液相色谱前处理培训.ppt

1、前处理解决方案 LabTech 2011.06,有机分析,LabTech公司介绍,LabTech是专业的实验室产品供应商，为全世界客户提供高品质的实验室产品，从实验室设计到实施，从样品前处理到分析，从样品接收到出数据报告，LabTech都从容帮您应对。 美国-欧洲-香港-北京,一、有机前处理概述,二、有机前处理方法-净化,共萃取物 提取过程中，不但将农药提取出来，样品基质中的相关成分如油脂，色素，糖分和蛋白等成分也会一同提取出来。这些物质被称为“共萃取物”。 意义： 这些物质不被去掉，干扰检测结果，污染检测仪器。去掉这些干扰物质的过程叫做净化。 净化过程中，残留农药可能由于净化和萃取物一起被分

2、离掉，造成丢失。,1、液-液分配法,原理：相似相溶 基于分配定律，利用农药在不同溶剂中的溶解度不同，经过多次液液分配，将残留农药转移到目标有机相的过程。 缺点：过程繁琐，消耗溶剂多，时间长，不适合快速检 测。,2、柱层柱类型, 弗罗里硅土柱：乙醚/石油醚 氧化铝柱：乙醚/正己烷 硅胶柱： 活性炭柱：乙腈/苯,柱色谱法净化过程,缺点：过程复杂，时间长，需要人工参与，受实验条件和实验人员素质影响大。,活化吸附剂（固定相）,装填,净化前淋洗,上样,淋洗,收集,冲洗柱子,收集液浓缩定容,3、 凝胶净化（GPC）,凝胶色谱：Gel Permeation Chromatography Size Exclu

3、sion Chromatography 是根据溶质分子大小进行分离的色谱技术。 柱填料凝胶具有不同尺寸的孔穴，凝胶孔径与分离组分分子大小相应，当大小不同的组分分子随流动相进入凝胶，他们进入微孔的程度不同，大分子不能进入孔穴，而分子越小进入微孔越深。因而保留时间不同。试样中各组分按分子大小进行洗脱。,4、 固相萃取,5、沉淀净化法,低温下，脂肪和蜡质形成结晶。 步骤: 丙酮提取80 沉淀 净化,6、化学净化法,针对动物样品 用强酸、强碱将样品基体消解掉。 留下农药母体并净化， 应用对象：有机氯农药,三、食品中色素的检测,参考国标： GB/T 5009.35-2003 食品中合成着色剂的测定 QB

4、 1415-91 食品添加剂 姜黄色素 GB 17511.1-2008 食用色素诱惑红 GB 8818-2008 食品添加剂 可可壳色素 SN/T 2105-2008 化妆品中柠檬黄和桔黄等水溶性色素的测定方法 ,国标方法,1 涉及检测物质种类有限，主要是果汁、汽水、配制酒类，糖，巧克力等着色糖衣制品，前处理方法主要采用聚酰胺吸附法。 2 纯手动操作，过程复杂，不满足快速有效的处理方法。 3 未提及多种复杂样品处理方式，如生活常见样品：可乐、冰激凌、沙拉酱、辣椒酱等。,实际解决方案,1 针对复杂样品，需要使用SPE 或者GPC（含油脂较多样品）去除基质干扰。 2 标准方法中的聚酰胺吸附法，商品

5、化的方法是采用聚酰胺SPE小柱进行萃取。,可乐中合成着色剂的测定,辣椒粉中苏丹染料的测定,食品中色素检测前处理典型案例,称样2g0.1g，其中清型果汁、汽水、酒等，用超声波脱气；口香糖糖衣、果冻，直接加10ml去离子水溶解色素；糕点、冷饮、酱菜等，加入乙酸锌和亚铁氰化钾各 2.5ml，用丙酮-水(90:10,V/V)10ml提取、混匀、离心，4,000r/min，3min，倒出上清液，再用5ml丙酮-水多次提取直至上清液无色，合并上清液至小烧杯，水浴挥干丙酮。腌腊肉等油脂含量高食品，先用是有醚30ml去除油脂，水浴挥干石油醚后用丙酮-水混合液提取，方法如上。 挥干残渣冷却后用2%柠檬酸23ml

6、溶解，上柱。用甲醇-甲酸(60:40,V/V)混合液洗去杂质，再用水洗至中性，弃去流出液，最后用乙醇-氨水-水(70:20:10,V/V/V)混合液洗脱，直至小柱色素完全被洗脱下，收集洗脱液，氮吹吹干。残渣用水溶解并定容至2ml，经滤头(0.45m)过滤，取10l进样。,方法说明,以上方法实际就是用SPE小柱提取净化的一个过程,四、植物油中苯并比的测定,参考国标： GBT 22509-2008：动植物油脂 苯并（a）芘的测定 反相高效液相色谱法 NY/T 1666-2008 ：肉制品中苯并芘的测定 高效液相色谱法 DIN EN 15549-2008 ：空气质量.环境空气中苯并芘浓度的测量用标准

