抗人球蛋白试验

抗人球蛋白试验，又称 Coombs试验，是诊断自 身 免 疫 性 溶 血 性 贫 血 (AIHA)的重要依据。 【参考值】正常人直接与间接试验均为阴性，Coombs试验阴性有时并不能排除 AIHA。 【 临 床 意 义 】 直接试验是检查被检红细胞上有无不完全抗体，间接试验是检查血清中游离的不完全 抗体。直接 Coombs试验较间接试验对 AIHA 更有诊断价值。用特异性单价抗血清可将 AIHA 分为三型：IgG C3 阳性，占 67；单独 IgG 性，占 20；单独 C3 性，占 13； 阳 性 结 果 本试验阳性结果主要见于下列几种情况： 1.自身免疫性贫血， （IgG）型引起的溶血性贫血，本试验直接反应常呈强阳性，间接 反应大多阴性，但亦可阳性。 2.药物诱发的免 疫 性 溶 血 性 贫 血 -甲 基 多 巴 型：直接及间接反应均阳性。青霉 素型：直接反应阳性，间接反应阴性，以上二型如以正常红细胞先与有关药物于 37培育 后再加病人血清、间接反应均为阳性。福阿亭型：（奎宁等药物）抗体通常为 IgM，偶 有 IgG 型者，直接反应为阳性，间接反应阴性，但如用 IgG 抗血清做试剂则结果大部分均 为阴性，但如培育时加入新鲜正常人血清（供应补体）则结果为阳性。 3.冷 凝 集 素 综合征直接反应阳性，间接反应阴性（试验需在 37下进行）由于本病红 细胞膜附着的是补体 C4 和 C3 而不是 IgG 或 IgM，如果用抗 IgG 或抗 IgM 抗血清做试验 时，则结果阴性，如以抗补体的抗血清做试验则直接反应阳性。 4.新生儿同种免疫溶血病，因 Rh 血型不合所致溶血病，直接及间接反应均强阳性，持 续数周、换血输血后数天内可变为阴性，由于“ABO”血型不合引起的溶血病，结果常为阴 性或弱阳性。 5.红细胞血型不合引起的输血反应，ABO 或 Rh 血型不合输血，供者的红细胞被受者 的血型抗体致敏，在供者被致敏的红细胞完全破坏以前，直接反应阳性，Rh 阴性者如过去 不曾接受过 Rh 阳性者的血或曾妊娠胎儿为 Rh 阳性者，间接反应阳性，如无上述接触，第 一次输血后（Rh 阳性的血） ，数天之内间接反应也会变为阳性。 6.其它在传 染 性 单 核 细 胞 增 多 症 、SLE 、恶性淋巴瘤、慢 性 淋 巴 细 胞 白 血 病 、癌肿、 铅中毒、结节性动脉周围炎、EVan 氏综合征等，病人直接反应亦可阳性，阵发性寒冷性血 红蛋白尿症患者中，急性发作后用抗补体血清做试验直接反应常为阳性。 【 要 求 】 用肝素或 EDTA 抗凝血做直接 Coombs试验，血清做间接 Coombs试验。 抗人球蛋白试验 项目意义: 抗人球蛋白试验(anti human globulin test) 又 称 Coombs 试验。 临床意义 1正常人抗人球蛋白试验直接、间接试验均呈 阴性。 2温抗体型自身免疫性溶血性贫血、新生儿同 种免疫溶血病常呈直接试验阳性反应。 3自身免疫性溶血性贫血大多属于温抗体型(主 要为 IgG)。但也有小部分属于冷抗体型(主要为 IgM)。故必要时应于4条件下进行试验以检出其冷 抗体，否则会导致假阴性反应。 4由于病人不完全抗体的性质不同,含量不一，以 及所用抗血清效价的影响，本试验的检出阳性率也不 致,故除用多价的抗人球蛋白血清进行试验外,必要时 需加用单价抗血清,以提出检出阳性率。 5. 间接抗人球蛋白试验主要检测病人血清中是否 有不完全抗体,常用于 Rh 或 ABO 型新生儿同种免疫 溶血病的母体血清中不完全抗体的检测验。因其敏感 性差，很少用于 AI-HA 的诊断。 6. 本试验阳性还可见于系统性红斑狼疮、类风湿 性关节炎、淋巴瘤、恶性肿瘤、甲基多巴及青霉素型 药物诱发性免疫性溶血性贫血等。 7. 本试验较易发生假性阴性反应。如：试剂不 适宜；自身抗体的解离常数高；红细胞上所吸咐 的抗体浓度过低；发病早期即已大量应用肾上腺皮 质激素。 1 原理：温抗体溶血的自身抗体为 IgG 在 AIHA 的患者中，此抗体能与表面附有相 应抗原的红细胞结合，使红细胞致敏而不发生凝集，待加入抗人球蛋白血清（AHGS）后， 则与红细胞上粘附的 IgG 相结合，使红细胞串并在一起而发生凝集，此即为直接抗人球蛋 白试验（） 。患者血清中存在游离的自身抗体，则可用 Rno(D)阳性的型红细胞加 以吸附，再用已吸附有自身抗体的红细胞与 AHGS 作用而发生凝集反应，此即为间接抗人 球蛋白试验（） 。 2 试剂：抗人球蛋白（IgG;IgM;IgA;C3,IgG1;IgG2;IgG3;IgG4 美国产） 。 3 操作： 31 在 8060mm 平板玻片，用油漆均分成 12 个小格。 32 将各种抗人球和 C3 分别作倍比稀释（2；4；8-）后；依次吸取 10ul 于格内，做 好标记。 33 每孔加入洗涤后 5被检 RBC 悬液 10ul。 34 混匀放密闭保湿盒内，37 度保温 30 分钟；（每隔 10 秒混匀一次）于镜下作效价和 分值测定。 4. 结果： （）：2 分 反应液中有 35 个小凝块（4 个 RBC 以上紧密聚集） 。 （） ：4 分 反应液中有 610 个小凝块游离 RBC 约 34。 （）：6 分 反应液中有 1130 个中等大小凝块游离 RBC 约 12。 （）：8 分反应液中有充满凝块游离 RBC 约 1 4。 （）：10 分 反应液 RBC 呈结实而大的凝块游离 RBC 极少。 5. 正常参考值：阴性。 . 注意事项： 患者血标本必须新鲜，血球洗涤要干净不带有血浆蛋白，一般生理盐水理为血 清量的倍以上。 每次试验应作阴阳对照。 对研究温抗体型 AIHA 而言，应选择单抗特异类（抗 IgG、IgC、3d、C3c 等） 的，不仅诊断所需，且可将温型抗体进一步分型。 血液用抗凝为佳且应立即试验，以防标本放置过程中有非特异性的补 体结合，致出现假阳性。 临床意义： 温抗体型导致的 AIHA,DAT,强阳性，IAT 多为阴性，但亦可阳性。 药物诱发的HA，根据类型不同：多巴类与均为阳性；青霉素类 阳性，阴性；奎宁类因其抗体多为 IgM 型，多为阴性；如改用抗人全 血球蛋白则可为阳性。 冷凝集素综合征：用抗人全血清的抗人球与度洗涤过的患者红细胞用试验， 亦可阳性，如用单抗 IgG 或 IgM 的特异抗血清用试验，则为阴性。度作 结果阴性，温度下降则阳性。 ：患者在溶血发作时，强阳性，发作后转阴性；常为阴性。 新生儿同种免溶贫：本病是孕妇