药学毕业论文--缩宫素的质量鉴定.doc

2012届毕业设计（论文）题 目： 缩宫素的质量鉴定学 院：药学院专 业：药学类班 级：药学0803姓 名：XX指导教师： XX 教授 起讫日期： 2012年2月2012年6月 The general staff (1 employees in addition to vice president, director, manager, deputy manager and special positions outside the contract period) to resign, to give 10 days notice, the project manager or department manager, administrative personnel department or relevant responsible person for the relevant visa after departure procedures; in addition to general staff personnel outside the contract period of turnover must submit the resignation report, a month ahead of schedule, the administrative personnel department, general manager of visa before separation procedures; probation employees shall pay in advance 5 resignation report, the project manager or department manager and administrative personnel department visa before departure; positive after special reasons did not sign a contract with reference to general employees Through the staff摘 要缩宫素的质量鉴定摘 要缩宫素为一种多肽激素，自20世纪50年代合成纯化的缩宫素后，一直被广泛应用于临床，尤其在引产或催产中有着重要的使用价值，为产科必备药，所以缩宫素需求量巨大。通过对本品的性状、鉴别、检查、效价测定等方面进行研究，本文确定缩宫素生物测定法为本品效价的测定方法，本法具有简便、准确等优点。参照缩宫素溶液质量标准和中国药典2005年版二部的有关规定，对公司生产的缩宫素得相关质量进行了研究工作。关键词：缩宫素 缩宫素生物测定法 效价限度19AbstractOxytocin quality appraisalAbstractOxytocin as a peptide hormone, since the 1950 s the synthesis of oxytocin purification, and have been widely used in clinical, especially in induced labor or oxytocin plays an important use value, for maternity essential medicine, so oxytocin huge demand.This article through the character, the identification, inspection, titer determination, is determined in this paper oxytocin bioassays for this product titer determine methods, this method has such advantages as simple and accurate. Reference solution quality standards and oxytocin the China pharmacopeia (2005 edition of