7、方法 ,国标方法：层析柱净化法,氧化铝层析柱净化方法为手工操作方法。 原理：利用氧化铝的路易斯酸碱作用，极性相互作用和离子交换作用，保留极性化合物，从而实现净化。 目前市场化产品为氧化铝SPE固相萃取柱 优势：有效提高前处理效率，回收率稳定。,方法说明,植物油中苯并芘的测定,四、食品中增塑剂的检测,GB/T 21911-2008 食品中邻苯二甲酸酯的检测 GBT 222048-2008 玩具及儿童用品 聚氯乙烯塑料中邻苯二甲酸酯增塑剂的测定 SNT 1778-2006 PVC食品保鲜膜中DEHA等己二酸酯增塑剂的测定 气相色谱串联质谱法 SNT 2249-2009 塑料及其制品中邻苯二甲酸酯类

8、增塑剂的测定 气相色谱-质谱法 SNT 2250-2009 塑料原料及其制品中增塑剂的测定 气相色谱-质谱法 SNT 1779-2006 塑料血袋中邻苯二甲酸酯类增塑剂的测定 气相色谱串联质谱法 SN/T 2037-2007 与食品接触的塑料成型品中邻苯二甲酸酯类增塑剂迁移量的测定气相色谱质谱联用法 SN/T 2409-2009 玩具中磷酸酯类增塑剂的测定 ,食品中邻苯二甲酸酯的检测,目标物质：油脂含量较多样品 如食用油、奶制品、调味品 标准方法：GB/T 21911-2008 食品中邻苯二甲酸酯的检测 前处理方法：参照标准方法,国标解决方案,纯油脂样品：,国标解决方案,含油脂样品：,食品中增

9、塑剂检测前处理典型案例,方法说明,以上方法实际就是使用凝胶净化去除基体里面的油脂干扰。,五、有机分析前处理方法及设备,旋蒸,凝胶净化,浓缩,SPE,氮吹,(一)如何选择好性能的旋蒸,回收率、蒸发效率直接反应旋蒸的性能： 转速（旋转蒸发瓶转速的控制） 温度（加热锅温度的控制） 真空度（控制真空泵的抽气速率和真空度） 冷凝系统（要有足够冷凝面积，物料蒸汽温度与冷却水温差，建议20度以上。冷凝面积） 主机系统的密封性（玻璃件，密封圈） 能否长时间工作（电机、加热锅的性能）,Labtech旋蒸性能,转速（20-240rpm） 温度（室温180） 真空度（真空控制系统） 冷凝系统（1200cm2，水循环

10、冷凝系统） 主机系统的密封性（全聚四氟接触密封） 全自动升降、断电提升保护、加热锅防干烧保护、 防冷凝倒流装置,整体解决方案的优势,1、真空控制系统 真空度可调，有效地控制并提高回收率！ 有效保护真空泵 自动设定梯度程序完成蒸馏过程,整体解决方案的优势,2、冷凝系统 建议匹配方案：H50、SH150-900 冷凝效果直接影响着回收率！ 我们可以实现一台冷凝系统带多台旋蒸的经济方案，我们能实现从8-35，-5-35 多种不同的冷凝方案。,旋蒸配套循环水,(二) 浓缩产品的选择,浓缩的关键： 目标物没有损失 样品没有交叉污染 方便快速 可进行溶剂置换,定容的关键 准确 平行性好 不受外界因素影响,

11、Vortex-600 自动定量浓缩系统,操作方式,浓缩杯上盖打开 浓缩杯可以取出操作-加液 清洗 样品转移等 真空、加热、氮吹三位一体方式浓缩 红外传感器精确定容,特点介绍,该套系统可实现自动样品浓缩、定容功能。 真空、加热、氮吹三位一体浓缩方式，温和快速。 红外传感器精确定容，不受样品颜色影响。 独特设计的涡旋式氮气吹扫方式，解决了传统氮吹带来样品飞溅问题。 加热膜方式加热，加热效率高。超级模糊PID控温，精度更高，稳定时间更快。 真空度可调。,Vortex 600自动定量浓缩仪,特点1 ： 可单通道独立工作，也可多通道并联工作 每个通道可独立控制，无交叉污染 精确控制浓缩条件 可自动精确定

12、容 提高工作效率,特点2 ： 专为样品前处理设计 浓缩杯体积200mL 浓缩方式快速 针对沸点较高的溶剂提取液，能实现较快速浓缩。 可自动定容实验需要定量，定容平行性至关重要 也可实现蒸干功能实验很多情况会遇到溶剂置换问题,特点3 节省空间 干净环保 具有溶剂回收功能,相比同类型浓缩产品优势,各通道可独立工作 可以通过液位传感器实现精确定容 结合真空和氮吹优势 占地空间小,浓缩原理,液体蒸发速度的影响因素： 1、液体温度 2、表面积； 液体表面空气流动 3、降低液体沸点,加热,涡旋式氮吹 抽真空,激光传感器判断浓缩终点,1 高效准确的加热方式,加热膜加热 加热膜贴紧浓缩杯加热 热传导快 加热效

