实验动物学课件---第十章.动物实验基本技术.ppt

第 十 章 动物实验基本技术 本章内容 n第一节 小 鼠 第二节 大鼠 第三节 豚鼠 第四节 兔 第五节 实验动物处死方法 第六节 实验动物的病理剖检 一、实验动物标记编号的方法 (一)染色法： 1、单色涂染法： 在每组动物不超过l0只的情况下适用。 实验动物：大鼠、小鼠。 常用染色剂剂：3-5苦味酸溶液， 可染成黄色。 第一节 小 鼠 方法步骤： (1)涂染顺序：从左到右、从上到下。 (2)左前肢为l号、左侧腹部2号、 左后肢3号。 (3)头部4号、背部5号、 尾根部6号。 (4)右前肢7号、 右侧腹部8号、 右后肢9号。 (5)不作染色标记为标记为 10号。 2、双色涂染法： 在每组动物不超过100只的情况下 适用。 实验动物：大鼠、小鼠。 常用染色剂： (1)3-5苦味酸溶液，可染成黄色。 作为“个”位数。 (2) 0.5%中性红红或品红红溶液，可染 成红红色。作为为“十”位数。 方法步骤： (1) 用两种颜色同时进行染色标记。 (2) 用苦味酸(黄色)染色标记标记 作为为个 位数，个位数的染色标记标记 方法同单单 色涂染法。 (3) 用品红(红色)染色标记作为十位 数， （4）左前肢为10号、 左侧腹部20号、 左后肢30号， 头部40号、 背部50号、 尾根部60号， 右前肢70号、 右侧侧腹部 80号、 右后肢90号 第100号不作染色标记标记 。 二、小鼠的抓取保定： 器材：小鼠饲养盒+面罩1套。 方法步骤： 1、用右手拇指和食指捏 住小鼠尾巴中部将小鼠提 起，放在饲养合的面罩上。 2、用左手拇指和食指迅速、 准确地捏住小鼠的两耳后、 颈背部的皮肤，将小鼠提起。 3、翻转左手掌，以左手掌心和中指夹 小鼠背部的皮肤，使小鼠整个呈一条 直线。 4、用左手无名指 压住小鼠背部的 皮肤，小指压住 小鼠的尾巴根部。 5、松开捏住小鼠尾 巴的右手拇指和食指。 三、小鼠的给药方法： (一) 灌胃给药 原理： 将药液直接注入小鼠的胃内。 器材： 小鼠灌胃针针1支、注射器1支、 小鼠饲饲养盒+面罩1套、生理盐盐水、 烧烧杯。 方法步骤： 1、将灌胃针连接在注射器上，吸入一定量 的药液。 2、左手捉持小鼠，使小鼠头部向上。 3、右手将灌胃针头尖端从小鼠口角处进针 放进小鼠口咽部，顺咽后壁轻轻往下推，灌 胃针会顺着食管滑入小鼠的胃内。灌胃针插 入约3cm. 4、用右手食指将针栓慢慢往下压，将注射 器中的药液灌入小鼠的胃中。 剂量：约剂量：约0.5ml0.5ml10g10g体重。体重。 注意：在灌胃过程中，避免误插入气管。注意：在灌胃过程中，避免误插入气管。 （二）注射给药 1、皮下注射给药： 原理：将药液注入皮下结缔组织，经 毛细血管、淋巴管吸收进入血液循环。 器材：1m1注射器1支、生理盐盐水、烧烧 杯、酒精、碘酒、棉球。 方法步骤： (1)注射部位：选小鼠项背部的皮下。 (2)常规规消毒注射部位的皮肤，用注射针头针头 取 一锐锐角角度刺入皮下， (3)将针头轻轻向左右 摆动，易摆动则表示已 刺入皮下，再轻轻抽吸， 如无回血，可缓慢地将 药物注入皮下。 注射量：0.01ml0.03mlg体重。 2、肌肉注射给药 原理：将药液注入动物的肌肉组织，经 毛细血管吸收进入血液循环。 器材：1ml注射器1支、生理盐盐水、烧烧 杯、酒精、碘酒、棉球。 