脱落细胞学检查技术及基本知识.ppt

1、2020/8/9/1，脱落细胞学，梁松河，哈尔滨医科大学大庆校区临床基础实验室部，2020/8/9/2，第1章，脱落细胞学检查技术及临床应用的评价，脱落细胞学：对人体各部位的脱落细胞，特别是腔管器官表面的脱落细胞，或通过细针吸取病变组织获得的细胞进行染色，并在显微镜下观察和诊断，也称为诊断细胞学。标本来源：自然渗出物体腔抽吸液，细针抽吸液，2020年8月9日3。第1节标本采集和涂片制备，1。标本采集原则：尽量减少受检者的痛苦，获得合作；该方法简单、实用、经济。尝试获取足够的细胞成分进行诊断；及时快速的检查和即时生产；绝对避免污染；标本编号有清晰的标记。方法：细针穿刺；脱落细胞学检查，2020年

2、8月至9月，常用方法：直视采集：用刮刀刮，用吸管吸，用自然分泌物刷；痰涂片、尿涂片、前列腺液涂片、乳头分泌物涂片灌洗；盆腔器官、骨盆或腹部摩擦；鼻咽、食道和胃的针吸；浆膜关节腔积液。浆膜腔积液的处理：提取后应立即送检(4份保存，标本在24小时内处理)。过多的成熟红细胞和标本严重凝固，需要治疗。红细胞可以通过淋巴细胞分离液或低渗法去除。凝结的渗出液将吸出凝块，剩余的液体将被离心涂抹。2020/8/9，6，2。涂片制作：(1)要求：1标本新鲜，2操作温和，细胞分布均匀；不要挤压和摩擦，以免细胞损伤和变形；3片载玻片应清洁，4片涂片应牢固，5片涂片编号和6个标签应准确，2020/8/9，7，(2)涂

3、片制备法，推涂法，吸管推涂法和喷射印刷法，2020/8/9，8，(3)涂片固定，目的是保持细胞形态和结构，防止其自溶。固定溶液：优选95%乙醇、乙醇乙醚和氯仿乙醇。注意：巴氏染色，涂片不应在空气中干燥后染色；固定时间不少于15分钟(巴氏染色在48小时内进行)；固定解应达到90以上；液体样本应在离心后涂抹，然后在湿式干燥后固定。刮刀片、痰涂片、网涂片、内镜刷涂片和宫颈针吸涂片应立即固定。2020/8/9/9，固定方法：湿固定和干固定时间：1530分钟(4)涂片染色目的：使细胞结构清晰显示；用各种染色剂使细胞质和细胞核适当地呈现不同的颜色。使单元格结构透明清晰。方法：常规染色为巴氏染色，结合苏木精

4、-伊红、姬姆萨和特殊染色。2020/8/9/10/1巴氏染色水合作用：固定涂片用乙醇蒸馏水染色，每次1分钟；苏木精染色35分钟；分色：1在盐酸中几秒钟；水洗发蓝：放入饱和碳酸锂溶液中1分钟。水洗脱水：50、70、80、95乙醇各1分钟；在橙色溶液中染色24分钟；在EA36染料溶液中用95%乙醇洗涤两次，每次45分钟；脱水：95，无水乙醇各12分钟；二甲苯透明23分钟；2封：中性胶封，2020年8月9日；结果表明，细胞核呈紫蓝色，核仁呈红色。适用于上皮细胞染色和阴道涂片观察女性激素的影响。优点：细胞是多色的。缺点：染色程序复杂，2020年8月9日。注意事项：染料溶液应充分溶解，苏木精应在染色前数

5、月准备好。应该每天过滤一次，并添加新的溶液。在低室温下不易染色，因此在分化前可在显微镜下观察，用50盐酸加热以确定分化时间。涂片在橙色溶液中不应过长。EA36染料溶液配制和使用前，应使用滤纸进行调试。在2020/8/9，13，2 HE染色中，透明度好，核浆对比鲜明，染色效果稳定，核呈紫蓝色，果肉呈浅玫瑰红。该程序简单，适用于痰涂片。3德国国会大厦姬姆萨染色：主要用于血液和骨髓的细胞学检查，2020年8月14日。与液基薄层细胞学相比，2020年8月15日，I. Wrights染色(Wrights)的特点是：固定和染色在一起，该方法操作简单，染色时间短，对白细胞特异性颗粒染色好。通常，它是氯化物盐

6、，即亚甲蓝氯化物，其有色部分是阳离子，无色部分是阴离子。亚甲蓝很容易被氧化成二级染料，如单-、二-和三甲基硫堇。一些市售的亚甲蓝已经被氧化成天蓝色。曙红(E-)通常是钠盐，曙红钠的有色部分是阴离子，无色部分是阳离子，有色部分是酸。当曙红和亚甲蓝混合时，产生疏液胶体曙红亚甲蓝中性沉淀(ME)，即瑞德染料(溶解在甲醇中，即瑞德染料溶液)。ME(弗氏染料)M E -，2020/8/9，16，2。甲醇的作用：甲醇用作弗氏染料的溶剂，称为弗氏染液。甲醇是莱特染料的良好溶剂，它有两个作用：(1)33，360甲醇的溶解使亚甲基蓝和曙红在溶液中解离，使细胞组分选择性吸附其中的有色物质而显色。在制备好的弗氏染料