the relevant provisions of the production of the company of oxytocin quality related research work.Key Words: Oxytocin oxytocin bioassays titer limit目 录目 录中文摘要ABSTRACT第一章 文献综述11.1药品名称11.2立体背景11.2.1引产21.2.2催产21.2.3治疗产后出血21.2.4禁忌症31.3立题依据和目的31.3.1有关本品的研究开发、生产、销售及临床应用情况的概述：41.3.2知识产权情况41.4药理毒理研究资料综述41.4.1药代动力学51.4.2缩宫素的生理作用51.4.3药理作用和给药方式51.4.4药物相互作用6第二章 实验部分8 2.1 效价限度8 2.2 性状8 2.3 鉴别8 2.4 检查11 2.4.1 pH值11 2-4-2氨基酸比值11 2-4-3升压物质11 2-4-4细菌内毒素11 2.5 效价测定13 2-5-1仪器设备13 2-5-2测定方法13 2-5-3方法学考察13 2-5-4样品效价测定结果14 2.6 结论15结语16参考文献17致谢18第一章 文献综述 第一章 文献综述 1.1 药品名称1. 通用名：缩宫素溶液2. 英文名：Oxytocin Solution3. 汉语拼音：Suogongsu Rongye4. 化学名：半胱氨酰-酪氨酰-异亮氨酰-谷氨酰(酰胺)-天门冬氨酰(酰胺)-半胱氨酰-脯氨酰-亮氨酰-甘氨酰胺(1-6二硫键)。5. 结构式：本品结构为含有二硫键的9个氨基酸组成的肽链。H-Cys-Tyr-Ile-Glu(NH2)-Asp(NH2)-Cys Pro-Leu-Gly-NH2 6. 分子式：C43H66N12O12S27. 分子量：1007.28. 命名依据及分类：本品为已有国家标准的药品，其质量标准收载于地标升国标第9册，标准号WS-10001-(HD-0903)-2002，按照标准上的名称将本品命名为缩宫素溶液。根据药品注册分类，本品属于化学药品6类。1.2 立题背景缩宫素为一种多肽激素，自20世纪50年代合成纯化的缩宫素后，一直被广泛应用于临床，其主要作用机制为促进子宫平滑肌收缩。子宫对缩宫素的敏感性与子宫肌组织中缩宫素受体含量有关，个体差异较大，在产程中如使用得当则安全有效，可起到减少难产率及剖宫产率得作用；反之，可危及母儿生命。1.2.1引产 缩宫素适用于过期妊娠及妊娠中断，一般引产成功率为90。过期妊娠是指妊娠超过42周尚未临产者。过期妊娠的原因，多数学者认为是由于妊娠末期孕激素过高而雌激素过少所致。这样妊娠子宫对内源缩宫素部敏感，因此，过期妊娠引产时，在口服雌激素制剂（如乙烯雌酚）3天后，开始给予缩宫素5-10/L的浓度，以6-10滴/min的速度滴入，并严密观察宫缩及胎心音变化。如果药物引产效果不佳，可采用其他方法。中断妊娠系指在妊娠14周后，即失去早期人工流产机会而又必须中断妊娠者，可用缩宫素配合其他方法（如水囊引产、利凡诺尔引产法）进行引产。妊娠中期引产，目前在理论和实践中存在着许多没有解决的问题。临床上单独使用缩宫素药物引产，效果常常不理想，其主要原因可能仍与孕酮水平较高和雌激素水平较低有关，以及前列腺素分泌不足。中孕时子宫蜕膜发育不完善，蜕膜受体乏感应所致，或许因为胎头未直接压迫宫颈。因此中孕使用缩宫素引产，要求药物浓度高，剂量大、适当的滴注速度。常用10-20加入5葡萄糖500ml中，以40滴/min速度静脉点滴。1.2.2催产缩宫素催生，主要用于原发性或继发性宫缩乏力者。一般催产成功率为98。在正常情况下，临产宫缩是具有一定的强度、频率、持续时间、间歇时间。当宫缩乏力时，产程延长甚至出现滞产，可危及胎儿生命。恰当使用缩宫素，是非常必要和重要的。由于每个产妇的个体差异，所以对缩宫素的敏感程度不一。所需剂量和浓度也不尽相同。因此临床上一般采用2-5缩宫素加入到5葡萄糖500ml中静脉滴注。一般以8-10滴/min开始。缩宫素对子宫迅速发生作用，一般3-5分钟后就出现宫缩，停药后仍可维持半小时。使用缩宫素催产，必须严密观察宫缩情况。应控制宫缩在2-5分钟1次，每次持续40-60秒。并要严格观察宫口开大程度，其扩张速度至少为0.5cm/h以上。