血液促凝剂质量控制及质量体系的建立.ppt

1、凝血促进剂质量控制方法和质量控制体系的建立、撰写和发表人：白西安第四军医大学唐都医院检验科，面前，凝血促进剂是生产真空采血管凝血促进管的核心原料，用量大，技术要求高。 制作的分离胶凝固促进管对技术性能的影响非常重要，其技术水平代表着企业真空采血管产品领域的真正技术水平。 国内采血管企业的技术竞争主要是促凝剂的良好竞争和不良竞争，使用良好的促凝剂，产品竞争力将显着提高。 血液凝固促进剂，在国内用普通的二氧化硅粉制作的情况多，凝固促进效率低，一般的凝固时间是15分钟左右，凝固后放置20分钟左右可以机械离心，离心时间也比较长，一般是需要8-10分钟，不过，即使这样也含有妨碍

2、吸引的纤维蛋白对修正量的掌握有严格的要求，浓度过高容易溶血。 现在，全国采血器制造商采用的凝固促进剂的处方非常混乱，但总结来看，生物型和无机种的2种或2种混合存在。 生物型的主要成分是凝血酶和兔脑粉。 凝血酶的缺点是所有酶的特点，保存差，受多种因素的影响容易失活。 特别是冬天，温度的影响很大，温度低活性下降，凝固时间也自然变长。 兔脑粉凝固速度虽然快，但仍受温度制约，凝血酶和兔脑粉的凝固原理是由于血浆先凝固后凝固血细胞，血块凝聚是通过纤维蛋白包裹血细胞来实现的。 因此血块收缩并不十分理想，离心后血球也以缓慢流动的形式存在。 没有机种的主要成分是高岭土、石英粉、硅藻土、硅石粉、玻璃粉等。 起作用

3、的主要成分二氧化硅的含量因产品而异，因此凝聚活性当然也有差异。 没有机种的缺点是凝固速度慢，还有纤维蛋白二次析出的弊病。 二氧化硅的作用是活化生物体内外凝固系统，启动瀑布式凝固反应。 血小板第，作用于因子。 但是，没有机型的缺点是凝固时间比机型长，按压纤维蛋白的功能弱。 完成这个过程需要一定的时间和温度，也不能在短时间内完成凝固的全过程。 各厂家的处方也各不相同，凝血效果好还是坏。 总之，包括海外著名品牌在内，还没有达到理想状态。 用以下技术指标综合评价凝固促进剂的优劣： 1、凝固时间短。 2 .放置时间和上机离心的时间。 3 .有无明显的纤维蛋白(即影响样品针吸样的程度)。 4 .管壁的清洁

4、。 5 .分离橡胶的清洁(分离橡胶内很少卷入血丝，分离橡胶离心后呈白色)。 6、血清的清晰度怎么样？ 7 .受温度影响的大小。 是否达到100%的一次离心成功率。 9、有无完善的质量管理体系，特别是采血验证的方法无需评价科学、客观、准确的凝固促进剂的优劣。 本品原理如下：处方主要成分之一凝集素(Lectin )是从各种植物、无脊椎动物和高等动物中提炼出来的糖蛋白或结合糖蛋白质，因为能够凝聚红血球(包括血型物质)，所以称为凝集素。 植物己糖是具有凝胶化特征的蛋白质，与血液中的抗原发生化学反应引起红血球的凝集。 本促凝剂是一种综合配方，PHA的提取工艺是关键工艺，传统的提取工艺比较复杂，主要用于制

5、药工业，因此没有适合促凝剂方面的专用提取工艺，用我自制的独特提取工艺保证了产品的稳定性和持续性，达到了采血管技术所需的技术指标。 耐高温实验：将喷有凝固促进剂的试管放置在552水浴箱内2小时，采血实验验证是否对凝固效果有影响。 用96孔国际标准凝血板和显微凝集法实验验证了其对凝血的影响。低温实验：预先将喷有凝固促进剂的试管和对照管放入冰箱中预冷30分钟。 然后混合采血，在24个冰箱中保管20分钟取出，3500转/分离心5分钟，验证凝固效果。 用显微镜凝聚法实验验证了其对血液凝固的影响。 纠正认识错误区，现在无论是医院还是采血管企业，对凝固促进剂的评价都追求凝固时间的快慢，凝固时间越快越好。 实

