《血片制作与染色》PPT课件.ppt

1、疟原虫血片的制作与染色,河北省疾病预防控制中心 寄生虫病防治所 甄素娟,主要内容,厚薄血膜的制作 制作血膜的注意事项 吉氏染色液的配制 血膜的染色 影响染色的因素 病例标本采集 考试内容 考核评分表,血片制作,薄血膜:借推片将血液薄薄地涂在载玻片上，使每个血细胞平铺。 厚血膜:是把较多的血液涂成圆形，血膜中血细胞重叠，原虫较为集中。,采血时间,间日疟和三日疟可在发作后任何时间采血，但在发作后6 8小时内最佳； 恶性疟应在发作开始后不久作血检。 患者在开始发作时血检可能查不到疟原虫，应在第二次发作时再作血检,以免漏检。,取血部位,以耳垂较为合适，也可在手指末端采血，先用75%酒精棉球消毒取血部位

2、（冬季用手捻动耳垂使其充血后再行消毒），待干后，以左手拇指和食指夹住被检者手指尖稍下方或轻轻捻转耳垂边缘，右手持消毒刺针，迅速刺入取血部位12毫米深，然后用左手大拇指、食指和右手中指协同挤出血滴。,将玻片分为6等分，第1、2格备贴标签 及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄 血膜涂在第4格前缘至第6格中部。 作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个。,血膜的位置,薄血膜：取洁净的载玻片2张，1张做载片，以左手拇指，食指夹持载玻片两端，用另一张载玻片（最好为磨口边缘）做推片，用右手大拇指和食指夹持推片侧缘中部用推片一端边缘的中点从取血部分取约1l的血量（相当于1/4火柴头大小），使血滴与平置的载玻片

3、接触，并形成2535夹角，待血液向两侧扩展约2厘米长度时，均匀而迅速地向左推出约2.5厘米长舌状血膜。,（涂片操作）,厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取4 5l血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转4 6圈，涂成直径0.8 1厘米大小圆形厚血膜，血膜厚薄均匀，过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。 厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见5 10个白细胞为宜。,薄血膜 厚血膜 标记处,标准的血涂片,厚薄血膜的标准,厚血膜血量适宜，不宜过多或过少 薄血膜平整,无皱折和空泡.红细胞单层排列,血膜编号,血膜制成后，立即用特种蜡笔或水笔于玻片面上写上受检者的号码，以防

4、出错，待薄血膜干后再用铅笔于薄血膜中写上受检者的个人编号。编号由省里统一，具体各县市区的编码见技术手册附件。,制作血膜的注意事项,1、玻片清洗时，避免玻片碰撞、磨损。制作血膜的载玻片必须完全清洁而毫无油渍或污垢。制片时，手指只能持玻片的边缘，不能接触表面，以免油污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。作为推片的玻片边缘一定要平滑，才能使推出的血膜均匀一致。,制作血膜的注意事项,2、刚涂制的血膜要平放在标本盒内，厚血膜未干前勿使标本盒倾斜，以免血膜倾向一侧，造成血膜厚薄不均，厚处不易溶血和着色而影响检查结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜，干后应及时装入标本盒并盖严，新的木制标本

5、盒需敞开放置一段时间，让木醇挥发后才能使用，以免厚血膜血红蛋白被其固定，不能溶血或染色效果不佳。,制作血膜的注意事项,3、让血膜自然干燥，切忌用太阳晒或火烤，干透后才能用甲醇固定薄血膜。夏天标本尽可能48小时内固定染色；冬天也不能超过72小时。放置时间越久，厚血膜越不易溶血，染色效果也差。若不能及时染色，薄血膜宜先用甲醇固定，然后用过滤清水对厚血膜溶血，晾干后装入盒内盖严，待以后染色。,血片的染色（一）吉氏染液母液配置方法,取吉氏粉5克置于研钵中，加少量甘油充分研磨，再加再磨，至250ml加完为止，倒入500ml有塞的有色玻璃瓶中。在研钵中加少量甲醇，洗去甘油浓液混入瓶内，至250ml甲醇洗净