同时注意胎心音的变化，防止胎儿窘迫症的发生。用缩宫素催生，注意产程的变化，监测产妇血压、脉率，随时调节滴数。如果发生血压升高，胎心异常或子宫强直收缩，要立即停止缩宫素滴注。1.2.3治疗产后出血产后出血为产妇严重危急并发症之一。处理产后出血，应迅速查明原因进行紧急止血。给予麦角新碱注射液或用缩宫素10加入25葡萄糖40ml中静脉缓注。当胎儿娩出后，为了促进胎盘剥离和子宫复原以及预防产后出血，应常规给予缩宫素10-20加入葡萄糖500ml液体中静滴。吴坚、周漫天报道，湖南省株洲化工集团公司医院还进行了缩宫素治疗药物流产后出血临床观察的研究：治疗组81例，对照组72例。两组药物流产方法相同，即米非司酮，早50mg、晚25mg、共空服2d，第3d晨空腹顿服米素前列醇片600g，当日来院留观6-10h。无论孕囊是否完整排出。治疗组：留观当日出现阴道流血后，加用缩宫素10，肌注Q1h6次;对照组：加用VitC0.2g，3次/d，口服，连用5d，作安慰剂。两组药流后8d，15d，42d门诊或电话随访。结果治疗组治愈率达77.8%，总有效率93.83%；对照组治愈41.7%，总有效率80.5%，经统计学处理，两组有显著性差异，治疗组明显优于对照组。1.2.4禁忌症： 明显头盆不相称、完全性前置胎盘、产道梗阻、双胎或多胎，以及瘢痕子宫特别是深入宫腔的子宫肌瘤剔除术和子宫体部剖宫产者，严重的胎盘功能低下及胎儿宫内窘迫，严重的心肺功能不良，均应作为应用缩宫素的禁忌症。注意事项：1.2.4.1在缩宫素催产过程中，要注意防止低钠血症和低渗透压的发生，5%的葡萄糖作溶剂经代谢迅速形成血管内低渗溶液，尤其输液总量2000ml时，产妇及新生儿低钠血症和低渗透压发生率更高，而低钠时新生儿黄疸的发生率增高，因此输液达1000ml时，应加适量含钠溶液，输液总量应2000ml。1.2.4.2应严格鉴别产妇是真临产还是假临产，对于假临产严禁使用缩宫素。1.2.4.3对胎位不正，软产道梗阻未纠正以前，不允许应用缩宫素催产。1.2.4.4严格掌握缩宫素用量。缩宫素用量过大、浓度过高、滴素过快能够引起子宫强直收缩，甚至子宫破裂，直接危及母子生命，所以都要从常规用量开始，严格观察宫缩变化，胎心音变化，对于已出现强直收缩的要用杜冷丁、鲁米那等药物治疗，阿托品等抗胆碱药物无效。对于先兆子宫破裂，应立即停止使用各种宫缩剂，必要时可进行全麻，以使子宫松弛。1.3 立题依据和目的缩宫素为一种多肽激素，自20世纪50年代合成纯化的缩宫素后，一直被广泛应用于临床，尤其在引产或催产中有着重要的使用价值，为产科必备药，所以缩宫素需求量巨大。缩宫素目前主要开发的品种为注射剂，主要用于引产、催产、产后及流产后因宫缩无力或缩复不良而引起的子宫出血。我公司现有缩宫素注射液（1ml:10单位）；注射用缩宫素（5单位、10单位），需要用到大量的缩宫素溶液，购买原料已经不能满足需要，所以现在拟仿制缩宫素溶液，用于满足生产需要。1.3.1 有关本品的研究开发、生产、销售及临床应用情况的概述：缩宫素是1920年从动物垂体后叶分离提纯的一种多肽激素。1953年人工合成了缩宫素，它是人类第一个合成的多肽激素。现在已经明确，几种动物源性缩宫素的氨基酸组成和结构与人体的完全相同。医药上应用的缩宫素有两种，一种是垂体后叶提取得到的制剂，另一种由化学合成法生产的。比较两种方法，我公司将采用化学合成法生产缩宫素，因为化学合成法合成的缩宫素纯度较高，而天然缩宫素由于含有少量加压素，不太容易达到标准要求。在国内，共有5家单位生产缩宫素溶液，他们分别为上海第一生化药业有限公司；宁波人健药业有限公司；安徽丰原药业股份有限公司马鞍山药厂；浙江尖峰药业有限公司；深圳市翰宇药业有限公司。缩宫素作为子宫收缩药，临床上主要用于引产、催产、产后及流产后因宫缩无力或缩复不良而引起的子宫出血。本品临床应用时有注射用缩宫素和缩宫素注射液两种剂型。引产或催产时的用法用量为静脉滴注，一次2.55单位，用氯化钠注射液稀释至每1ml中含有0.01单位。静脉开始时每分钟不超过0.0010.002单位，每1530分钟增加0.0010.002单位，至达到宫缩与正常分娩期相似，最快每分钟不超过0.02单位，通常为每分钟0.0020.005单位。控制产后出血的用法用量为每分钟静滴0.020.04单位，胎盘排出后可肌肉注射510单位。