方法步骤： (1)操作时1人先将小鼠捉持保定好。 (2)另1人用左手抓住小鼠的1条后肢，右手拿 注射器，常规消毒注射部位的皮肤。 (3)将注射器针头在动物后 肢大腿外侧侧肌肉丰富处处呈 60度角迅速刺入后注入药液。 注射量：0.01m1g体重。 3、静脉注射给药 原理：将药液注入小鼠的尾静脉。 器材：1m1注射器1支、生理盐盐水、烧烧 杯、金属笼笼或小鼠固定器 、酒精、碘 酒、棉球。 方法步骤： (1)将小鼠放在金属笼或小鼠固定器中 ，通过金属笼或小鼠固定器的孔拉出小 鼠尾巴。 (2) 用左手捏住小鼠尾巴中部，用75 酒精棉球反复擦拭尾部。 (3) 注射时，以左手拇指和中指捏住鼠尾 两侧，用食指从下面托起尾巴，以无 名指夹住尾巴的末梢。 (4) 右手持4号针头针头 的注射器，使针头针头 与 静脉平行（小于30度角）。 (5) 从小鼠尾巴下14处进针，仔细观察， 如果无阻力，无白色皮丘出现，说明 已刺入血管，即可注入药物。 (6) 拔出针头后，用干棉球压住注射部位 约l、2min，防止出血。 注射量： 0.005m10.01 m1g体重。 4、腹腔注射给药 原理：将药液注入小鼠的腹腔。 器材：注射器1支、生理盐盐水、烧烧杯、 酒精、碘酒、棉球。 方法步骤： (1)用左手将小鼠捉持保定，使鼠腹部 朝上，鼠头略低于尾部。 (2)右手持注射器将针头针头 在下腹部靠近 腹白线线的两侧进侧进 行穿刺。 (3) 针头刺入皮下后进针3mm左右，接着使 注射针头与皮肤呈45度角刺入腹肌，穿过腹 肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔 后抵抗感消失。 (4)固定针头，保持针尖不动， 回抽针栓，如无回血、肠液 和尿液后即可注射药液。 注射量： 0.01m10.02 m1g体重。 三、小鼠的采血 摘除眼球采血法： 原理：将小鼠的眼球摘除后取血液 的方法。 器材：眼科弯镊镊、试试管。 方法步骤： (1)左手抓住小鼠颈部皮肤，轻压在实 验台上，取侧卧位; (2)左手食指尽量将小鼠眼周皮肤往颈颈 后压压，使眼球突出。 (3)用眼科弯镊夹去眼球，将鼠倒立， 用试管接住流出的血液。 (4)采血完毕立即用纱布压迫止血。 采血量：每次0.6-1.0ml/次。 一、大鼠的抓取保定： 器材：大鼠饲养盒 + 面罩 1套。 方法步骤： 1、首先戴好防护护手套。 2、用右手拇指和食指抓住小鼠尾巴中部将 大鼠提起，放在大鼠饲养盒的面罩上。 3、左手顺势按、卡在大鼠躯干 背部，稍加压力向头颈部滑行。 4、以左手拇指和食指捏住大鼠两耳 后部的头颈皮肤，其余三指和手掌 握住大鼠背部皮肤，完成抓取保定。 第二节第二节 大鼠大鼠 二、大鼠的给药方法： (一)灌胃给药 原理：将药液直接注入大鼠的胃内。 器材：大鼠灌胃针针1支、注射器1支、大鼠 饲饲养盒+面罩l套、生理盐盐水、烧烧杯 。 方法步骤： 1、将灌胃针连接在注射器上，吸入一定量 的药液。 2、左手捉持保定大鼠，右手将灌胃针头针头 尖 端放进进大鼠口咽部，顺顺咽后壁轻轻轻轻 往下推 ， 灌胃针针会顺顺着食管滑入大鼠的胃内。 灌胃针针插入约约5cm. 3、用右手食指将针栓慢慢往下压，将注 射器中的生理盐水灌入大鼠的胃中。 剂量：0.010.02mlg体重。 注意：在灌胃过程中，避免误插入气管。 (二) 注射给药 1、皮下注射给药 原理：将药液注入皮下结缔组织，经毛细 血管、淋巴管吸收进入血液循环。 