6、研钵中甘油染液为止，塞紧瓶塞，充分摇匀，置于温箱内24小时或室温内35天，每天摇动510min，即成原液。,材料： 1、吉氏粉5克 2、甘油250毫升 3、甲醇250毫升,血片的染色（二）吉氏染液血片染色方法,先用甲醇固定薄血膜，待干后进行染色。 成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入新配制的2%吉氏染液稀释液（2ml原液加中性蒸馏水98ml混合均匀），同时对厚薄血膜染色30min，然后向染色缸中注入缓冲液或自来水，直到溢出，除掉染液表面上的浮渣，将染色缸中残余的染液倾出，加入新水，反复冲洗23次，然后取出玻片，将血膜朝下插在晾片板上干燥。,血片的染色（二）吉氏染色方法,先用甲醇固

7、定薄血膜，待干后进行染色。亦可在固定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白，然后再染色。 单张血片染色:薄血膜经干燥固定后，用中性蒸馏水2ml，加吉氏原液23滴，混匀后滴在厚薄血膜上，染色2030分钟，然后用漂洗法轻轻将血膜上的染液冲洗干净，晾干镜检。 快染:量筒内量2ml缓冲液或净水，直接滴加吉氏原液7滴，混匀，滴入待染标本的厚薄血膜上，染色10min，清水漂洗，晾干镜检。,吉氏染剂是最可靠的血膜染剂，其优点是易于掌握，很少染色过度，染好后的血膜褪色较慢.,质量好的染色 : 核呈红色,胞浆呈蓝色或淡蓝色 如果血片偏红,说明染液偏酸性 如果血片偏蓝,说明染液偏硷性,吉氏染色血片外观,血片的染色（三

8、）注意事项,配置原液时过滤可除去杂质颗粒，有助于提高镜检质量。 固定薄血膜时不要将甲醇触碰到厚血膜。 冲洗染液时，不要冲走厚血膜。,(四）影响染色效果的因素,血片染色好坏除了与玻片是否清洁，血片制作质量好坏等有关外，还受到以下几个因素的影响： （1）染料溶剂的质量 染料、甲醇和甘油如果不纯，常使配制的染液偏酸或偏碱而影响染色效果。因此必须用分析纯的甲醇和中性甘油，而且在配制时所用的器具必须干净而无水份。,影响染色效果的因素,（2）染液的新旧 新配制的染液因色素尚未充分溶解，染色力较弱且常呈现偏碱性。染液存放时间越久，染色力越强。通常在染液配制12周后才使用，盛装染液的瓶子应加塞盖严，以防吸潮而

9、影响染液质量。,影响染色效果的因素,（3）染液稀释后使用时间 吉氏和瑞氏染液的主要成份是美蓝、伊红和由美蓝氧化产生的天青，三者能在酒精溶液中溶解，但在水溶液中伊红遇到美蓝和天青即产生沉淀。因此，稀释染液必须在配制后半小时内使用。,影响染色效果的因素,（4）染液的稀释浓度 染液的浓度高着色快，各种细胞着色深，薛氏点、茂氏点粗大显著，但颜色常偏碱；染液浓度低，着色慢，但各种细胞内部结构着色均匀、清晰，但薛氏点、茂氏点不够清楚。,影响染色效果的因素,（5）染色时间 染色时间长染色效果好，反之较差。室温高则着色快，染色时间可略缩短，气温低可适当延长。因此染色时间应根据染液的质量、新旧、稀释浓度和气温而适当增减。,影响染色效果的因素,（6）染色用水 为使厚薄血膜着色好，应使稀释的染液呈中性或稍偏碱性，故应用pH7.0 7.2的水稀释。如果染液偏酸或偏碱，可用缓冲蒸馏水调整。染色后发现血膜颜色偏蓝或偏红时，可用与之相反的酸、碱度水冲洗血片予以纠正。,影响染色效果的因素,（7）冲洗方法 染色后不要直接将染液倒掉，应沿玻片或染色缸边缘加水使染液表面一层溢出，并轻轻冲洗，以免染液色素颗粒沾污血膜。, 查完整个厚血膜未查见疟原虫,如何确定疟原虫血片为阴性,疟疾病人应采集标本,制作血涂片