自身抗体的应用及研究进展.ppt

自身抗体的应用及研究进展,全自动自身抗体分析仪,自动化检测 检测定量化 单个项目随时检测 多个项目同时检测 45-90分钟报告结果 原厂质控和校正血清 精确温度调控系统 五点定标、三重检测,风湿病的实验室诊断,血清学检查 自身抗体特异性 非特异的免疫相关指标 滑液分析 一般的实验室检查项目,常见的自身抗体及其检测方法,(1),(2),常见的自身抗体及其检测方法,抗ku抗体（ku),抗mi抗体（mi-2）,抗pm-scl抗体,抗jo-1抗体（jo-1）,多发性肌炎、皮肌炎,抗线粒体抗体m2型（ama-m2）,原发性胆汁性肝硬化,抗nrnp抗体（u1-snrnp）,混合性结缔组织病（mctd）,抗scl-70抗体（scl-70）,抗着丝点b抗体（cenp-b）,系统性硬化,抗ssb/la抗体,抗ssa/r052抗体,抗ss-a/r060抗体,干燥综合征/系统性红斑狼疮,抗核糖体p蛋白（po）,抗增殖细胞核抗原抗体（pcna),抗sm抗体,抗组蛋白抗体,抗核小体抗体,抗双链dna抗体igg抗体,系统性红斑狼疮,项 目 名 称,疾 病,ana谱17项（免疫印迹法）,(3),常见的自身抗体及其检测方法,(一)类风湿关节炎（ra）,类风湿因子（rf） 早期诊断的系列指标 抗ra33/36抗体 抗核周因子（apf） 抗角蛋白抗体（aka） 抗sa抗体 抗环瓜氨酸抗体（抗ccp）,抗角蛋白抗体（aka）,抗角蛋白抗体(aka)，1979年young等发现类风湿性关节炎(ra)血清中有一种能与鼠食管角质层反应的抗体，并对类风湿性关节炎(ra)具有特异性，命名为aka。1989年vincent等提出应将aka更名为抗角质层抗体更为恰当。aka可以在ra发病以前若干年出现，所以有早期诊断价值。 aka检测方法：取6周龄雄性wistar大鼠食管中下1/3段作为抗原，做冰冻切片，厚4 m5 m-70 保存备用。加120稀释血清，湿盒内37孵育30分钟，pbs漂洗，吹干，加120稀释的荧光素标记羊抗人igg，37孵育30分钟，漂洗，吹干，缓冲甘油封片荧光显微镜下观察。 判定标准：以角质层出现典型的规则的线状或板层状荧光为阳性。,gene filaggrin,类风湿因子（rf）,抗人igg分子fc片段上抗原决定簇的特异性抗体,分为igm、g、a、e型 rf在ra中的阳性率为70%，是诊断ra的重要标准之一 rf含量与病情的活动性和严重性成正比，持续高滴度的rf常提示ra病情活动，骨侵蚀发生率高，常可伴有皮下结节或血管炎等关节外表现，提示预后不良。,类风湿因子（rf）,rf并非ra独有的特异性抗体，对ra的诊断不具特异性 sle 30% ss 70%90% ssc 20%30% mctd 50%60% 非风湿性疾病 5%以下的正常人 rf阳性不等于一定就是ra rf阴性也不等于一定就不是ra,rf常用检测方法,rf 1：40阳性 乳胶凝集法（测igm-rf） rf 256 iu/ml 双抗夹心elisa法(测总rf） rf-igg 110iu/ml -iga 18iu/ml elisa法 -igm 200iu/ml,ra早期诊断的系列指标,敏感性 特异性 抗ra33/36抗体 35.8% 99.6% apf 40%-80% 70%-90% aka 40%-55% 85%-95% 抗sa抗体 