第二章生物安全防护课件

生生 物物 安安 全全 概概 要要 姚振江 流行病与卫生统计学系 广东药学院 1 以前的实验室. 现在的实验室对个人防护有了新的要求. 2 生物安全概要 简介 实验室内感染 生物危害分类 感染/生物危害控制 溢出响应 生物医学废弃物处理 总结 3 什么是生物安全? 从业人员处理生物危害材料时的措施， 以避免感染自己、他人或环境 达到此目的主要通过： 工程学控制 行政管理控制 操作与规程 个体防护设备 4 什么是生物危害? 例如： 病毒、细菌、真菌和寄生虫以及他们的毒素 血液和体液, 还有人和动物的组织 变异的细胞系和一些特定类型的核酸 是由生物或者此种生物产生的物质引起的对人 、动物或环境具有潜在威胁 5 为什么我们关注生物危害物质？ 可能获得实验室感染 (LAI) 环境污染 造成研究的污染 公众知晓 6 实验室感染 传播途径 易感宿主 感染源 经皮接种 吸入气溶胶 粘膜接触 食入 培养物和储存物 研究的动物 标本 免疫系统 免疫状况 年龄 7 只有20% 可查到原因 80% 是由人为的错误造成的 20% 是由于设备故障造成的 排在前4位的导致感染的事故 溢出或溅出 注射器及针 尖锐的物体，碎玻璃 动物或体外寄生虫的抓伤或咬伤 实验室感染 8 实验室感染 谁什么哪里何时如何 研究者SARS台湾2003年12月 微生物学家西尼罗病毒美国2002年8月划伤 实验室工作人员流脑美国2000年气溶胶? 实验室工作人员牛痘病毒欧洲2002年接触 9 19791999年间实验室相关感染（LAI）的统计 实验室感染 10 暴露的风险 有关的病原体 体液的类型 暴露的途径 暴露的持续时间暴露过程中的血液 量 此次暴露病毒的浓度 个人保护设备使用 11 如果发生了暴露或可能发生了暴露 开始急救 通知你的管理者或指定的人 向医院的急诊部门或大学的卫生服务部门 报告 向职业卫生、伤残和死亡办公室报告（电 话或网络） 12 全面预防 预防血传病原体传播的最简单的行之有效的方法 包括: 教育 洗手 穿防护设备 使用安全的工作规程 如果不能保证样品的非感染性，按照感染性样品处理 If samples cannot be guaranteed non-infective treat as infectious! 13 生物危害的分类 常见病原体 非传统的病原体 重组 DNA 组织培养 动物工作 解剖的标本 14 BSL 4 BSL 3 BSL 2 BSL 1 _ _ 水平按箭头方向由低到高 微生物对人、动物、植物和/或环境的危险性 程序和设备需求 围堵策略水平需求 对人员、环境和社区的保护程度 生物危害的等级 15 危险 分组 个体危险公众危险遏制例子 1 LowLowLevel 1 大肠杆菌 细杆菌 2 ModerateLimitedLevel 2 大肠杆菌 0157:H7, 链球菌、沙门 氏菌、腺病毒、肝炎病毒A、B、 C，流感，麻疹。 3 HighLowLevel 3 炭疽杆菌，结核分支杆菌，汉坦 病毒，HIV，黄热病度 4 HighHighLevel 4 拉沙病毒, 埃博拉病毒, 马尔堡病毒 Unlikely to cause disease in healthy workers or animals Rarely cause serious human or animal disease May cause serious disease Likely to cause very serious disease 常见病原体的等级 16 不常见的病原体 p传播性的海绵体脑病阮病毒疾病；致死性神经变 性情况庫賈氏病, 新型克雅氏病, 疯牛病,绵羊瘙痒 病，慢性消耗性疾病。 