器材：5ml注射器1支、生理盐盐水、烧烧杯、 酒精、碘酒、棉球。 方法步骤： (1) 注射部位：选大鼠的项背部的皮下。 (2) 常规规消毒注射部位的皮肤，用注射针头针头 取 一锐锐角角度刺入皮下。 (3) 将针头轻轻向左右摆动，易摆动则表示已 刺入皮下，再轻轻抽吸，如无回血，可缓慢 地将药物注入皮下。 注射量：0.01mlg体重。 2、肌肉注射给药 原理：将药液注入动物的肌肉组织，经 毛细血管吸收进入血液循环。 器材：1m1注射器1支、生理盐盐水、烧烧杯、 酒精、碘酒、棉球。 方法步骤： (1) 操作时1人先将大鼠捉持保定好。 (2) 另1人用左手抓住大鼠的1条后肢，右手拿 注射器，常规规消毒注射部位的皮肤。 (3) 将注射器针头在动物后肢大腿内侧肌肉丰 富处呈90度角，迅速刺入后注入药液。 注射量：0.01m1g 。 3、静脉注射给药 原理：将药液注入大鼠的尾静脉。 器材： 1ml注射器1支、生理盐盐水、烧烧杯、 金属笼笼或大鼠固定器、酒精、碘酒、棉球。 方法步骤： (1) 将大鼠放在金属笼笼或大鼠固定器中， 通过过金属笼笼或鼠夹夹的孔拉出大鼠尾巴。 (2) 用左手捏住大鼠尾巴中部，用75酒 精棉球反复擦拭尾部。 (3) 注射时时，以左手拇指和中指捏住鼠尾 两侧侧，用食指从下面托起尾巴。 (4) 右手持4号针头的注射器，使针头与静脉 平行(小于30度角)。 （5) 从大鼠尾巴下14或13处进针，仔 细观察，如果无阻力，无白色皮丘出 现，说明已刺入血管，即可注入药物。 注射量：0.0050.01 mlg体重。 4、腹腔注射给药 原理：将药液注入大鼠的腹腔。 器材：注射器1支、生理盐盐水、烧烧杯。 方法步骤： (1) 用左手将大鼠捉持保定，使鼠腹部朝 上，鼠头略低于尾部。 (2)右手持注射器将针头针头 在下腹部靠近腹 白线线的两侧进侧进 行穿刺。 (3)针头刺入皮下后进针3mm左右，接着使注 射针头与皮肤呈45度角刺入腹肌，穿过腹肌 进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后 抵抗感消失。 (4)固定针头，保持针尖不动， 回抽针栓，如无回血、肠液 和尿液后即可注射药液。 注射量： 0.010.02m1g体重。 三、大鼠的麻醉 原理： 是使用非挥发性麻醉药对动物进行全 麻术的方法。 器材： 3戊巴比妥钠钠、注射器。 方法步骤： (1) 用左手将大鼠捉持保定，使鼠腹部朝 上，鼠头略低于尾部。 (2) 右手持注射器将针头针头 在下腹部靠近腹 白线线的两侧进侧进 行穿刺。 (3) 针头刺入皮下后进针3mm左右，接着使 注射针头与皮肤呈45度角刺入腹肌，穿过腹 肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔 后抵抗感消失。 (4) 固定针头针头 ，保持针针尖不动动，回抽针针栓 ， 如无回血、肠肠液和尿液后即可注射药药液。 四、大鼠的采血 眼眶后静脉丛(窦)取血： 器材： 毛细管(玻璃或塑料均可)、 1肝素溶液、干燥皿、 乙醚、试管、干棉球。 方法步骤： 1、先将毛细管浸泡在1肝素溶液中数分 钟，然后取出干燥备用。 2、将大鼠进进行麻醉， 使大鼠保持侧侧卧位。 3、左手拇指、食指抓住两鼠耳之间的颈 部头皮，并轻轻向下压迫颈部两侧，致大 鼠静脉血回流障碍，眼球外突，眶后静脉 丛丛充血。 