GPC凝胶净化系统基础知识.ppt

GPC凝胶净化系统 现状 食品安全、环境保护日益受到关注。 要求仪器更快、更准、更有效。 样品前处理对于保证结果的一致与准确至关重要。 主要内容 凝胶色谱的原理 LabTech GPC Cleanup系统 GPC法规 GPC的应用 凝胶色谱的原理 凝胶色谱： Gel Permeation Chromatography Size Exclusion Chromatography 是根据溶质分子大小进行分离的色谱技术。 柱填料凝胶具有不同尺寸的孔穴，凝胶孔径与分离组分分 子大小相应，当大小不同的组分分子随流动相进入凝胶， 他们进入微孔的程度不同，大分子不能进入孔穴，而分子 越小进入微孔越深。因而保留时间不同。试样中各组分按 分子大小进行洗脱。 凝胶色谱的固定相 凝胶色谱柱的固定相种类很多， 化学组成分为三类 有溶胀性的交联高聚物 类的疏水性有机凝胶。 代表：交联聚苯乙烯。 水做溶剂的亲水性凝胶 ，如：交联葡聚糖凝胶 、琼脂。 非溶胀性的无机凝胶， 如多空硅胶、多孔玻璃 GPC凝胶净化净化柱固定 相 EPA推荐： 多空乙烯苯二乙烯苯聚 合物 Bio-Breads S-X3 200-400目 排阻极限：2000 凝胶色谱的流动相 原则： 在选择溶剂时，应该选择与仪器、净化柱兼容的溶剂及样品 溶解性相符的溶剂。 原因： 选择性仅与分子大小的差异有关。要改进分离度只能靠凝胶 的孔径大小和孔径分布的最佳化来实现。试样的分离并不依 赖于溶剂与试样间的相互作用力（与一般色谱的不同）. 什么是“凝胶净化系统” 输液泵将流动相与样品带入净化柱，试样中各组分按照分子大小 顺序洗脱，大分子油脂、色素、生物碱、聚合物先淋洗出来农药 等较小分子后淋洗出来，检测器检测出信号，组分收集器收集含 有目标组分的洗脱液。 输液泵 进样阀 （自动进样器） GPC净化柱 馏分收集器 检测器 LabTech GPC凝胶净化系统 GPC Cleanup 600GPC Cleanup 800 仪器特点 高性能输液泵 多波长紫外检测器 可供选择多种收集管架的馏分收集器 集进样与收集于一体的自动液体处理器 多种收集模式 GPC净化柱 填料：Bio-Beads SX-3 200-400目（EPA 3640） 30g, 50g, 60g、70g 净化柱：不锈钢柱、玻璃柱 尺寸：25*300，25*400，25*500，25*700mm（可定制） 灵活多变的GPC工作站 GPC工作示意图 LS M 溶剂废液 馏分 GPC净化适用法规及推荐方法 US EPA SW-846 方法3640A FDA杀虫剂分析方法 AOAC 分析方法 DFG S19 GPC净化适用法规及推荐方法 方法目标物质样品基质流动相填料 USEPA 3640A USEPA 625-S 半挥发有机物、BNAs(Bases Neutral Acid), 多氯联苯、有机氯 杀虫剂 环境样品、土壤 、底泥等 100% 二氯甲 烷 S-X3 Gel FDA Pesticide Analytical Methods 有机氯杀虫剂、有机磷杀虫剂、 多氯联苯、各种杀真菌剂等 脂肪、谷物、植 物材料 50/50 乙酸乙 酯/环己烷 S-X3 Gel FDA Pesticide Analytical Methods 各种杀虫剂和除草剂脂肪食品 羊毛脂50/50 正己烷 /二氯甲烷 S-X3 Gel AOAC Methods of Analysis 有机氯农药动物、鱼、家禽 、植物油品 50/50 环己烷 /二氯甲烷 AOAC Methods of Analysis 有机氯和有机磷杀虫剂、, 三嗪化 合物、氨基甲酸盐化合物 动物、鱼、家禽 、植物油品 15/85 二氯甲 烷/环己烷 S-X3 Gel FDA Pesticide Analytical Methods 有机氯 有机磷杀虫剂、多环芳烃脂肪、谷物、植 物材料 70/30乙酸乙 酯/环戊烷 S-X3 Gel GB/T 19650-2005 动物 