7、溶液中，亚甲蓝可以被氧化并含有天青。亚甲蓝和曙红的化合物能把细胞核染成紫红色，但不能把细胞质染成蓝色。过量的亚甲蓝会将细胞质染成蓝色。染色主要是一种化学作用，是离子相互结合的反应。(2)固定，加热：甲醇具有很强的脱水能力，可以将细胞固定在一定的形状，增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料的吸收。同时，由于甲醇吸收了染液中的水分，染液被加热，加速了染色反应。2020/8/9，17，3。染色原理：细胞具有物理吸附和化学亲和力。各种细胞成分的化学性质不同，它们对各种染料的亲和力也不同。血红蛋白、嗜酸性颗粒是碱性蛋白质，它与酸性染料曙红结合并染成红色，称为嗜酸性物质；核蛋白和淋巴细胞胞质是酸性蛋白，与碱

8、性染料亚甲蓝或天蓝色结合并染成蓝色，称为嗜碱性物质；中性粒子处于等电状态，可与曙红和美蓝结合，并被染成浅紫红，称为中性物质。2020/8/9，18，4。细胞染色的影响因素：细胞的所有成分都是不同的蛋白质。因为蛋白质是两性电解质，电荷取决于溶液的酸碱度。在微酸性环境中，电荷增加，易与曙红结合，呈红色；在碱性环境中，负电荷增加，易与亚甲蓝或天青结合，染色呈蓝色。因此，细胞染色对氢离子浓度非常敏感，染色片必须干净，无酸碱污染。必须用优质甲醇配制瑞特溶液，必须用缓冲液稀释染料溶液，冲洗水应接近中性，否则可能导致各种细胞的异常染色反应，造成鉴定困难甚至错误。空气氧化：新制备的染料呈弱碱性，必须在室温或3

9、7下储存一段时间。当染料成熟时，只有在亚甲基蓝逐渐转化为天青b后才能使用，储存时间越长，染色效果越好。在储存挥发性：瑞德染液的过程中，必须将其紧密堵塞，以防止甲醇挥发和氧化成甲酸。有人主张在配方中加入30毫升甘油，以防止甲醇挥发，使细胞染色清晰。甲醇必须是纯的(氩级)。例如，甲醇中的丙酮含量太高，并且染色是酸性的，这使得白细胞着色不良。，2020/8/9/19/5。弗氏染料溶液的制备：(1)弗氏染料溶液：830毫克弗氏染料或500毫升1克甲醇或15毫升600毫升甘油。首先，将干燥的弗氏染料(在培养箱中干燥一夜)放入研钵中，用牛奶棒轻轻将染料打碎成粉末，并研磨至听不见为止。加入少量甲醇溶解并研磨

10、，使染料在牛奶罐中呈现“一面镜子”的光泽，而不会有染料粉末沉淀。加入更多的甲醇进行研磨，使其像镜子一样发亮，静置一段时间，将上层液体倒入干净的储存瓶中(最好是一个装满甲醇的空瓶)，然后加入甲醇进行研磨，重复几次，直到研钵中的染料和甲醇用完，摇匀，用甘油封住瓶口，并在室温下避光保存一段时间。2020年8月9日，(2)瑞特染料溶液缓冲液：1)缓冲功能：染色对氢离子浓度非常敏感。观察到酸碱度的变化会使蛋白质和染料形成的化合物再次解离。缓冲液必须保持一定的酸碱度以稳定染色，酸碱度一般为6.46.8。碱性染料可以中和缓冲液中的酸性基团，而酸性染料可以中和缓冲液中的碱以保持酸碱度恒定。2)缓冲液制备(pH

11、6.46.8，弱酸性):配方1:配方2: KH _ 2 PO _ 4 0.3克Na2 HPO _ 4 0.2克(1%磷酸二氢钾30毫升加1%磷酸氢二钠20毫升)将H2O(新鲜)加入到1000毫升中，并在室温下置于黑暗的地方。瓶口是密封的，以防止霉菌污染。如果有污染，应该丢弃，2020/8/9/21/6。染色： a。取干血涂片，用蜡笔在血膜的两端画线。将血液涂片平放(放在染色架上)，用滴管将3-5滴染料溶液滴在片上，用滴管或吸球分散染料溶液，使其覆盖全血膜，放置约30秒钟。c、加入等量的缓冲溶液，用吸球轻轻吹，将染料溶液和缓冲溶液充分混合，静置染色约5-10分钟。然后用少量的自来水冲洗纸张末端的

