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1、猪瘟病毒,Lecture 18,概述,猪瘟（Classical swine fever，CSF或Hog cholera， HC) 俗称“烂肠瘟”，美国称猪霍乱，英国称猪热病，欧洲一些地区的人称其为古典猪瘟，这是为了与非洲猪瘟区别。它是一种急性、热性和高度接触传染的病毒性传染病。其特征是发病急，高热稽留和细小血管壁变性，引起全身泛发性小点出血，脾梗死。,猪瘟病毒的分类地位及特性,猪瘟病毒（CSFV或HCV）是黄病毒科（Flaviviridae)瘟病毒属(pestivirus)的一个成员。病毒粒子直径40-50nm，有囊膜。基因组为单股RNA，约12.3-12.5kb。 CSFV与牛病毒性腹泻（B

2、VDV）和羊边界病病毒（BDV）同源性为30%(aa)，在血清学上有交叉反应性。,CSFV的基因组结构,猪瘟病毒的基因组为单股线状正股RNA，具有感染性。5端为非甲基化帽结构， 3 端无多聚腺苷酸尾，大小约为12.3-12.5kb。 整个基因组按编码与否大致分为三部分，两头分别为5 端非编码区（ 5 -no coding region) 和3 端非编码区 （3 -no coding region)。 5 -NCR区长360-374个碱基，3 -NCR区长243-272个碱基。已知序列的不同毒株在这两个区域的碱基长度有差异。这两部分序列参与启动、调控病毒蛋白质的转录、翻译及病毒的复制过程。,CS

3、FV的基因组结构（续一）,基因组中部为编码区，已知序列的各毒株在编码区的碱基数目相同，均为11697个碱基，由一个连续的大开放阅读框构成，理论上可编码一个由3898个氨基酸残基组成的多聚蛋白。 这个多聚蛋白在病毒感染的宿主细胞内可裂解为十二种病毒特异性蛋白质，其中C、E0（Erns） 、 E1 、 E2四种为病毒结构蛋白，P7、Npro、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B八种为非结构蛋白。,CSFV的基因组结构（续二）,基因产物沿ORF的顺序为NH2-(Npro-C-Erns- E1-E2-P7- NS2- NS3 -NS4A-NS4B-NS5A-NS5B)-COOH，其中

4、Erns、E2（特别是E2）最具有免疫防制研究价值。 其中C为核衣壳蛋白, E0（Erns） 、 E1 、 E2为结构糖蛋白。 其余为非结构蛋白。,CSFV的基因组结构（续三）,CSFV的基因组结构（续三）,E0（或Erns）的N末端为Glu-268，它由227个aa组成，其甲基化程度很高，分子量约为44-48KD，可诱导中和谱很窄的中和抗体。E0不仅是一种结构蛋白，而且是一种功能性蛋白。它与CSFV对宿主细胞的嗜性以及致病力有密切关系。,E0在CSFV感染过程中的作用,E2在CSFV感染过程中的作用,E2的N端为Arg-690，分子量为53-55KD。E2参与病毒对细胞的感染过程，携带有能刺

5、激机体产生保护性免疫的抗原决定簇。E2基因编码的gp55蛋白是猪瘟的主要保护性抗原。从N端693和737位Cys形成二硫键并组成一个序列特异性（易变）抗原结构域，且有中和性的B、C抗原区位于该结构域中。,E2在CSFV感染过程中的作用（续）,另一个结构域属序列保守性（不易变），由792和856位Cys形成的二硫键组成，包含中和抗原区A和非中和抗原区D，而A和D区由其间的一个疏水区和818位、828位Cys形成的二硫键分开。在A、B、C三个中和区域中，各有一段与中和性密切相关的高频突变序列或位点，这些序列或位点的突变株将逃脱中和性单抗的中和作用，免疫血清对这类突变株的中和作用也会降低。,CSFV

6、的全长感染性cDNA的研究进展,Moormann等（1996）以猪瘟疫苗株C株正链RNA的全长cDNA为模板，转录出了感染性RNA。 用E2单抗即可将两者区分。另外，可以推测， pPRKflc-133可作为生产中标记猪瘟疫苗毒株的极好工具，并进一步用于CSFV复制、毒力和宿主嗜性等方面的研究。,Meyers(1996)等在测定了CSFV 5和3端序列后，构建了CSFV全长cDNA克隆。将由cDNA体外转录得到的RNA转染猪肾细胞后，复活了感染性的CSFV。,CSFV的全长感染性cDNA的研究进展（续一）,CSFV的全长感染性cDNA的研究进展（续三）,Moser（2000）等将编码细胞氯霉素乙