本品偶有恶心、呕吐、心率加快或心率失常的不良反应。缩宫素用于过期妊娠及妊娠中断的引产时，成功率一般为90。缩宫素作催生用途时，主要用于原发性或继发性宫缩乏力者。一般催产成功率为98。吴坚、周漫天报道过湖南省株洲化工集团公司医院进行了缩宫素治疗药物流产后出血临床观察的研究，结果治疗组治愈率达77.8%，总有效率93.83%。1.3.2 知识产权情况缩宫素溶液为已有国家标准的药品，缩宫素溶液收载于地标升国标第9册，标准号为WS-10001-（HD-0903）-2002。经检索，本品的原料无专利保护，因此，开发本品无知识产权问题。1.4 药理毒理研究资料综述1.4.1 药代动力学 本药口服易被胰蛋白酶、胱氨酸氨基肽酶、缩宫素酶破坏失效，故多采用肌注、静注或粘膜给药。后一给药途径，作用较弱，主要用于产后止血或子宫复旧。肌注吸收良好，在3-5min起效，维持20-30min, t1/2为5-12min。静注立即起效，15-60min内子宫收缩频率与强度逐渐增加，然后稳定。滴注完毕20min其效应逐渐减退。t1/2为1-6min。本药大部分经肝及肾迅速破坏，少部分以结合型由尿排出。1.4.2缩宫素的生理作用缩宫素对子宫平滑肌和乳腺有强大的选择性的兴奋作用，因而可以推论这种多肽在这些部位具有一种真正的激素作用。缩宫素引起的子宫底收缩与妊娠后期和自然分娩期的子宫底收缩，在振幅、持续时间和频率上均无明显区别。然而内源性缩宫素在分娩开始之间的直接关系尚难于肯定。虽然已经清楚来自子宫颈、阴道或乳房适当的感觉刺激可以反射性地引起垂体后叶释放缩宫素，但分娩开始时血浆缩宫素的浓度未见升高，然而，子宫对缩宫素的敏感性随妊娠时间的延长而增加，这种调节人类分娩可能是重要的。这种学说与在相应时间里观察到的在大鼠子宫肌上的缩宫素受体数明显增加的现象是一致的。虽尚未证明完全没有缩宫素时分娩和哺乳就不能发生，但是已发现，缩宫素完全缺乏时，分娩延长，射乳反射消失，已知由缩宫素释放而造成对象畜子宫的兴奋作用有利于精子的上行，在人类生殖道内是否有此种作用尚未肯定，至少可以认为，缩宫素对分娩起有利作用，对射乳、反射起着重要作用，它对男性有何作用尚不清楚。1.4.3药理作用和给药方式1.4.3.1兴奋子宫 缩宫素的主要作用是直接加强子宫平滑肌的收缩，其收缩强度与性质明显受用药剂量与女性激素的影响，小剂量就能增强妊娠末期子宫的节律性收缩，随剂量增加，张力也增高，更大剂量（10u）则能引起强直性收缩。子宫对缩宫素的反应大致与子宫自发活动增加平行，雌激素能增加子宫对缩宫素的敏感性，而孕激素则能降低其敏感性，妊娠初期由于孕激素水平高，故子宫对缩宫素无反应，妊娠后期则因雌激素/孕激素的比值上升，使敏感性妊娠中期增强八倍，临产子宫最为敏感，产后有逐渐下降。在大白鼠体内已观察到妊娠末期子宫肌层的缩宫素受体有明显增加。缩宫素与平滑肌上的受体结合时，改变受体的构型，启动细胞膜上的离子通道开放，发生相关离子的跨膜运动，使膜去极化并发出动作电位。膜的电兴奋使细胞膜Ca-Mg-ATP酶的活性受到抑制，钙泵的运转受阻，Ca通道的开放，使细胞内游离Ca离子浓度急剧上升，游离Ca离子结合细胞肌丝上的特异位点后，激活肌凝蛋白轻链激酶，造成肌丝的相对滑动而引起肌细胞的收缩。缩宫素与蜕膜上的受体结合，受体刺激PGF2产生的藕联作用是引起有效分娩的关键一环。 PGF2能加强和维持缩宫素引产的收缩作用。成功的引产伴有PGF2代谢产物（15-酮-13,14二氢PGF2）升高。 静滴缩宫素3-5分钟后，即出现子宫兴奋作用，由于很快被血浆中缩宫酸氨灭活，故维持时间短暂（20-30）分钟，对子宫体的兴奋作用强，对子宫颈的兴奋弱，用量适当不会引起强直性收缩，这些特点不同于麦角新碱，是用于催产、引产安全有效的重要依据。1.4.3.2促进排乳 乳腺的小泡分支被变形的平滑肌网即肌上皮所包围，这些细胞收缩迫使乳汁从小泡管道进入大窦，由此婴儿容易吸出乳汁，这种功能叫射乳。肌上皮对缩宫素呈高度的反应性，虽然儿茶酚氨抑制射乳，然并不认为肌上皮收缩依赖自主神经支配，但认为它是受缩宫素和引起激素释放的反射途径所控制，缩宫素能使乳腺导管收缩，促使乳汁排出，产后乳房涨痛，用缩宫素滴鼻有一定疗效。