40%-60% 98.6% 抗ccp 46%-70% 96%,抗环瓜氨酸肽抗体（抗ccp）,瓜氨酸是ra血清抗聚角蛋白微丝蛋白相关 抗体的主要抗原决定簇 对ra诊断具有高度特异性（98%） 可在ra早期出现 预测早期关节炎发展为ra ra关节侵蚀破坏的早期识别及预测,(二)系统性红斑狼疮（sle）,是一种临床表现有多系统损害症状的慢性系统性自身免疫性疾病，其血清有以抗核抗体为主的大量不同的自身抗体 自身抗体 （1）抗核抗体谱ana、抗ds-dna、抗ena抗体 （2）抗磷脂抗体 （3）抗组织细胞抗体抗rbc抗体 抗血小板相关抗体 抗神经元抗体 （4）其它rf、p-anca,抗核抗体（ana）,定义以细胞核内物质为抗原的抗体 临床意义 sle的筛查抗体: 95%阳性，但滴度与sle活动性无相关 阴性基本可排除sle 阳性并非sle特异 阳性并非风湿病特异: 风湿病（sle、ssc、ss、ra) 非风湿性疾病（感染、慢肝、肺纤维化、肿瘤） 服用某些药物（inh、苯妥英钠、肼苯达嗪、普鲁卡因酰胺）,抗核抗体（ana）,方法间接免疫荧光法 结果判断: 滴度1：100为阳性 常见核型5种 不同核型的临床意义不同,核膜型 与抗ds-dna有关， 多见于sle，特别是有肾炎者,均质型 与aha（抗组蛋白抗体）、抗dna有关，引起le形成主要见于sle、药物性狼疮,斑点型 与抗ena有关，应进一步查特异性抗体,核仁型 多见于硬皮病,着丝点型 多见于crest综合征,ana常见五种核型及临床意义,核膜型与抗ds-dna有关， 多见于sle，特别是有肾炎者 均质型与aha、抗dna有关，引起le形成 主要见于sle、药物性狼疮 斑点型与抗ena有关，应进一步查特异性抗体 核仁型多见于硬皮病 着丝点型多见于crest综合征,ana检测方法,间接免疫荧光法 印迹法 elisa法,抗核抗体谱（anas）,定义：以细胞核内物质为抗原的抗体 抗dna抗体抗ss-dna 抗ds-dna 抗组蛋白抗体h1，h2a，h2b，h3，h4 抗非组蛋白抗体抗ena抗体 抗着丝点抗体 抗核仁抗体 其它线粒体、溶酶体、高尔基体等,抗ds-dna抗体,临床意义 对sle的诊断有较高特异性 滴度与sle活动相关，可作为病情监测及疗效观察指标 与sle肾损害有关 检测方法 放免法（farr)敏感，有利于早期预测 检测高亲合力的抗ds-dna 间接免疫荧光法(if)特异 elisa可检测低亲合力的抗ds-dna 有助于中枢狼疮的病情监测 金标免疫斑点法,抗ena抗体,抗rnp mctd100%阳性，且滴度高 双手肿胀，雷诺现象，肌炎，指（趾）端硬化 肾脏保护性抗体？ 抗sm sle的标记性抗体，阳性率30% 有助于早期、不典型及治疗缓解后sle的回顾性诊断 抗sm阳性一定伴抗rnp阳性，但抗rnp阳性可单独存在 抗ssa 原发性ss：60-75% sle: 40-50% 与皮损、光过敏、白细胞减少、淋巴结肿大、 血管炎、紫癜相关 可造成新生儿狼疮、婴儿心脏传导阻滞 抗ssb 原发性ss：40%，较抗ssa更特异 其它ctd伴抗ssb者常伴继发性ss,抗ena抗体,抗scl-70 硬皮病标记性抗体 抗jo-1 多肌炎/皮肌炎标记性抗体 抗rib 胞浆抗原核糖体位于胞浆内 临床意义 是sle的又一特异性抗体，阳性率10-20% 多见于sle活动期 