6、际上，这是认识上的误解，必须加以纠正。 理论上说：众所周知，血液凝固需要13种凝固因子相继激活，最后纤维蛋白原变成纤维蛋白原，使血球陷入圈套，实现血液凝固。 完成这个过程需要时间，加入凝固促进剂只是为了血液凝固提供血液凝固所必需的材料，不能加快凝固时间和速度。 如果加入凝血酶和兔脑粉，血液在短时间内凝固的幻想，实际上血浆凝固，血球凝固了，但是真正意义上的血液凝聚的发生，血球必须充分凝固。 完成这个过程需要6-10分钟，在这个过程中纤维蛋白被充分消耗。 在工厂，为了生产含有凝固促进剂的采血管，进行试管的前期硅化和干燥处理，喷射凝固促进剂之后进行干燥。 浪费时间、工时、电力。 为了解决上述问题，本

7、凝固促进剂成功实现了试管不需要事先进行硅化和干燥处理。 只需将本凝固促进剂喷射到试管内即可，无需干燥处理。 使用效果和干燥处理没有差别。 目前，凝固促进剂的凝固促进效果评价均以健康者为标准。 对健康者来说，因为没有血液凝固因子的缺乏，所以只是为了加快血液凝固时间而促进血液的早期凝固。 最重要的是，对于血凝因子不足的患者，为了加快血凝的时间，需要多补充不足的血凝因子。 因此，开发高效快速的凝固促进剂非常重要。 为了解决这个问题，我经过多年的科学研究，成功地解决了这个问题。 我研制的促凝剂原理如下：各厂家配方为五花八门，而提供的促凝时间残奥表均以正常人数据为依据。 但是，实际上在医院里血液系统的问

8、题和血栓疾病治疗、肝素化治疗、透析患者的治疗等患者很多。 在开发凝固促进剂时考虑到异常情况的采血不利因素没有得到充分的补偿，所以采血后也有的患者凝固状况不理想。 拖了很多人的后腿，延迟了上机操作的时间。 由于凝血过程是通过多种凝血因子参与的过程，因此开发凝血促进剂的处方必须综合考虑这些因子的补充。 处方中平衡各种因子的百分比，通过协调作用弥补部分患者的不足，加快凝血过程。 我开发的处方综合考虑了凝血不良的因素，在处方中重点考虑了异常情况采血的代价。 本品原理如下：处方主要成分之一凝集素(Lectin )是从各种植物、无脊椎动物和高等动物中提炼出来的糖蛋白或结合糖蛋白质，因为能够凝聚红血球(包括

9、血型物质)，所以称为凝集素。 常用的是植物凝集素(Phytoagglutin，PHA )，通常将其提取的植物命名为芸豆A(Conconvalina，ConA等，凝集素是它们的总称。 植物己糖是具有凝胶化特征的蛋白质，与血液中的抗原发生化学反应引起红血球的凝集。 在成分中，PHA发挥着非常重要的作用。 本凝固促进剂已经申报了发明专利。 保证了产品的稳定性和可持续性，达到了采血管技术所需的技术指标。 主要技术残奥表： 1、血液离体5-8分钟凝集，健康人15-20分钟离心。 离心时间5分钟，离心分离机的转速为3500转/分。 2 .无纤维蛋白：血清内肉眼未见明显纤维蛋白残留。 3，100 %离心成功

10、率。 4、温度为2-38，凝血效果相同。 5、保存：避开4以下光线保存。6、外观：混合后呈白色均匀悬浮液，静置后下层为白色，上层为淡黄色半透明。 七、气味：豆子有特殊气味。 8、放入真空管的量：3-5毫升采血量加20-30微升。 8-10毫升采血量25-30微升12-16毫升采血量35微升9，包装量：塑料试剂瓶包装，1000ml/瓶。 优点： 1、血清分辨率高。 血块收缩密集，相反血块变成果冻状形成整体。 2 .管壁清洁良好，管壁和橡胶栓上不附着血球等物质。 3 .与血清分离橡胶无反应，血清分离橡胶经离心分离后呈原色或只有少量微细血点，外观清洁。 4、采血后放置15分钟后离心分离。 5、对检查

11、结果没有干扰或影响。 6 .不需要干燥，不含乙醇酐和乙醚。 7、凝固促进剂不干燥，减少加工环节，节省时间和加工成本，使离心后试管外观干净。 8 .试管采用普通的PET试管，无需事先进行硅化处理，凝固促进剂内含有脱壁剂。 玻璃试管必须进行硅化处理。 使用前，将本产品反过来多次搅拌，直到底部看不到沉淀为止。 将本产品放入喷雾机的加液瓶中喷雾到未硅化或未硅化的试管内壁。 不需要干燥处理，拔下真空插头。 注意事项：喷洒凝固促进剂之前，工人要注意用生理盐水充分清洗机头和管道上残留的物质。 特别是喷雾抗凝固剂后，如果不清洗就会发生化学反应，导致凝固促进剂失效的可能性很高。 用去离子水洗涤，残留水过多会引起