1.4.3.3对心血管系统的作用 给人大量应用缩宫素，有明显而短暂的直接松弛血管平滑肌的作用，收缩压与舒张压均下降，尤以舒张压下降更为突出，皮肤潮红以及肢体血流增加，降压时反射性的引起心动过速和心输出量增加，当连续的以大剂量输入时，血压短暂下降后，继之轻度而更为持久的升高。例如，与神经节阻滞剂或交感神经阻滞剂合用时，由于减弱了缓冲反射活性，以致降压作用更显著。由于产科多应用小剂量缩宫素，一般不出现明显的血压变化，但是大剂量缩宫素用于治疗性流产或子宫外科手术时，特别在深度麻醉的病人，可使动脉血压明显下降。缩宫素的扩张血管作用与自主神经受体无关，输入生理剂量范围的缩宫素时可显著增加狗的肾血流量（尤其是切除垂体的狗）。1.4.3.4给药方式: 传统的持续性静脉滴注缩宫素引产， 血药浓度一般经过 20 30 分钟才能达到稳定状态， 用药是否有效， 必须等待30 分钟才能肯定， 剂量大小不易发动宫缩， 剂量过大易引起子宫强直性收缩及胎儿窘迫， 甚至子宫破裂 文献报道， 从用药到规律所需时间一般 90 120分钟， 缩宫素达到有效浓度后持续在高水平上， 不利于子宫肌细胞的舒张 但该方法简便易行， 而且已有广泛应用的经验通过对缩宫素药代动力学 受体活性和临床资料分析认为， 缩宫素输注时剂量增加的间隔必须在 20 40 分钟， 也有人认为间隔时间可短至15 分钟或长至60 分钟由于体内缩宫素以脉冲或间歇方式释放， 又有已结合的缩宫素受体对未结合缩宫素的暂时性失活等因素， 使脉冲给药方式越来越受到重视 在应用缩宫素引产和增强产力的研究中观察到， 脉冲给药效果与持续性输注给药效果相同， 甚或更佳， 并可降低新生儿高胆红素血症的发生率， 而且减少缩宫素用量 但需脉冲式输注泵等， 尚未广泛应用， 有待于进一步探讨为预防过强宫缩所致胎死宫内或子宫破裂的发生， 引产时不宜行缩宫素肌肉注射穴位注射或黏膜给药 因为这些给药方法因人而异， 对缩宫素的敏感度剂量不好控制1.4.3.5其他作用 给实验动物静脉注射缩宫素，虽然通常能看到促进钠的排泄，但给予人时，自肾排出的电解质却无预期的改变，因治疗目的需大量应用缩宫素时，由于此激素有轻度的内源性抗利尿激素样作用，从而引起泌尿减少，在此用药期间，由于过量的静脉输液，可以见到水中毒征候，除子宫、血管和乳腺肌上皮外，其他组织和平滑肌对缩宫素不敏感。在实验研究中，缩宫素与加压素相似，高浓度时对许多与激素原发作用无明显关系的组织可产生作用。 1.4.4药物相互作用1.4.4.1 环丙烷等碳氢化合物吸入全麻时，使用缩宫素可导致产妇出现低血压，窦性心动过缓或（和）房室节律失常。恩氟烷浓度1.5，氟烷浓度1.0吸入全麻时，子宫对缩宫素的效应减弱。恩氟烷浓度3.0可消除反应，并可导致子宫出血。1.4.4.2 其他宫缩药与缩宫素同时用，可使子宫张力过高，产生子宫破裂或（和）宫颈撕裂。第二章 实验部分第二章 实验部分本品为化学合成九肽，收载于化学药品地方标准上升国家标准（第9册），标准号为WS-10001-(HD-0903)-2002，根据国家食品药品监督管理局药品注册管理办法，本品属化学药品注册分类-6。参照缩宫素溶液质量标准和中国药典2005年版二部的有关规定，对本品的相关质量进行了研究工作。对照品来源及批号：合成缩宫素：批号为1229-9601，中国药品生物制品检定所；垂体后叶：批号为502-8709，中国药品生物制品检定所。样品来源：南京新百药业有限公司；批号：120307，120310，120314市售样品：缩宫素溶液；批号：120104（宁波人健药业有限公司）2.1效价限度根据本品三批样品效价检测结果及缩宫素溶液国家药品标准WS-10001-(HD-0903)-2002，将本品的效价限度订为：每1ml含缩宫素的效价不得少于150单位。2.2性状目测检视，本品三批样品和市售样品性状检查的结果如下：表2-1性状检查结果批号120307120310120314市售性状无色澄明液体无色澄明液体无色澄明液体无色澄明液体结果表明：目测观察本品三批样品和市售样品，其性状均为无色澄明液体。2.3鉴别参照国家药品监督管理局国家药品标准WS-10001-(HD-0903)-2002进行鉴别。2.3.1生物测定法鉴别方法：照缩宫素生物测定法（中国药典2005年版二部附录 F）测定，应有子宫收缩反应。