与抗ds-dna抗体的消长相平行 但不会随病情缓解立即消失 可持续1-2年后才转阴,抗核小体抗体（anua）,核小体是细胞染色质中的一种成分，它是由dna和组蛋白以特殊的方式相连而组成，在sle的诱导和致病中起重要作用 对sle的早期诊断有重要意义 比抗ds-dna、抗组蛋白抗体更早出现 阳性率：50%90% 特异性98%,(三)皮肌炎/多发性肌炎（pm/dm）,免疫学检查 ana ena抗jo-1阳性 其它检查肌酶谱 肌酸磷酸激酶（cpk）: mm-心肌和骨骼肌 mb-心肌 bb-平滑肌和脑内 乳酸脱氢酶（ldh） 谷草转氨酶（ast） 谷丙转氨酶（alt） 碱性磷酸酶（alp）,(四)干燥综合征（ss）,ana阳性率40%70% ena抗ssa抗体阳性率70%96% 抗ssb抗体阳性率50%87% 抗-fordrin对于pss或sss的诊断有一 定意义，但特异性和敏感性并不理想。 rf阳性率75%100% 高球蛋白血症 wbc下降,(五)系统性硬化病（pss）,ana阳性率50%55% ena抗scl-70阳性率15%40% 抗着丝点抗体(aca)阳性,(六)混合性结缔组织病（mctd）,ana阳性 ena抗rnp高滴度阳性,（七）血管炎,抗中性粒细胞胞浆抗体（anca）,anca的临床意义,c-anca和pr3-anca 对韦格纳肉芽肿有高度特异性（95%），敏感性80% 与病情活动性相关 常作为判断药物疗效和病情复发的指标 p-anca和mpo-anca 不如c-anca具有诊断特异性 阳性者血管炎程度较高，其滴度也与病情活动相关 主要与显微镜下多血管炎 坏死性新月体肾小球肾炎 变应性肉芽肿性血管炎 相关,（八）抗磷脂抗体综合征（aps）,是一种非炎症性自身免疫病，临床上以动/静脉血栓形成、习惯性流产和血小板减少等症状为表现，血清中存在抗磷脂抗体 血清学检查 抗心磷脂抗体（ aca ）igg、igm、iga（elisa） 抗2糖蛋白1抗体（抗2-gp1) 狼疮抗凝物（la）凝血酶原时间（pt） 激活的部分凝血活酶时间（aptt） 白陶土凝集时间（kct） 蛇毒试验（rvvt）,抗磷脂抗体,抗2-gp1抗体比la和aca在aps患者中更具有特异性，是导致aps的主要抗体 抗2gp1抗体只出现于自身免疫性疾病, 而aca也可出现于一些感染性疾病, 如梅毒、aids、肝炎、结核等,（九）自身免疫性肝病,抗核抗体（ana） 抗肝细胞膜抗体(抗lma) 抗平滑肌抗体（asma） 抗肝肾微粒体抗体（抗lkm抗体） 抗肝-胰抗体(抗lp抗体) 抗可溶性肝细胞抗体（抗sla） 抗线粒体抗体（ama）,自身免疫性肝炎（aih） ana 抗平滑肌抗体（sma） 抗肝肾微粒体抗体 原发性胆汁性肝硬化（pbc） 抗线粒体抗体（ama）m2 原发性硬化性胆管炎 anca阳性,自身免疫性肝病,风湿病的实验室诊断,自身抗体特异性 非特异的免疫相关指标 一般的实验室检查项目 血常规 尿常规 肝功能 肾功能等,注意事项,选择做哪些检查项目时要重点突出 避免“大撒网” 解释实验结果时应考虑以下几个问题 实验方法本身的敏感性、特异性、 可靠性及实验室之间的差异性 结合临床 应把与之相关的一组实验结果放在一起考虑,全国自身抗体检测质量控制总结,由中华医学会风湿病分会计划 参与质控的医院和检测的项目逐年增多，多为三甲医院,自身抗体的检测对于风湿