p对通常的灭活病毒的破坏方法产生抗性 p与危害处理办公室接触以评估其需求（防护、程 序、废弃物的处理） 17 重组DNA 危险级别依赖于DNA的来源 、载体及宿主 生物安全委员会将帮助研究 者作出这方面的判断 遗传工程 = 在体外将遗传物质从一个细胞参入到另一个细胞 18 组织培养 一般可能含有致病微生物的潜在风险 Level 2 人和灵长类的含有支原体的细胞系 当使用新的细胞系时要进行详细的评估 其他 Level 1 19 动物工作 动物可储存感染性的微生物（自然的或引进的） 等级基于所从事工作的类型 对所有从事动物工作的人员都需要进行专门的动 物照料培训 所有的工作包括动物的使用必须得到动物委员会 的许可 20 解剖的标本 所有的 标本都应考虑其可能存在的 感染性微生物 考虑标本的类型尤为重要 血液, 器官, 组织 脊髓, 脑组织 来自于感染的病人 一般而言，生物2级仅仅依据于其工 作的特性 21 感染/生物危害控制 工程控制 管理控制 实践与操作 个人防护设备 22 工程控制 在技术层面上, 通过改变危害的来源以减少 或 根除危害的暴露 防护: 一道 vs二道 防护水平 23 第一道防护（一级屏障） 确保工作人员和直接环境免受感染性微生物的暴露 保护性的外壳 封闭感染性的微生物或动物 培养皿, 玻璃罐, 瓶塞等 生物安全柜，手套箱和动物笼等装备 控制的效果取决于防护的完整性 24 第二道防护（二级屏障） 保护实验室外的环境 免遭暴露 包括实验室设计和规 章制度 25 生物安全防护水平 防护水平与危险水平相似 生物安全委员会将对研究提案进行评估以确保防 护水平恰当。 一级 二级 三级 四级 26 一级水平 最基本的实验室 不需要特别的设计特性 不需要生物安全柜可在 开放的实验台上进行工 作 27 二级水平 具有生物危害2级的临床 、诊断、研究和教学部门 如果具有气溶胶或溅出的 潜在风险，需要一级或二 级生物安全柜 必须制定处理溢出的应急 方案 使用权应加以控制 28 专门的设计和建造 一级屏障保护个体 二级屏障保护环境 所有工作人员必须进 行专门的培训：病原 微生物的使用，个人 防护设备，设备、废 弃物处理，还有实践 与操作 三级水平 安全柜：安全柜： 型(全密封型) 29 四级水平 在一个国家一般只有一个 设计规范异常的严格，工作人员完全与感染性 材料隔离 30 31 32 生物安全柜 对生物病原物理防护的有效方法 ，尤其当产生气溶胶时。 高效分子空气过滤器能以99.97% 的效率去除颗粒（最小 0.3微米） 有三个主要级别的安全柜（ I, II, III ） 能提供不同水平的保护。 33 在生物安全柜内安全操作 使用前: 确保生物安全柜经过检验 关闭紫外灯，打开荧光灯 用适宜的消毒剂消毒工作 台面 将最基本的条目放入安全 柜 在工作之前，让排风机运 转 5-10 分钟 34 使用中: 确保材料和器材放置在接近安全柜内的后部，尤其 是产生气溶胶的设备，不要阻挡通风口。 使用技术减少飞溅和气溶胶的产生。 总的工作流程应该是从清洁区域到污染区域。 减少运动以免阻碍气流 在生物安全柜内打开火焰存在着争议。 在生物安全柜内安全操作 35 使用后: 保持排风机工作至少5分钟以 清洁安全柜 移走和消毒用过的器材和材料 消毒安全柜台面 关闭排风机和荧光灯，打开紫 外灯。 在生物安全柜内安全操作 36 保养: 2次/天 -擦拭工作台面 1次/周 擦拭紫外灯 1次/月 擦拭所有的垂直面 1次/年 紫外灯强度验证 - 用甲醛气体去除沾染 (ORM) - 认证 (ORM) 在生物安全柜内安全操作 37 行政管理控制 危险评估 医学监测 培训/教育 资源 检查 符号 & 标志 根据程序、信息和方法将暴露危险降至最低 38 风险评估 确定防护的种类,方法和所需的安全设备 使用者的职责, 能从ORM得到的帮助 考虑的方面有:实验设计,方法,个人的经验和知识 情况等 http:/www.hc-sc.gc.ca/pphb-dgspsp/ols-bsl/lbg-ldmbl/pdf/lbg-3e-draft.pdf * 行政管理控制 39 医学监测 用医学方法监测环境污染对人类健康的影响 ，观察人群健康水平和人体对环境污染的生物学 效应。 培训 & 教育 实验室专门的政策和规程 生物安全培训 行政管理控制 40 检查 日常的自查 生物安全检查清单 此外, 检查实验室以确保其按照规程或 指导方针 工作并提供反馈意见 行政管理控制 41 标记 & 标签 生物危害标记必须粘贴在使用生物 危害材料的实验室的门上 生物危害标签应贴在使用生物病原 的容器、设备和储存装置上 行政管理控制 42 实践和规程 总的安全指导方针 好的微生物学实践 洗手 专门的规程 离心机 注射器、针头和其他的尖锐物 移液管 混匀器、研磨器、超声破碎仪、冷冻真空干 燥器 接种环 冷冻切片机 43 一般实验室安全指导方针 基本的常识,你必须了解你所面对的实验室的危险， 并且经过正确的培训以便处理这些危险。 