本法系比较垂体后叶或合成缩宫素标准品（S）与供试品（T）引起离体大鼠子宫收缩的作用，以测定供试品的效价。标准品溶液的配制：迅速精密称取垂体后叶标准品适量，注意避免吸潮，先加少量0.25%醋酸溶液，仔细研磨，移置硬质大试管中，再精密加0.25%醋酸溶液使成每1ml中含缩宫素1单位的溶液。管口轻放一玻璃塞，浸入沸腾的水中，时时振摇，加热煮沸5分钟取出，迅速冷却，滤过，滤液分装于适宜的容器内，48贮存，如无沉淀析出，可在3个月内使用。标准品稀释液的配制：试验当日，精密量取垂体后叶标准品溶液适量或取合成缩宫素标准品，按标示效价加入0.9%氯化钠溶液配成每1ml中含缩宫素1单位的溶液，按高低剂量组（ds2，ds1）加0.9%氯化钠溶液配成两种浓度的稀释液，一般高浓度稀释液可配成每1ml中含0.010.02单位，高低剂量的比值（r）一般不得大于1:0.7。调节剂量使低剂量能引起子宫收缩，一般在2050mm；高剂量应不致使子宫收缩达到极限，记录仪指针一般为5085mm，且高低剂量所致子宫的收缩应有明显差别。供试品溶液与稀释液的配制：按供试品的标示量或估计效价（AT），照标准品溶液与其稀释液的配制法配成，高低两种浓度的稀释液，其比值（r）应与标准品相等，供试品和标准品高低剂量所致的反应均值应相近。子宫肌蓄养液的配制：试验当日，取氯化钠9g、氯化钾0.42g、氯化钙（按无水物计算）0.06g与葡萄糖0.5g，加水700ml使溶解，另取碳酸氢钠0.5g，加水约200ml溶解后，缓缓倾注于前一溶液中，随加随搅拌，最后加水适量使成1000ml。供试用动物：取健康合格的成年雌性大鼠，断乳后即与雄鼠隔离，出生后不超过3个月，体重160240g。试验当日，选择阴道涂片在动情前期的动物，也可用雌性激素处理使子宫涂片为动情前期或动情期的动物。测定法：取选定的大鼠迅速处死，剖腹取出子宫，仔细分离附在子宫肌上的结缔组织，注意避免因牵拉使子宫肌受损。在子宫分叉处剪下左右2条，取一条将其下端固定于离体器官恒温水浴装置的浴杯底部，上端用线与记录装置相连，以描记子宫收缩；浴杯中加入一定量的子宫肌蓄养液（约3050ml），连续通入适量空气。蓄养液应调节至3235之间并保持恒温（0.5），子宫放入浴杯后，静置约15分钟，按次序准确注入等体积的标准品或供试品两种浓度的稀释液（0.30.8ml），待子宫肌收缩至最高点开始松驰时（约6090秒钟），放去蓄养液并用蓄养液洗涤一次，再加入等量蓄养液，静置；相邻两次给药的间隔时间应相等（约35分钟），每次给药应在前一次反应恢复稳定以后进行。标准品稀释液和供试品稀释液各取高低两个剂量（ds2、ds1、dT2、dT1）为一组，按随机区组设计的次序轮流注入每组4个剂量，重复46组。测量各剂量所致子宫收缩的高度，照生物检定统计法（附录-）中的量反应平行线测定法计算效价及实验误差。本法的可信限率FL（%）不得大于10%。另取空白试剂，同法试验。三批样品及市售品鉴别结果见表2-2。表2-2生物测定法鉴别结果批号120307120310120314市售空白试剂鉴别有子宫收缩反应有子宫收缩反应有子宫收缩反应有子宫收缩反应无子宫收缩反应结果表明：本品三批样品和市售样品均呈正反应，空白试剂无干扰。本方法可以用以鉴别本品。2.3.2高效液相法保留时间鉴别方法：取本品，加氯化钠注射液稀释成每1ml中含5个单位或10个单位的溶液，作为供试品溶液；另取合成缩宫素标准品适量，同法配制，作为标准品溶液。照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录 D），用辛基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1mol/L磷酸二氢钠溶液-乙腈（8218）为流动相；流速为每分钟0.8 ml；检测波长为220nm。取标准品溶液和供试品溶液各20l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品主峰和标准品主峰的保留时间一致。另取空白试剂，同法试验。三批样品及市售品鉴别结果见表2-3及图2-12-6。表2-3高效液相保留时间鉴别结果批号对照品120307120310120314市售保留时间（min）6.3706.3726.3786.3736.374结果表明：本品三批样品和市售样品按上述方法检测，结果均符合规定，空白试剂无干扰。