组织中农药多残留分析 农药动物组织50/50乙酸乙 酯/环己烷 S-X3 EPA 3640： GPC净化系统测试 EPA SW-846 3640 方法进行校 正 校准物： 玉米油（Corn oil） 双（2-乙基己基）邻苯二甲酸 酯（bis-(2-ethylhexyl)phthalate ） 甲氧滴滴涕（methoxychlor） 二萘嵌苯（Perylene） 硫 LabTech GPC Cleanup600 净化柱20*300mm Bio- Breads SX3 不锈钢柱 应用 Why “GPC”? 减少对仪器的损害和待机时间 提高准确率，确保平行性。 提高效率，并且回收率稳定 提高回收率 提高仪器的检出限 节约溶剂 节约人力 凝胶渗透色谱净化在土样有机氯测定中的应用（环境科 学与技术，vol29，3） 应用领域 农产品及食品 （农残、药残） 农残：蔬菜、水果、谷物、饲料、肉类、水产品、 茶叶、蜂蜜 二氧杂环：奶类 黄曲霉素：奶类、食油 应用1 饲料中有机氯测定（农科院饲料所） 称取5.000g配合饲料若干份,分别加提 取液25ml，超声提取15min，用加有 5g无水硫酸钠漏斗过滤 GPC 条件： LabTech Cleanup 600 二氯甲烷环己烷=11， 流速： 5.0 ml/min 波长：258nm 标准 DDT+六六六的GPC的流出图 检测样品提取液的GPC图 检测样品溶液GC色谱图 组组分名称样样品溶液(n=5) 峰面积积均值值回收率均值值RSD -BHC 3111154.687.054.045.0 -BHC 147761106.55.84.1 -BHC 279612394.164.14.4 -BHC 308514697.744.74.8 p,p-DDE 240111299.664.64.7 o,p-DDT 2848133101.14.54.7 p,p-DDD 1540107105.97.47.0 p,p-DDT 176777102.64.54.4 应用2： 仪器系统： LabTech GPC Cleanup800 GPC条件： 流动相：二氯甲烷； 检测波长：254nm； 流速：3ml/min； 进样量5ml。 图1 食用油（含邻苯二甲酸二辛酯） 图2 食用油（空白） 食用油中增塑剂HPLC谱图 浓度 添加值 /ugml-1 测定值 /ugml-1 平均回收率/ % 555.37883.96 10109.53281.754 202025.46120.71 回收率结果(n=3) 环保 多环芳烃（PHAs）：污水、土壤 多氯联苯（PCBs）：废水 应用实例： 在土壤样品中加入16种多环芳烃混合标准品，萃取浓缩后以 LabTech GPC Cleanup 进行净化，对收集部分进行分析。 A: mixture of 16 PAHs B: Soil extraction mixture of 16 PAHs and Soil extraction HPLC谱图 经GPC净化后16种多环芳烃的回收率 CompoundRecovery (%) Naphthalene89.6 Acenaphthylene93.4 Acenaphthene90.4 Fluorene96.4 Phenanthrene92.1 Anthracene91.2 Fluoranthene97.6 Pyrene94.2 Benzo (a)anthracene92.1 Chrysene97.5 Benzo(b)fluoranthene95.1 Benzo(k)fluoranthene90.1 Benzo(a)pyrene98.6 Dibenzo(a,h)anthracene86.4 Benzo(g,h,i)perylene90.6 Indeno(1.2.3-.cd)pyrene95.2 土壤中应用2 土壤中有机氯GPC净化图片 “过程” 典型的GPC净化残留农药制备过程 有机样品净化、浓缩全套解决方案 Your Your LabLab, Our Tech