4、右手持毛细管由大鼠的内毗部插入结 膜，使毛细管与眶壁平行地向喉头方向推 进，深度约35mm 。 5、轻轻旋动毛细管，使其穿破静脉丛， 让血流顺毛细管流出。 采血量：0.40.6ml次。 一、豚鼠的抓取保定： 器材：大鼠饲饲养盒+带带面罩 l套。 第三节第三节 豚鼠豚鼠 方法步骤： 1、先用左手轻轻扣、 按住豚鼠背部。 2、顺势抓紧其肩胛上方皮肤， 拇指和食指环箍其颈部。 3、用右手轻轻轻轻 托住其臀部， 即可将豚鼠抓取保定。 二、豚鼠的给药方法： (一)灌胃给药 原理：将药液直接注入豚鼠的胃内。 器材：大鼠灌胃针针1支、注射器1支、 生理盐盐水、烧烧杯。 方法步骤： 1、将灌胃针连接在注射器上，吸入一定 量的生理盐水。 2、左手捉持保定豚鼠，右手将灌胃针头 尖端放进豚鼠口咽部，顺咽后壁轻轻 往下推，灌胃针针会顺顺着食管滑入大鼠 的胃内。灌胃针针插入约约5cm。 3、用右手食指将针栓慢慢往下压，将 注射器中的生理盐水注入豚鼠的胃中。 剂量：15ml。 注意：在灌胃过程中，避免误插入气管。 (二) 注射给药 1、皮下注射给药 原理： 将药液注入皮下结缔组织，经毛细血 管、淋巴管吸收进入血液循环。 器材： 1m1注射器1支、生理盐盐水、烧烧杯、酒 精、碘酒、棉球。 方法步骤： (1) 注射部位：选豚鼠的项背部的皮下。 (2) 常规规消毒注射部位的皮肤，注射针头针头 取一锐锐角角度刺入皮下。 (3) 将针头轻轻向左右摆动，易摆动则 表示已刺入皮下，再轻轻抽吸，如 无回血，可缓慢地将药物注入皮下。 注射量：0.01mlg 。 2、肌肉注射给药 原理：将药液注入动物的肌肉组织，经 毛细血管吸收进入血液循环。 器材：1m1注射器1支、生理盐盐水、烧烧杯、 酒精、碘酒、棉球。 方法步骤： (1) 操作时1人先将豚鼠捉持保定好。 (2) 另1人用左手抓住豚鼠的1条后肢， 右手拿注射器，常规规消毒注射部位。 (3) 将注射器针头在动物后肢大腿外侧 肌肉丰富处呈60度角，迅速刺入后 注入药液。 注射量：0.01mlg 。 一、兔的抓取保定： (一) 方法1： 步骤： 1、用右手把兔的两耳拿 在手心并抓住颈后部皮肤， 把兔提起。 2、然后用左手托住兔 的臀部。 第四节第四节 兔兔 (二) 方法2： 器材：兔保定架1个。 步骤： 1、打开保定架的上盖，抓取并将兔放进进架 内，迅速关上保定架的上盖。 2、右手抓住兔耳朵将头部拉过保定架的卡 栓，将兔的脖子保定。 3、如果兔挣挣扎，可用手 在它的背上轻轻抚轻轻抚 摸， 使其安静。 二、兔的给药方法 (一)灌胃给药 原理：将药液直接注入兔的胃内。 器材：兔开口器、14号胃管、注射器1支、 生理盐盐水、烧烧杯、石蜡油。 步骤： 1、将兔放进保定架内，助手用手轻轻压住 兔的背部，避免兔的挣扎。 2、灌胃者用在手拇指和中指挤压挤压 兔两颊颊 ，将下颌挤颌挤 开使兔被动张动张 口。 3、右手将开口器从一侧口角插入口腔并 固定。 4、用泡在石蜡油中的胃管，经经开口器的 孔插入，向前推进约进约 15cm，可达胃内 。 5、在插管时应将胃管另一端泡在水中 确认没有冒气泡，即可用注射器经 胃管注入药液。 灌胃量： 80-150ml只次。 注 意：在灌胃过程中， 避免误插入气管。 三、兔耳缘静脉或兔耳中央动脉穿刺 （用于兔的给药、抽血）： 原理：穿刺兔的耳缘静脉或耳中央动脉。 