7、酰转移酶（ACT）基因插入到CSFV Alfort/187株全长cDNA克隆pA187-1的Npro基因中，并获得转染成功，转染细胞中的CAT保留了CAT的酶活性。所以，标记病毒vA187-CAT是病毒复制的定量分析和基因表达，也是标记疫苗种毒和开发诊断试剂盒的有效工具。,CSFV的分群,CSFV不同毒株间存在显著抗原差异，可根据对单抗的反应、测序比对结果对CSFV进行分群。 1999年，Sadoda就通过对40余株猪瘟流行毒的序列分析，将猪瘟病毒病毒分为3个群： CSFV-1，称为古典猪瘟，以Brescia株为代表。 CSFV-2，以Alfort株为代表。 CSFV-3，与上述二个群均有较大

8、的差异，包括了一些日本、泰国和我国台湾的70-90年代流行株。,CSFV的分群（续一）,我国猪瘟病毒可分为两个基因群（Group1与Group2），Group1可分为Subgroup1.1和Subgroup1.2， Group2分为Subgroup2.1、 Subgroup2.2和 Subgroup2.3； 我国的兔化弱毒株与石门强毒株均于分离年代较早的传统毒株构成的Subgroup1.1；在所分析的108株流行株中，90%以上的CSFV流行株与传统的石门强毒株及我国广泛应用的猪瘟兔化弱毒疫苗株，在抗原基因上均存在较大的变异现象；在地理分布上，我国长江以北地区的CSFV流行株主要集中在Subg

9、roup2.1和 Subgroup2.2中，其中以后者为主，我国长江以南地区的CSFV流行株分布复杂，但主要集中在Subgroup2.1和 Subgroup2.3中。,CFSV的流行病学特点,传染源：猪是本病惟一的自然宿主，病猪和带毒猪是最主要的传染源。 传播途径：易感猪与病猪的直接接触是病毒传播的主要方式。感染猪在发病前即可从口、鼻及泪腺分泌物、尿和粪中排毒，并延续整个病程。康复住在出现特异性抗体后停止排毒。 近年来猪瘟流行发生了变化，出现非典型猪瘟、温和型猪瘟，以散发性流行。,CSFV的发病机理,猪瘟病毒进入靶器官扁桃体后,在其中增殖,16-18h血液中病毒浓度达到致病程度,15-24h病

10、毒出现于淋巴系统和血管壁,48h出现于各实质器官。病毒主要在小血管内皮细胞增殖，致使上皮细胞肿胀、变性、血管闭锁、小血管周围发生细胞浸润，导致各器官和组织充血、出血、坏死和梗死，并引起败血症，体温升高。在最急性病例，往往发生循环障碍。,在急性感染猪中，由于csfv迫害造血系统和网状内皮，引起血液中白细胞减少、网状细胞逐渐消失，免疫应答发生改变，对溶菌酶的继发性抗体应答能力减弱，这样机体内细胞吞噬能力显著下降，容易引发多种病原继发混合感染，使猪瘟病程复杂化。,猪瘟病毒持续性感染多由低毒力毒株感染引起慢性型和迟发型两种。前者猪瘟传播较慢、血液和器官中病毒滴度较低，病毒存在于扁桃体、唾液腺、回肠和肾

11、的上皮细胞。循环病毒抗原和抗体可导致应答物在肾沉着，引起肾小球肾炎。后者在病猪一生都有高滴度的病毒血症，病毒在上皮血症，病毒在上皮组织、淋巴样组织及网状内皮组织中广泛存在。先天性持续感染猪对CSFV不产生中和抗体应答，这表明形成免疫耐受。,临床症状及病变,临床症状及病变（续）,CSF诊断方法,典型的急性猪瘟暴发，根据流行病学、临床症状和病理变化可作出相当准确的诊断。 与急性猪瘟 不同，亚急性、慢性或迟发性猪瘟，因临床症状和病变存在很大差异，所以要依靠检查病毒抗原、病毒分离和检查特异性抗体等实验室方法。,CSF诊断方法（续）,猪瘟疫苗的研究进展,活载体疫苗：猪瘟病毒活载体疫苗所表达的保护性抗原基因为E2基因或E0基因；所用的载体有痘苗病毒、伪狂犬病毒、腺病毒、杆状病毒等。 标记疫苗：以E0为抗原来检测用其标记过的E2亚单位疫苗。常被用来评价亚单位疫苗的有效性及稳定性。 DNA疫苗，一般也是以E2基因作为目的基因构建表达载体。,我国猪瘟防制中存在的问题,猪瘟弱毒疫苗的三大品系疫苗(中国的C-