染色片技术,学习简单染色的原理。 2 学习并掌握无菌操作的技术。 3 掌握简单染色方法、。 4 巩固显微镜油镜的使用方法。,(二) 基本原理,细菌细胞微小,且含水量较多,在普通光镜下表现为无 色透明,不易观察,所以必须进行染色处理,使细胞着 色,便于观察。 简单染色是使用单一染料染色,可用于观察细菌形态、 大小、及排列方式。 染色前一般要将细胞固定,其目的是杀死菌体并使之粘 附于玻片上,还可以增强菌体的着色能力。固定有加热 法和化学法两种,无论采用何种方法均应维持细胞原有 形态。,(三) 实验材料,大肠杆菌(24 h 培养)斜面菌种 枯草杆菌(12h 培养)斜面菌种,(四)无菌操作过程,无菌操作:不让除我们接种的微生物以外 其它微生物侵入,同时也不污染 环境的技术。,(五) 简单染色操作步骤,1 涂片: 载玻片、无菌水、斜面菌种、无菌操作、均匀的薄层 2 干燥: 3 固定:加热固定 4 染色: 结晶紫染1min,或石炭酸复红染1min。 5 水洗: 6 干燥: 7 镜检: 低倍镜观察以确定目标和范围,再换用油镜观察绘图。,二 细菌的革兰氏染色,(一)目的要求 (二)基本原理 (三)实验材料 (四)操作步骤,(一) 目的要求,1 学习革兰氏染色原理,理解着色机理。 2 掌握革兰氏染色的方法,并能正确染色。 3 学习并掌握无菌操作技术 4 巩固显微镜油镜的使用方法,(二) 基本原理,革兰氏染色是用于细菌鉴别的一种重要染色方法。它是根据革兰氏阳性细菌、阴性细菌细胞壁结构、组成的不同而使用一系列的染色处理使之差别显色。其染色方法是先将细菌分别用结晶紫和碘液初染媒染后,乙醇脱色,再经复染剂复染。最终被染成红色的是革兰氏阴性细菌;被染成紫色的是革兰氏阳性细菌。,1,2,3,4,?,革兰氏染色原理: 第一步:结晶紫使菌体着上紫色 第二步:碘和结晶紫形成大分子复合物,分子大,能被细胞壁 阻留在细胞内。 第三步:酒精脱色,细胞壁成分和构造不同,出现不同的反应。 G+ 菌:细胞壁厚,肽聚糖含量高,交联度大,当乙醇脱色 时,肽聚糖因脱水而孔径缩小,故结晶紫-碘复合物 被阻留在细胞内,细胞不能被酒精脱色,仍呈紫色。 G- 菌:肽聚糖层薄,交联松散,乙醇脱色不能使其结构收 缩,因其含脂量高,乙醇将脂溶解,缝隙加大,结 晶紫-碘复合物溶出细胞壁,酒精将细胞脱色,细 胞无色,蕃红复染后呈红色。,(三)实验材料,大肠杆菌(24h培养)斜面菌种 枯草杆菌(12h培养)斜面菌种,(四)操作步骤,1 涂片:方法同单染色,然后干燥、固定。 2 初染:滴加结晶紫染色1min,后用水冲洗。 3 媒染:滴加碘液染色1-2min,后用水冲洗,甩尽残余水 4 脱色:用95%乙醇冲洗30秒(需要严格控制时间和浓度), 然后立即用水冲洗。 5 复染:用石炭酸复红覆盖涂片进行复染,石炭酸复红 染1min。水洗,晾干。 6 镜检:先用低倍镜观察,后用油镜观察。,1,2,3,4,三 实验报告,1 写出简单染色、革兰氏染色的实验目的。 2 写出简单染色、革兰氏染色的基本原理。 3 根据实验结果绘出简单染色和革兰氏染色的结果图。,菌名: 放大倍数:,细菌简单染色结果图,细菌革兰氏染色结果图 要求: 标出菌名、颜色、阳性或
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