器材：兔保定架、注射器1支、生理盐水、 烧杯、酒精、碘酒、棉球。 方法步骤： (1) 将兔放在保定架内保定。 (2) 酒精消毒并揉搓血管， 使兔的耳缘静脉或耳中央动 脉充盈。 (3) 用左手食指和中指夹住兔的耳缘静脉或 耳中央动脉近心端，拇指和小指夹住耳郭边 缘部分，无名指和小指放在耳郭下作垫垫。 (4) 右手拿注射器，针尖的斜面朝上，将针 头插入血管，放松对静脉近心端的压迫，缓 慢把地药液注射进血管，或将血液抽出来。 注射或采血量：5一10ml。 一、注意事项： 1、应遵循安乐死的原则。 2、要保证实验人员的安全。 3、要确认实验动物已经死亡。 4、要注意环环保，避免污污染环环境，还还要妥 善处处理好尸体。 第五节第五节 实验动物处死方法实验动物处死方法 二、处处死方法： （一）颈椎脱臼处死法 1、是将实验动物的颈椎脱臼，断离脊髓 致死，为大、小鼠最常用的处死方法。 2、用右手抓住鼠尾根部并将其提起，放 在鼠笼笼盖或其他粗糙面上 3、用左手拇指、食指用力向下按压鼠头 及颈部。 4、右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方， 造成颈颈椎脱臼，脊髓与脑脑干断离，动动物 立即死亡。 （二）断头处头处 死法： 此法适用于鼠类类等较较小的实验动实验动 物，详见详见 教材。 （三）击击打头头盖骨处处死法： 主要用于豚鼠和兔的处处死， 详见详见 教材。 （四）放血处处死法： 此法适用于各种实验动实验动 物，详见详见 教材。 （五）空气栓塞处处死法： 处处死兔、猫、犬常用此法，详见详见 教材。 （六）过过量麻醉处处死法： 此法多用于处处死豚鼠和家兔，详见详见 教材。 （七）二氧化碳吸入法： 让实验动让实验动 物吸入大量C02等气体而中毒 死亡。 一、基本要求 （一）实验动实验动 物背景资资料记录记录 1、 实验动实验动 物来源、种类类、年龄龄、性别别、 原编编号、体重、临临床症状等。 2、剖检时间检时间 、地点，麻醉方法、时间时间 、 麻醉者，处处死方法、解剖者、记录记录 者、 温度、湿度 。 3、其它指标标：动动物剖杀杀前禁食（不禁水） 时间时间 一致，为为12h。 第六节第六节 实验动物的病理剖检实验动物的病理剖检 （二）病理取材基本要求 1、 病理检查应分层次进行，先进行一 般外观观察，然后剖检观察，再进行 光镜详细检查。 2、 通常选择选择 正常与病变变交界处组织处组织 ， 即包括病变变本身及病变变周围组织围组织 。 3、 对照组动物相同器官取材时，选材 部位应尽量一致。 4、 肉眼看不到明显病变时，各试验组 选取标本位置应一致。 5、 所选组织应选组织应 包括脏脏器全部层层次结结构或 重要结结构，如肾应肾应 包括皮质质、髓质质和肾肾盂 。 6、 体积大和分叶的器官，应视不同组织 选取多个部位，小器官可整体取材并固定， 如淋巴结、扁桃体、甲状腺等。 7、胃肠标肠标 本应应将内容物冲洗掉，以免 内 容物影响组织组织 的固定，产产生自溶。 8、所取材料应尽量保持肉眼标本的完整 性，不宜过厚或过薄，一般厚约3-5mm，大 小为1.5-2cm。 9、切取组织时组织时 不要挤压挤压 ，使用锋锋利刀 具，少用剪刀，勿选选用被器械钳压过钳压过 的部 位。 10、标本取材要熟练，尽可能快的完成整 个过程，特别是易自溶的组织，如肠道、脑