《细菌形态学检查》PPT课件.ppt

1、细菌形态学检查,形态学检查的目的： 从形态上识别细菌，为细菌分类与鉴别的基础； 了解被检标本中有无细菌； 直接从标本中观察到某些细菌，可对少数疾病初步诊断（如结核，脑膜炎等）。,1.普通光学显微镜 原理 自然光的波长为0.4m；显微镜的最大分辨率为0.2m（前者的一半）；肉眼的分辨率为0.2mm，故放大1000倍，使0.2m放大到0.2mm。,第一节 显微镜（microscope）,2.暗视野显微镜 常用于活的微生物的动力检测,3.相差显微镜 利用相差板的光栅作用，使光波穿过标本中密度不同的部位时，引起位相差，显出光的强度的明暗对比。 应用于活菌的形态及某些内部结构的观察。,4.荧光显微镜 以

2、紫外光或蓝紫光作光源，因其波长比自然光短，故分辨率比普通显微镜要高。,5.电子显微镜： 以强大的电子流代替光源，因电子流的波长仅为0.005nm，（仅为可见光源的几万分之一），故其放大倍数可达10万-100万倍，可看清1nm的物体。 电镜种类 透射电镜：因电子的透射作用，可观察细菌，virus内部结构，通过荧屏显示。,扫描电镜：因电子流对物体的表面进行扫描，可清楚的显露出物体的三维空间的立体结构，可用于对细菌，virus的结构观察。,仅用于细菌动力的观察。 1.压滴法 明视野法、暗视野法。 2.悬滴法 3.毛细管法：孔径0.5-1.0mm，长约60-70mm毛细管，以此管轻取细菌培养物，待液体

3、进入后，两端火焰封融。用于厌氧菌的动力观察。 注意：区别细菌的运动与布朗运动。,第二节 不染色细菌标本检查法,一：染料：大多是人工合成的含苯环或苯的有机物。 色 基：即连接在苯环上带双键的有色化学基团 ， 它使染料带颜色，其色基越多，颜色越深 如-NO2(硝基） -N=N-（偶氮基） 助色基：不显色，它决定了染料与被染物之间的亲和 性，且有酸、碱之分，决定了染料的酸碱性: -NH2（碱性） -OH （酸性）,第三节 细菌染色标本的检查,常用染料种类： 碱性染料：美兰，结晶紫，碱性复红等，色基带正电，易与带负电的被染物结合着色 酸性染料：伊红，酸性复红，刚果红，色基带负电 复合染料：可与cell

4、浆结合 单纯染料：多为偶氮化合物，亲和力低，不溶于水，而溶于脂溶剂。,二 染色程序： 基本步骤： 涂片（干燥） 固定 染色 （初染、煤染、脱色、复染）,1.涂片制备： 液体标本（细菌培养液）直接涂于玻片上； 固体培养基上的培养物 ，取生理盐水涂片，涂成蚕豆大小的菌膜。,2.固定： 目的：杀死细菌，使蛋白质凝固，易于着色 改变其通透性，利于染料进入 使菌体附着在玻片上 保持细菌原有的形态、结构 方法：常用的火焰加热固定法。,3.染色： 目的：加固初染 媒染剂：石炭酸，碘液，明矾，酚等，也可加热。,目的：使不该染上颜色的部分脱下颜色 脱色剂：酸（为碱的脱色剂） 碱（为酸的脱色剂），还有甲醇，乙醇等

5、 脱色机制：影响蛋白质的电离程度，改变其电荷的 性质或数量，从而影响细菌与染料结合的程度,初染,媒染,脱色,（对比染色） 常用染料：稀释复红、沙黄（与紫色对比）、 美兰、苦味液（与红色对比）,复 染,三：常用的染色法,（一）单染法： 用一种染料染，细菌及周围部分都染成同一种颜色主要用于观察细菌的形态、大小、排列及简单的结构，如美兰染色，复红染色。 （二）复染法： 用两种以上的染料，将不同的细菌或同一细菌的不同结构染成不同的颜色。,由丹麦细菌学家Christain Gram首创，已有100多年的历史。 染料： 结晶紫、卢戈氏碘液、 95%酒精、稀释石炭酸复红,1.革兰染色法（Gram stain

6、):,原理： （1）等电点学说：革兰阳性菌ph2-3,低于革兰阴性菌ph4-5。 （2）化学学说：革兰阳性菌含大量核糖核酸镁盐。 （3）通透性学说：革兰阳性菌cell wall因肽聚糖厚，脂类少， 通透性低，酒精不易进入脱色，相反革兰阴性菌肽聚糖少，含脂多，易被酒精溶解，使cell wall通透性升高。,结晶紫（初染）,卢戈氏碘液（媒染）,95%酒精（脱色）,稀释石炭酸复红（复染）,1min 水洗,1min 水洗,1min 水洗,结果： 意义：,方法：,2. 抗酸染色 （acid-fast stain）,原 理：分枝杆菌一般不易着色，若用5%石炭酸复红加温并延长染色时间，可染上红色，又因其菌体中含有分枝菌酸，可抵抗3%盐酸酒精的脱色，仍保持红色，故称为抗酸菌。,方 法：,石炭酸复红（初染）,盐酸酒精脱色,碱性美兰（复染）1min,加热至冒蒸汽 5min,涂片、干燥、固定,结 果： 意 义：,细胞壁染色： 染液：10鞣酸溶液、0.5结晶紫溶液 方法：涂片自然干燥鞣酸染15min，水洗 结晶紫染35min，水洗待干，镜检。 结果：细胞壁（细菌的周边）染成紫色，内部无色；无细胞壁的细菌（L型菌）整个菌体染成紫色。,3.特殊染色法,鞭毛染色法 芽孢染色法 荚膜染色法 异染颗粒染色法,透射 电镜,扫 描 电 镜,革兰阴性菌（红色）,革兰阳性菌（紫色）,1,2,3,图一,图二,鞭