2-4检查2.4.1pH值取本品适量，依法测定pH值（中国药典2005年版二部附录 H）。表2-4pH值检查结果批号120307120310120314市售pH值3.683.553.613.65结果表明：本品三批样品和市售样品的pH值均在3.04.0范围内，暂将本品的pH值限度定为3.04.0。2.4.2氨基酸比值（1）色谱条件仪器：HP（惠普）1050型液相色谱仪色谱柱：Hypersil BDS（1504.6mm）大连依利特流动相：A相：20mmol/L乙酸钠，0.02%三乙胺，0.3%四氢呋喃，用15%磷酸调pH7.2B相：100mmol/L乙酸钠甲醇乙腈（200450350）流速：1ml/min梯度：027min B：060%28.5 min 100%30 min 100%检测波长：025 min 338nm 2530min 262 nm（2）氨基酸对照品：浓度为1nmol/lCys- Cys，Tyr，Ile，Leu，Asp，Glu，Gly，Pro，（HP公司出品）（3）测定原理 邻苯二甲醛氯甲酸芴甲酯全自动柱前衍生化，C18柱反相分离；利用氨基酸对照品外标法进行定性、定量计算。（4）测定 取本品3ml，置硬质安瓿中，加盐酸3ml，摇匀，减压封口，置110加热20小时，冷却，启封，转移至蒸发皿中，蒸发至干，加0.02mol/L盐酸溶液10ml使残留物溶解，作为供试品溶液。准确吸取供试品溶液1l，分别加硼酸缓冲液（0.4mol/L，pH10.4）5l，邻苯二甲醛1l，氯甲酸芴甲酯1l，进行衍生化，注入液相色谱仪，分离测定。另取天冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、亮氨酸、酪氨酸、异亮氨酸和半胱氨酸对照品适量，加0.02mol/L盐酸溶液制成每1ml中约含各氨基酸0.2mol的溶液，作为对照品溶液，同法测定。同时另取市售缩宫素溶液同法测定，结果见表2-5及图2-72-11。表2-5氨基酸比值检查结果 批号比值120307120310120314市售天冬氨酸0.960.991.001.01谷氨酸0.960.991.011.03脯氨酸1.041.020.990.98甘氨酸0.950.960.970.97亮氨酸1.021.001.011.03异亮氨酸1.031.001.030.99酪氨酸0.930.910.950.94半胱氨酸1.421.471.591.66结果表明：三批样品中各氨基酸的比值：天冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸均为0.951.05；亮氨酸、异亮氨酸均为0.901.10；酪氨酸均为0.71.05；半胱氨酸均为1.42.1。本品氨基酸比值与市售样品相差不大。2.4.3升压物质取本品适量，用氯化钠注射液稀释成每1ml中2个单位的溶液，依法检查（中国要药典2005年版二部附录 F），每10单位缩宫素溶液中的升压物质不得过0.5单位。表2-6升压物质检查结果批号120307120310120314市售升压物质符合规定符合规定符合规定符合规定结果表明：三批样品及市售样品升压物质检查结果均符合规定。2.4.4细菌内毒素 取本品，依法检查（中国要药典2005年版二部附录 E），每1单位缩宫素中含内毒素的量应不得过0.5EU，检查结果见下表表2-7细菌内毒素检查结果批号120307120310120314市售细菌内毒素符合规定符合规定符合规定符合规定结果表明：三批样品及市售样品细菌内毒素检查结果均符合规定。2.5效价测定2.5.1仪器设备（见表2-8）表2-8 主要实验仪器表Table 2-8 Experiment instruments仪器名称仪器型号和规格生产厂家电子天平FA1104N上海精密科学仪器公司电动搅拌器D7401-4天津市化兴科学仪器厂液相色谱仪HP1050上海申盛生物技术有限公司三口烧瓶BZ24/29 100ml天玻移液管EX 20mlMC水浴锅W201上海申盛生物技术有限公司量筒01TXMC离体子宫测定仪DCDC-002南京分析仪器厂有限公司烧杯GG-17蜀牛2.5.2测定方法 参照国家药品监督管理局国家药品标准WS-10001-(HD-0903)-2002缩宫素溶液效价测定的方法，采用缩宫素生物测定法（中国药典2005年版二部附录 F）测定。