13、率高 超级模糊PID控温 更小的温度超调 更快的稳定时间 更好的控温精度,2 独特设计的涡旋式氮吹方式,Vortex- 双涡旋 氮气沿杯壁涡旋式吹扫，不直接吹到液面上。 优点：减少液体的飞溅，效率更高 飞溅：（1）回收率的损失 （2）清洗带来困难。,传统氮吹仪 X氮气直接吹拂样本表面，或与样品直接接触。 X 容易引起液体飞溅，造成目标物损失。 X 氮气吹扫效率很低。,3 激光液位传感器精确定容,采用激光传感器实现精确定容优点： 不受样品颜色影响 定容平行性好 定容体积标配1mL 简单操作即可实现蒸干，溶剂置换过程 可实现蒸干操作,浓缩整体解决方案,Vortex-800 全自动定量浓缩仪,Vor

14、tex-600 自动定量浓缩仪,LiqVap 全自动定量浓缩仪,可为您解决浓缩问题,1 真正实现无人照看 2 可实现自动定容和溶剂置换 3 可实现浓缩系统自动清洗,Vortex全自动系列,自动进样和自动收集 Vortex 800全自动定量浓缩仪最多可实现72位样品自动顺序处理 。 Vortex定量浓缩仪可实现单个样品自动处理。,程序控温的包围式加热 控温准确、加热温和 双涡旋氮吹快速高效 带溶剂回收的真空系统 安全环保 红外传感器精确定容准确可靠，平行性好。 可自动进行溶剂置换简化烦琐的实验步骤,喷雾式淋洗 效率高、省溶剂 整套系统可以实现管路自动清洗。 氮气系统可吹干管路残留溶剂。 针对较脏

15、样品，可实现免工具拆洗。,进样收集,浓缩定容,清洗,Vortex-800 全自动定量浓缩仪,特点：（单个样品浓缩实现六个自动） 自动进样、自动浓缩、自动溶剂置换、自动定容、自动收集、自动清洗。,适合客户：样品数量相对较少，但对浓缩要求较高。 解决客户问题：只需将进样针和收集针插入对应样品瓶和收集中，即可实现六个“自动”，无需人工实时看守。,Vortex-800全自动定量浓缩仪,特点：全自动浓缩定容 具有批处理功能（标配72位进样盘）。 真正实现长时间无人值守,适合客户：样品量较多，实验复杂，工作繁忙。 解决客户问题： 全自动实现样品定量浓缩功能，定容准确，批次平行性好。最终样品可直接收集到GC

16、/HPLC进样小瓶中，无需人工转移，方便快捷。 具有Vortex的六项自动功能。,(四) GPC凝胶净化系统,GPC Cleanup 800,GPC Cleanup 600,Auto Clean,凝胶色谱的原理,凝胶色谱：Gel Permeation Chromatography Size Exclusion Chromatography 是根据溶质分子大小进行分离的色谱技术。 柱填料凝胶具有不同尺寸的孔穴，凝胶孔径与分离组分分子大小相应，当大小不同的组分分子随流动相进入凝胶，他们进入微孔的程度不同，大分子不能进入孔穴，而分子越小进入微孔越深。因而保留时间不同。试样中各组分按分子大小进行洗脱。

17、,US EPA SW-846 方法3640A FDA杀虫剂分析方法 AOAC 分析方法 DFG S19,GPC净化适用法规及推荐方法,国 标,GBT 5009.19-2008 食品中有机氯农药多组分残留量的测定 GBT 5009.146-2008 植物性食品中有机氯和拟除虫菊酯类农药多种残留量的测定 GBT 5009.162-2008 动物性食品中有机氯农药和拟除虫菊酯农药多组分残留量的测 GBT 5009.207-2008 糙米中50种有机磷农药残留量的测定 GBT 5009.218-2008水果和蔬菜中多种农药残留量的测定 GBT 19650-2006 动物肌肉中478种农药及相关化学品残

18、留量的测定 气相色谱-质谱法 GB-T 2795-2008 冻兔肉中有机氯及拟除虫菊酯类农药残留的测定方法 气相色谱质谱法 GB/T 5009.215-2008食品中有机锡含量的测定 GB/T 23373-2009 食品中抗氧化剂丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)与特丁基对苯二酚(TBHQ)的测定 GB/T 21911-2008 食品中邻苯二甲酸酯的测定 GB/T 23818-2009 大豆中咪唑啉酮类除草剂残留量的测定,GB/T 20760-2006 牛肌肉、肝、肾中的-群勃龙、-群勃龙残留量的测定 液相色谱-紫外检测法和液相色谱-串联质谱法 GB/T 20772-2008 动物肌肉中461种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 GB/T5009.162-2003动物性食品中有机氯农药和拟除虫菊酯农药多组分残留量的测定 GB/T 5009.115-2003 稻谷中三环唑残留量的测定 GB/T 23376-2009茶叶中农药多残留测定 气相色谱/质谱法 GBT 23816-2009 大豆中三嗪类除草剂残留量的测定 GB/T 23818-2009 大豆中咪唑啉酮类除草剂残留量的测定 ,GPC净化最大的特点,满足