(课件)-人感染猪链球菌病样品采集运送与实验室检测方案

人 感 染 猪 链 球 菌 病样品采集运送与实验室检测方案浙江省丽水市人感染链球菌病疫情控制和诊疗技术 培训会议 丽水市 CDC 兰进权提纲 病原学简介 样品采集与运送 实验室检测病原学简介分类培养特性生化特征致病因子链球菌分类 伯杰分类6大类群， 29个种 16SrRNA序列同源性和化学分类 链球菌属分类学定义 无芽孢革兰氏阳性细菌，细胞形态为球形或球杆状，直径 0.5 2.0微米，细胞成对或成链排列，有些种具有荚膜。 链球菌分类 根据溶血现象分类 甲型溶血性链球菌：称甲型溶血或 溶血， 溶血环中的红细胞并未完全溶解。多为条件致病菌。 乙型溶血性链球菌：称乙型溶血或 溶血， 溶血环中的红细胞完全溶解，致病力强 丙型链球菌：无溶血环，一般不致病 猪链球菌 溶血 (偶而也有弱 溶血或 溶血、 溶血现象均不明显 ) ，某些菌株在马血培养基上 溶血链球菌分类 根据抗原结构的分类 兰氏分类： 按 多糖类抗原（ C抗原）将链球菌 分成A、 B、 C、 D、 E、 F、 G、 H、 K、 L、 M、 N、 O、 P、 Q、 R、 S和 T群 (其中缺 I、 J群 ) ，近年又增加 U、V群，共 20群，每个群有 1个或多个种。 几乎所有群的菌株，都能从病猪体内分离得到，引起猪病并偶尔经伤口感染人的链球菌主要有 R群的 2型猪链球菌 S群和 D群的 1型猪链球菌 F群的咽峡炎链球菌 L、 S、 T、 U、 V群链球菌等链球菌分类 猪链球菌血清 2型 兰氏分类： R群 根据菌体荚膜抗原特性不同，分为 35个血清型： 1/2， 1 34型 致病性最强的是 2型，其次为 1型 2型猪链球菌 1954年英国分离 1968年命名为荚膜 II型猪链球菌 分为致病力不同的株猪链球菌培养特性 革兰氏阳性 无芽胞 球菌，兼性厌氧 营养要求较高，在普通培养基中生长不良，需补充血液、血清、葡萄糖等 在血清肉汤中易形成长链，管底呈絮状沉淀 在绵羊鲜血琼脂平板上 37 培养 24小时，形成直径 l 2毫米的细小菌落，灰白色，半透明，边缘整齐，凸起，光滑， 溶血（ 有时呈弱 溶血或溶血不明显 ）， 48小时后可有草绿色色素沉着。猪链球菌培养特性 刚分离的猪链球菌，典型的革兰氏阳性链球菌，链长达二十多个 二代培养后细菌形态不典型，结晶紫作色不良，多为 不成链 球杆菌，少数呈短链状。链球菌 . Gram stain. CDC/Dr. Richard Facklam 链球菌猪链球菌培养特性 10 培养不生长， 45 培养生长，60 30分钟试验不生长 5530 分钟即可被杀死 猪链球菌生化特征 猪链球菌生化特性往往差异较大，一般难以作为分类依据 触酶试验阴性 水解七叶苷、淀粉和精氨酸，不水解马尿酸盐和明胶 分解乳糖、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露糖，不分解阿拉伯糖、鼠李糖和甘露醇致病因子 猪链球菌 2型主要 致病因子 溶菌酶释放蛋白（ muramidase-released protein,MRP） 细胞外因子（ extracellular factor,EF） 猪溶素（ suilysin） 荚 膜多糖 用南通地区分离的人源猪链球菌对兔和小白鼠的攻击试验表明，猪链可使家兔发病，并引起死亡。而小白鼠不敏感样品采集与运送采样器材样品种类血液和脑脊液标本采集方法样品运输保存注意事项采样器材 无菌 封闭性好的试管，最好使用负压采血管或带螺口盖的塑料管，避免使用玻璃试管。 可以清楚标记且标记不易脱落的记号笔。 可以方便采集组织标本的无菌容器。 无菌的剪刀、镊子和手术刀。采样器材 血平皿 (或者血培养瓶 )。 一次性隔离服、 乳胶手套 、防护口罩等 带有冰袋或者冰排的安全可靠的保温运输容器 采样送检单样品种类 现症病人不抗凝全血 现症病人 抗凝血 发病 4 7天、 10 16天不抗凝血 脑脊液标本 尸体解剖应无菌采集肝、脾、心血、胸（腹）水 如有病死猪也可进行解剖，取肝、脾、肾、心血、肉 血液和脑脊液标本采集方法 无菌抽取血液 5 10ml分置于有抗凝剂和无抗凝剂的无菌试管或者负压采血管中 按常规方法腰穿采集适量脑脊液标本置于无菌试管中 采集标本的同时接种血平皿或者血培养瓶，置于 35 37 培养样品运输保存 所有的原始标本在转运过程中应置于安全可靠容器中。 标本应冷藏运输。 需要马上检测的标本在实验室可暂放 4-8冰箱。 剩余标本放置于 -70 保存。 注意事项 严格 无菌操作 ，防止标本污染。 用于分离培养的标本应在 抗菌治疗前采集 。 应尽可能 床边接种分离 培养，如无法立即接种，应在样品送达实验室后立即进行分离。 在标本采集过程中，注意安全防护。使用一次性隔离服、 乳胶手套 、防护口罩 采取预防措施，防止针头等 锐器刺伤 如发生伤口意外暴露，应及时清洗和消毒，并预防性服药实验室检测 猪链球菌检验程序推片镜检分离鉴定检测要点 猪链球菌检验程序 病人检样（脑脊液、血液等）增菌培养（脑心肉汤 /牛血清葡萄糖肉汤 /血培养瓶）革兰氏染色触酶试验 推片镜检 猪链球菌检验程序 (