SOP-QC-增补本药典-沉降菌及表面微生物测试标准操作规程

1、.制药厂GMP操作文件名 称沉降菌及表面微生物测试标准操作规程第 1 页 共 3 页 附件 0 个编 号颁发部门制 定 人审 核 人批 准 人制定日期审核日期批准日期分 发 至生效日期目的：建立正确的洁净实验室、洁净厂房沉降菌表面微生物测试标准操作规程，保证药品在规定洁净级别内进行。范围：要求有净化级别的实验室、厂房责任人：QA洁净度检测人员、微生物检验人员对本制度的实施负责。依据：医药工业洁净室和洁净区中沉降菌的测试方法，药品生产质量管理规范（2010年修订）内容：1 仪器：微波炉、生化培养箱、电冰箱、净化工作台。2 用具：培养皿、无菌触碟、消毒棉棒，应在实验前经灭菌后备用。3 培养基：胰酪

2、胨大豆琼脂培养基、PH7.04 培养皿的制备： 将培养皿在121湿热灭菌30分钟。配制培养基并灭菌，将灭菌培养基加热熔化，冷至4560，在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿1520ml，待培养基凝固后，将培养基平皿倒置于3035恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。5 测试方法及步骤5.1 采样前洁净区的状态：5.1.1 沉降菌测试前：被测试洁净室（区）的温湿度须达到（1826）相对湿度在（45%65%）为宜；压差必须控制在规定值内。5.1.2 测试状态有静态和动态两种，并在报告中注明测试状态。静态测试时，室内测试人员不得多于2人。被测试洁净室（区）已消毒。测

3、试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。测试报告中应标明测试时所采用的状态和室内测试人员数。5.1.3 在空态或静态a（无生产人员）测试时，对单向流洁净室而言，测试宜在净化空气调节系统正常运行时间不少于10min后开始，对非单向流洁净室，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。在静态b测试时（生产结束人员撤离），对单向流洁净室而言，测试应在生产操作人员撤离现场并经过10min自净后开始，对非单向流洁净室，测试应在生产操作人员撤离现场并经过20min自净后开始。5.1.4 在动态测试时，则须记录生产开始的时间以及测试时间。5.2采样点数量及其布置5.2.1采样点的确定： 根据洁净区（室

4、）面积大小确定最少采样点数目（根据国家标准GB/T16294-2010要求），在满足最少采样点数目的同时，还宜同时满足最少培养皿数。采样点的布置应力求均匀，避免在某局部区域过于集中，培养皿应布置在有代表性的地方（如关键设备或易受污染的地方）和气流扰动最小的地方。工作区测试点位置离地0.81.5m左右（略高于工作面），可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。5.2.2 最少采样点数目在满足最少采样点数目的同时，还宜满足最少培养皿数。面积m洁净度级别微生物最大沉降菌数沉降菌 个/皿最少采样点数最少培养皿数10A级123142040C级502240100D级10022100200D级1003220

5、0400D级100624001000D级10013210002000D级1003222000D级10063290mm，CFU/4h(培养皿暴露时间不超过4小时，以平均菌落数表示)（1）A级洁净区采样点分布图（15点）（2）C、D级洁净区采样点分布图示意5.3 采样方法：5.3.1沉降菌：将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时（静态），4小时（动态），再将培养皿盖上盖后倒置。5.3.2表面微生物：5.3.2.1 无菌碟法：用无菌触碟(50mm)直接接触所检物体或工作服510秒，再将培养皿盖上盖后倒置。5.3.2.2棉签擦拭法：无菌棉签支擦拭物体表面25

6、cm2然后用消毒医用剪子将棉头放入100ml PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，振摇至均匀。按细菌检查法注皿。5.4 培养全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）配制的培养皿经采样后，在30-35培养，时间不少于2天。培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染。5.5 菌落计数：4.6.1达到规定的培养时间后，菌落数用肉眼直接计数、标记或在菌落计数器上点计，并用510倍放大镜检查，有否遗漏。 4.6.2将测得的数据进行计算，计算公式如下 平均菌落数M=（M1+M2+Mn）/n式中：M1=1号培养皿菌落数M2=2号培养皿菌落数Mn=n号培养皿菌落数n=培养皿总数6 注意事项6.1 采取一切措施防止人为对样本的污染。6.2 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或者正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。6.3 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或者污染的应剔除。6.4 沉降菌的测试需在悬浮粒子测试完成后并经过对洁净室的消毒，方能进行沉降菌的测试。6.5 测试记录：测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压