本法系比较垂体后叶或合成缩宫素标准品（S）与供试品（T）引起离体大鼠子宫收缩的作用，以测定供试品的效价。标准品溶液的配制：迅速精密称取垂体后叶标准品适量，避免吸潮，先加少量0.25%醋酸溶液，仔细研磨，移置硬质大试管中，再精密加0.25%醋酸溶液使成每1ml中含缩宫素1单位的溶液。管口轻放一玻璃塞，浸入沸腾的水中，时时振摇，加热煮沸5分钟取出，迅速冷却，滤过，滤液分装于1ml洁净的安瓿中，熔封，4 8贮存，如无沉淀析出，可在3个月内使用。标准品稀释液的配制：试验当日，精密量取垂体后叶标准品溶液适量或取合成缩宫素标准品，按标示效价加0.9%氯化钠溶液配成每1ml中含缩宫素1单位的溶液，按高低剂量组（ds2、ds1）加0.9%氯化钠溶液配成两种浓度的稀释液，一般高浓度稀释液可配成每1ml中含0.010.02单位，高低剂量的比值（r）一般不得大于10.7。调节剂量使低剂量能引起子宫收缩，记录仪指针一般在2050mm；高剂量应不致使子宫收缩达到极限，记录仪指针一般在5085mm，且高低剂量所致子宫的收缩应有明显的差别。供试品溶液与稀释液的配制：按供试品的标示量或估计效价（AT），照标准品溶液与其稀释液的配制法配制，高低两种浓度的稀释液，其比值（r）应与标准品相等，供试品和标准品高低剂量所致的反应均值应相近。子宫蓄养液的配制：试验当日，取氯化钠9g、氯化钾0.42g、氯化钙（按无水物计算）0.06g与葡萄糖0.5g，加水700ml使溶解，另取碳酸氢钠0.5g，加水约200ml溶解后，缓缓倾注于前一溶液中，随加随搅拌，最后加水适量使成1000ml。供试用动物：取健康合格的成年雌性大鼠，断乳后即与雄鼠隔离，出生后不超过3个月，体重160240g。试验当日，选择阴道涂片在动情前期的动物，也可用雌性激素处理使子宫涂片为动情前期或动情期的动物。测定法：取选定的大鼠迅速处死，剖服取出子宫，仔细分离附在子宫肌上的结缔组织，注意避免因牵拉使子宫肌受损。在子宫分叉处剪下左右2条，取一条将其下端固定于离体器官恒温水浴装置的浴杯底部。上端用线与记录装置相连，以描记子宫收缩；浴杯中加入一定量的子宫肌蓄养液（约3050ml），连续通入适量空气。蓄养液应调节至3235并保持恒温（0.5），子宫放入浴杯后，静置约15分钟，按次序准确注入等体积的标准品和供试品两种浓度的稀释液（0.30.8ml），待子宫肌收缩至最高点开始松弛时（约6090秒钟），放去蓄养液并用蓄养液洗涤一次，再加入等量蓄养液，静置；相邻两次给药的间隔时间应相等（约35分钟），每次给药应在前一次反应恢复稳定以后进行。标准品稀释液和供试品稀释液各取高低两个剂量（ds2、ds1、dT2、dT1） 为一组，按随机区组设计的次序轮流注入每组4个剂量，重复46组。测量各剂量所致子宫收缩的高度，照生物检定统计法（附录XIV）中的量反应平行线测定法计算效价及实验误差。本法的可信限率FL（%）不得大于10%。2.5.3方法学考察（1）重复性取120307批样品，照效价测定法平行配制六份样品，测定样品效价，考察该效价测定方法的重复性，结果见下表。表2-9重复性试验结果序号效价（/ml）平均效价（/ml）211297.65297.700.702296.543295.854300.955295.976299.40结果表明：采用本法对同批样品平行试验六份，六次效价测定结果的RSD= 0.70 %，本方法重复性较好。（2）中间精密度取120307、120310、120314批样品，分别于不同时间、不同仪器，由不同的操作者试验，照前述效价测定方法依法测定样品效价，结果见下表。表2-10中间精密度试验结果时间2012年3月20日2012年3月21日RSD（%）仪器离体子宫测定仪-1离体子宫测定仪-2批号效价（/ml）120307295.95298.680.65120310282.52285.700.79120314310.94310.000.21结果表明：本品效价测定方法的中间精密度较好，准确可靠。（3）溶液稳定性试验取120307批样品，照效价测定法配制样品，分别于0、2、4、6小时测定效价，考察溶液的稳定性，结果见下表。表2-11溶液稳定性试验结果时间（小时）0246RSD（%）效价（/ml）300