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文档简介

1、实验七 稀释平板计数法及土壤中真菌的分离纯化,一、实验目的,掌握活菌计数的基本原理及方法 掌握从样品中分离目的微生物的原理及方法,二、实验原理-稀释平皿计数法,将微生物细胞充分稀释到单个分散，把这些单个分散的细胞均匀涂布在平皿培养基上，培养后长出的菌落肉眼可见，每个菌落都由原液中单个细胞发育而来，计算菌落数，通过公式可以求出单位原样品中的活菌数。 每ml(g)样品中的活菌数=（每皿菌落数平均值/取样体积）稀释倍数,二、实验原理-土壤中真菌的分离纯化,马丁孟加拉红-链霉素培养基 马丁培养基 孟加拉红 链霉素,三、实验器材,（一）培养基 1、牛肉膏蛋白胨培养基 2、马丁孟加拉红-链霉素培养基 （二

2、）其他 1、无菌培养皿 2、无菌吸管 3、无菌水 （三）仪器 1、超净工作台 2、玻璃刮铲 3、酒精棉球,四、实验步骤-稀释平板计数法,1、熔化培养基 2、倒平皿 3、梯度稀释法稀释原菌样品,四、实验步骤,4、涂平皿： 选取1/106,1/107,1/108三个稀释度计数，每皿取菌液0.1ml，用玻璃刮铲涂布均匀，每个稀释度做一个重复。 5、37倒置培养2天 6、计数：,每ml原菌样品中微生物的活细胞数（菌落形成数，CFU （同一稀释度平板上菌落平均数稀释倍数）/原菌样品体积（ml）,菌落计数规则： （一）选择平均菌落数在30300间的平板 1、只有一个稀释度符合，以该稀释度的平均菌落数乘以稀

3、释倍数报告； 2、有两个稀释度符合，取决于二者比值（高稀释度的菌落数除以低稀释度的菌落数的值）： 1）若0.5比值2，以两稀释度的菌落数乘稀释倍数所得的值的均值报告。 2）若2比值或比值 0.5，则取其中较少的菌落总数进行报告。 （二）所有菌落数均不在30300间 以最接近30或300的平均菌落数乘稀释倍数 1、若所有稀释度的菌落平均数均大于300，则按稀释倍数最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告； 2、若所有稀释度的菌落平均数均小于30，则按稀释倍数最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告；,四、实验步骤-从土壤里分离真菌,1、熔化培养基 2、倒平皿 3、捻碎土样，将土样溶解在90ml无菌水三角瓶中 4、梯度稀释法稀释土样,10g,90ml,10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,4、涂平皿： 每个稀释度均需要涂布平皿，每皿取菌液0.1ml，用玻璃刮铲涂布均匀。 5、28倒置培养37天 6、观察并描述真菌菌落特征,五、实验结果及分析,稀释平皿计数法：,每ml原菌样品中微生物的活细胞数（菌落形成数，

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