最基本的是知道所有的实验危险 举出5个例子? b i o s a f et y 使用移液管和移液器 使用接种环 分离血清 打开安瓶 使用离心机 44 良好的微生物实践 (GMP) 基本的使用标准适用于所有的微生物学实验工作 目的 预防实验室人员和环境被污染 预防实验或样本被污染 无菌操作、减少气溶胶产生、控制污染、个人防 护、应急反应。 45 洗手 预防感染的单纯有效 的方法之一 如果经常正确的执行 何时洗手？ 开始任何操作之前 离开实验室之前 当手有明显的污物时 在安全柜内完成任何实验之前和之后 每次脱掉手套时 在触及脸和嘴之前 下班时 Level 1 lab - a non antiseptic soap can be used Level 2 lab - requires antiseptic hand washing solutions 46 安全使用离心机 使用前 裂纹？ 过满？ 平衡？ 盖子或塞子安置正确？ 转速能达到？ 使用可封闭的转子 使用后 离心完全停止？ 溢出或渗漏？ 使气溶胶沉降（30分钟）or 在生物安全柜内打开 47 注射剂及针 尽可能避免使用 在生物安全柜内完成感染性材料的操作 使用注射器时小心抽吸 保护从塞子退出的针 不要弄弯、切断或翻新针 处理所有使用过的针和注射器，将其放 入黄色的尖锐物体盛放器内 48 移液管 禁用嘴吸移液管 所有的生物危害材料的移液管都应在生物 安全柜内使用。 不要使液体溢出，使用移液管装置。 避免飞溅，沿管壁将液体慢慢注入试管或 瓶内 不要用抽-吸混匀溶液。 可再度使用的移液管应水平放置在已消毒 的浅盘上 49 混匀器、研磨器、超声破碎器和冷冻干燥器 尽可能地在BSC内操作，再打开前静置5分钟以 使气溶胶沉降。 安全地混匀 不要用玻璃混匀罐 使用后立即清除污染 冷冻真空干燥器 使用玻璃制造的真空部件时，确保使用前无损坏。 使用后所有的表面都要消毒 尽可能使用真空蒸发套 50 接种环 在开放的火焰上灭菌可能产生含有活微生物的气 溶胶 柄越短，越能减少震动 一次性的塑料接种环是较好的替代 51 冷冻干燥器 在准备冰冻切片时戴手套，当 使用冷冻干燥器时戴厚手套。 经常性的去污 (70%乙醇or 专 门的消毒剂) 防备和上锁! 52 个体防护设备 个体防护设备是非常重要的防护屏障，也是最后一道防护线 监督者和使用者的职责就是确保使用个体防护设备 护目镜 手套 实验室外衣 鞋 53 个体防护设备 考虑的标准 阻断暴露的途径 提供保护的级别 容易使用 只有当正确的选择、适合、小心使用和个体培训 才能产生效果 确保离开实验室前脱下个体防护设备 54 个体防护设备 鞋袜 应该穿包裹脚趾的鞋，在一些较高级防护的实验 室和动物设施部门穿靴子。 实验室外衣 长袖达膝的外衣 有弹性的袖口 后背系带的长大衣 定期清洗 55 个体防护设备 手套 对于从事生物病原的人使用乳胶、腈、乙烯树脂 材料的手套 测验的手套不应再用，实用的手套能消毒再用， 如果它们没有变形的征兆。 考虑弹性和手掌的长度 双层手套 危险处理办公室对那些具有过敏的人提供帮助， 找到替换材质的手套。 在公共场所不要带实验手套 56 个体防护设备 眼和脸防护 护目镜、安全眼镜可以保护眼睛 面罩可以保护面部皮肤 呼吸罩 57 溢出 溢出反应不同主要基于： 溢出的是什么？ 溢出多少？ 在哪里溢出的? 对环境潜在的风险是什么？ 溢出物应该被立即清理（除非产生了气溶胶）， 确保正确的去除污染方法 确保恰当的使用个体防护设备，清除设备容易使 用 58 溢出 一般清理 用吸收性物质盖住溢出区域 用恰当的消毒剂（10%漂白剂）浸泡溢出区 从吸收性物质的外围向内倒消毒剂 确保每个玻璃碎片都被捡起（用镊子！）并将其放 入尖锐物品盛放器内。 作用20-30分钟 擦拭掉吸收性物质 废弃物应放入适当的生物危害物品袋，以便高压灭 菌处理 59 溢出 特殊案例 在离心机内 在生物安全柜内 开放区域 (实验室, 再转送过程中) 可用的溢出响应方案在： http:/www.uottawa.ca/services/ehss/SPILLRESPONSEPLAN.pdf 60 废弃物处理 生物废弃物 (未处理) 61 废弃物处理 生物废弃物 (已处理) With H2O 1:10 In compliance with Sewer use by-laws * 62