饥饿与饱食对肝糖原的影响课件

1 实验六 饱食和饥饿对白鼠肝糖原 含量的比较 2 【 实验目的 】 掌握糖原合成的主要影响因素， 熟悉糖原与葡萄糖的定性鉴定方法。 掌握低速常温离心机的使用，了解离 心技术。 3 肝糖原是由许多葡萄糖分子聚合而成的物质， 是动物机体能迅速动用的糖储存形式之一。 【 原理 】 4 肝糖原含量定性比较 【 原理 】 提取 :用三氯醋酸破坏肝组织的酶和蛋白质，使其沉 淀而保留糖原，再用乙醇将糖原从滤液中沉淀出来 ，溶于热水中，即为糖原溶液。 糖原溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色；性质 经酸水解可生成还原性的葡萄糖，后者可将 碱性铜溶液 (班氏试剂 )中二价铜还原成氧化 亚铜。 5 【 试剂与器材 】 1.小白鼠 （饥饿与饱食，一组各一只）。 2.白瓷盘 、手术剪 3.研钵、漏斗、滤纸 4.低速常温 离心机 （ TDL-SD-2B) 5.离心管 6.试管及试管架、烧杯 7.恒温水浴锅 8. 5%三氯醋酸溶液 , 0.3%碘液 , 95%乙醇 , 20%NaOH溶液 ,浓盐酸 溶液 ,班氏定性试剂 6 小白鼠 肝 脱颈处死 脱颈处死 右手抓住鼠尾用力向后拉 ,同时左手拇指与食指用力向 下按住鼠头。将脊髓与脑髓拉 断，鼠便立即死亡。 【 操作 】 7 小白鼠 肝 脱颈处死 5三氯醋酸 6mL, 匀浆 过滤 滤纸先润湿 滤液等体积乙醇 混匀后， 3000rpm,离心 3min 弃上清，沉淀加 5mL H2O 比较滤液 浑浊度 观察、对比 溶液现象 取该液 2mL0.3碘液 2滴 , 混匀 观察、记录颜色，与 对照组对比 取该液 2mL 加盐酸 10滴，沸水浴 10min; 冷后， 20 NaOH20滴中和 可加热助溶 冷却 取水解液 5滴 加班氏液 1mL,混 匀，沸水浴 3min 观察、记录现象，与对照组对比 空白对照、饥 饿组与饱食组 8 小白鼠 肝 脱颈处死 5三氯醋酸 6mL, 匀浆 过滤 滤液等体积乙醇 混匀后， 3000rpm,离心 3min 弃上清，沉淀加 5mL H2O 观察、对比 溶液现象 取该液 2mL0.3碘液 2滴 , 混匀 观察、记录颜色，与 对照组对比 取该液 2mL 加盐酸 10滴，沸水浴 10min; 冷后， 20 NaOH20滴中和 冷却 取水解液 5滴 加班氏液 1mL,混 匀，沸水浴 3min 观察、记录现象，与对照组对比 9 离心分离技术 离心技术 就是利用离心机的转子高速旋转时产生的强 大离心力，使置于该旋转体中的悬浮颗粒发生沉降或 漂浮，从而使某些颗粒达到浓缩或与其他颗粒分离的 目的。 10 离心试管盛放的溶液不能过多。 离心管 等重（连同套管）、对称 放 入转子，以保持离心机的平衡。 将离心机盖好，开机， 缓缓 调速旋 钮， 逐步加速 至所需的转速（开机 前，调速旋钮应置零）。 离心完毕，将调速旋钮降低至零， 关机， 待离心机停稳后 才可开盖取 物。切勿用手或其他物件强行减速 操作要点： 11 (1) 离心机为高速旋转设备，放置必须 绝对平衡 。 (2) 在启动离心机时，应检查 开关是否在零位 ，调速器 是否在 零 或在转速 较小处 ，用手轻轻转动转轴看是否能 自由旋转。 (3) 离心机的金属 (或塑料 )离心套管必须完整，管底应 垫好软垫 (棉花或胶垫 )。 (4) 使用完毕，必须用干布擦净离心套管内的液体。 (5) 在使用中如发现声音不正常或振动异常，应立即切 断电源，待检查修复后再使用。 (6) 操作人员 不得远离 工作中的离心机。 离心操作注意事项： 12 实验结果 滤液浑浊度 糖原沉淀量 加 0.3%碘 液 加入班氏试 剂 饥饿组 饱食组 空白对照 饥饿和饱食对小白鼠肝糖原含量的影响 项目 处理 每位同学根据自已和同组同学的结果，综合记录并讨论。 13 1、为什么要同时做饥饿和饱食处理的两组小鼠？ 2、如何避免个体差异给实验带来的影响？ 思考题 14 实验结果 滤液浑浊 度 糖原沉淀 量 加