12、渗透压变化引起溶血。 采血验证实验，1，试管制备：塑料PET试管不经硅化处理，直接在喷雾剂上喷射20-30微升左右的促凝剂。 不干燥，抽真空，插头。 2 .对照管和验证对象管各准备多根。 3 .准备消毒和采血所必需的东西。 4 .通常消毒后，用采血针刺入静脉将血液吸入试管内。 5 .取完第一个试管后修正时修正凝固时间，之后的试管按顺序按实际的结束时间修正。 6、采血5分钟后慢慢倾斜试管观察凝固状况，出现初凝固后立即补正凝固时间。 从7、5分钟后每隔2分钟观察一次血液凝固情况，完全凝固以跌倒或倾斜试管后血液完全不流动为标准。 8 .采血结束后放置20分钟后开始卷扬机离心，3500转/分离心5分钟

13、。 9、结果：离心后血清明了，无纤维蛋白、无壁、无溶血的血清判定为合格品。 10、统订：计算对照管和实验管的离心成功率和失败率，求百分率。 11、温度：室温15-35为测定温度。凝固促进剂的质量控制、凝固促进剂的凝固效果检验问题，目前各公司都采用采血试验的方法。 必须尽量避免这个方法。 由于各公司经常采用从员工那里动员献血的方法，员工对献血非常反感，而且由于个人差异的问题和各批次与保管时间的不一致，采血实验存在差异，不能真正判断优劣。 目前，全国真空采血器企业尚无公认的统一实验室检测技术方法。 本促凝剂解决了这一难题，采用96孔国际标准血凝板检查与显微镜检查相结合的方法，其他促凝剂与本促凝剂的

14、配方原理不同，不能用本方法检查或检查。凝血试验及实验操作与结果判断、材料与试剂、1. 96孔“u”形或“v”形微量反应板、定量移液管、滴喷头、微型振荡器。 2. 0.9%生理盐水。 3 .待测液体未稀释的凝固促进剂。 实验内容及操作方法，(1)血细胞凝集(HA )试验1.96孔微量反应板进行，从左至右各孔中加入生理盐水0，2 ml。 2 .在左侧第1孔中加入0、2ml凝固促进剂，均匀混合后，从0、2ml吸引第2孔，依次以倍比稀释为第11孔，吸引了0、2ml的第12孔与红细胞对照。3 .从右向左依次将0.2 mL人0型血红蛋白细胞悬浊液放入各孔中，在振子上振动，在室温下静置2小时后观察结果。 其

15、结果，静置2小时后对照孔红细胞沉淀，由此判明结果观察是可能的。 红血球全部凝集，沉入孔底，呈平坦网状，即100%凝集，不凝集者(-)红血球沉入孔底，呈红色点状。 使100%凝聚的最大稀释度位于该凝血效价如凝血效价为1:256 .第8孔。 2 %红细胞的制造方法是，首先用真空采血器(包括3.8%柠檬酸钠)采血直至需要血液量，使灭菌后的生理盐水为抗凝血的5倍，以2000r/min离心10分钟，丢弃上清液，加入生理盐水悬浮血细胞，用同样的方法离心沉淀，洗涤红细胞凝血试验(hemagglutinin test，HA )，原理凝血素PHA与人0型红细胞表面糖蛋白受体结合凝聚，检测凝血素的存在，滴定凝血效

16、价，估算凝血效果。 结果以发生50%凝集者( )为该凝血效价，观察其稀释度为凝血单位。 显微镜检查法，取1根空白PET塑料试管，加入0.9%生理盐水5毫升。 2 .在上述试管内加入凝固促进剂原液25微升，然后盖上试管塞子，反复混合5次。 取一片载玻片，用蜡笔在正中间画直线。 4 .用加液枪吸取稀释后的20微升，分别放入玻璃片的两侧。 将左侧端作为检测区域，将右侧端作为对照区域。 然后，在两端各加入20微升的2%人o型血生理盐水悬浊液。 5 .将玻璃板旋转搅拌1分钟，出现肉眼可见的凝聚。 6、10分钟后将载玻片置于常规显微镜下，低倍镜观察凝血情况。 7、结果合格-血球凝集集成小块块状，少量游离红血球。 完全不凝聚-血球