12、染料溶液。不要先倾倒染料溶液，然后用水冲洗。切片在自然干燥后可以用显微镜检查。2020/8/9/22，第2节显微镜检查，1。读片要求：检查检验单和涂片的数量；了解病史、临床情况和检查目的；涂片应密封；首先，用低倍镜一张一张地仔细阅读胶片，每个视场部分重叠以避免遗漏；要找到具有诊断意义或值得讨论的细胞，标记它们。观察项目：涂片中的细胞成分；细胞的排列；一组细胞的邻接；单细胞的特征；芯与浆的比率；细胞退化；涂片背景中的细胞和非细胞成分。2020/8/9/23，诊断报告，分级诊断和描述性诊断。改良巴氏五级分类：分级：见异常细胞：有异型性但无恶性肿瘤的细胞：疑似恶性肿瘤但证据不足：高度提示恶性肿瘤：明

13、确恶性肿瘤，2020/8/9/24，细胞学诊断质量管理体系，标本采集和制备过程中定期随访，诊断理论研究和复习咨询，2020/8/9/25，脱落细胞学检查第三节优点：安全、简便、快速、准确，检查范围广。(1)癌症预防概况；(2)肿瘤治疗后随访观察；(4)癌前病变的随访观察；(5)监测指标作为一定的处理方法；(5)评估卵巢功能和指导内分泌治疗，2020年8月9日，26，细胞诊断学的应用价值；(1)初步筛选实现早期诊断(3)具有广泛应用的基础(4)当难以获得组织学诊断材料时，细胞学诊断可以弥补形态学诊断的空白。2020/8/9/27，细胞学诊断的局限性和片面性是由以下原因造成的：(1)取材不良；(2

14、)制剂质量差；(3)病理情况：肿瘤大小、肿瘤性质、肿瘤分化程度、肿瘤组织类型、肿瘤的早晚、肿瘤与周围组织的关系等。，2020年8月，2020年9月28日。缺点：1 .有一定的误诊率：细针穿刺假阴性10例，痰涂片假阴性2例，痰涂片假阴性2例。具体位置很难确定。很难对肿瘤进行分类。非肿瘤疾病的诊断研究；细胞学诊断的准确性低于组织病理学诊断，因此细胞学诊断依赖于组织病理学诊断的确认。2020/8/9/29，辅助检查，组织化学免疫组织化学，流式细胞术，DNA分析，染色体倍性分析，电子显微镜，2020/8/9/30，第2章，脱落细胞检查的基本知识，第1节，细胞诊断的基本概念，活性细胞增殖，细胞体积增加，

15、细胞核明显增大，核染色质增多，颗粒变粗，核仁增多。第二，在组织损伤或修复过程中从新上皮脱落的细胞的特征：细胞像合胞体细胞一样以碎片形式出现，并且排列规则；细胞略有增大，细胞核也增大，细胞核不深染，细胞质仍丰富且深染；核仁明显增大或增多；可能有有丝分裂图像。2020/8/9/31，组织修复细胞，2020/8/9/32，3。未成熟鳞状化生细胞的特征：细胞大小类似于正常上皮外底层；它成组出现，可以以砌砖的方式排列；细胞呈圆形或椭圆形，边缘有小突起。细胞质中通常有小液泡，使细胞质透明。成熟鳞状化生细胞的特征：细胞大小与正常鳞状上皮中层细胞相似；有许多组，细胞是多边形的，有锐角突起和各种形状；小液泡在细

16、胞质中很常见。细胞质少，排列紧密，无细胞间桥。2020/8/9，33，鳞状化生，2020/8/9，34，2020/8/9，35，2020/8/9，36。第四，储备细胞的增殖是柱状上皮细胞下一层具有分化潜能的未成熟细胞(或未分化细胞)。形态特征：细胞小，类似于鳞状上皮内底细胞的大小；圆形或椭圆形，细胞质中有小突起；胞浆内可见小液泡，淡染；核偏离可能在大小上稍有不一致；细胞核染色质均匀而薄，可见核仁和几个大小相同的核仁，细胞常聚集在一起，有时相互连接；它经常伴随着化生细胞。2020/8/9/37，聚集的增生基底细胞，支气管粘膜，2020/8/9/38，5。细胞增殖，细胞分裂增强，数量增加，体积增大

17、，形状异常。细胞大，细胞核大，核染色质增多增厚，双核或多核，核仁明显，核膜增厚甚至稍有不规则。可分为轻度增生和重度增生。6.细胞从未成熟细胞分化为具有完整结构和功能的成熟细胞的过程。上皮细胞分化的形态学表现：1 .细胞体积从小到大；2.细胞质数量从小到大；3.核质从大到小的比率；5.染色质排列从松散到紧密；6.核仁由大到小，由大到小，2020/8/9，39，柱状上皮增生混有杯状细胞；2020/8/9，40，7。核分裂的病理有丝分裂图像应与核分裂1相关。人为退化的原因：标本放置时间过长，细胞自溶；将细胞置于高渗或低渗溶液中；固定液浓度或时间不当，过湿或过干等形态学特征：细胞大，结构不清，所有细胞均增大或缩小，细胞质多为红色，各类细胞的变性形式一致。2020/8/9，41，有丝分裂像，2020/8/9，42，2。自然细胞变