药品微生物检验特点及过程控制

1、药品微生物检验特点和工艺控制，中国药品生物制品检验所马仕洪2010年5月26日上海，website : e-mail : tel 3360010-67095509，地址：北京市天坛西里2号邮政编码： 100050，中国药品生物药品要素环境影响培养观方法验证、过程控制、中国药品生物制品检验站、3、无菌/微生物限度检验理念、中国药品生物制品检验站、4、微生物检验过程控制、1、实验设施(。 中国药品生物制品检定所，5，一，实验设施，实验室系统操作环境关键设备对照培养基，物质保障障，中国药品生物制品检定所，6，(一)，实验室系统，清洁实验条件有效性：整体10000级，局部100级。 安全性：保护样品、

2、人员、环境。 操作性：方便、迅速、顺畅。 保持清洁的实验条件，验证阳性菌实验室为P2生物安全标准，中国药品生物制品检定所，7，实验室改造实例：原布局图制作布局图1布局图2实验室系统中检定所微生物实验室，中国药品生物制品检定所，8，(1)，实验室系统实验室系统的管理与维护阻隔系统的有效性压差、风速、微粒、照度(外包服务合同) 2、清洁、静态与动态监测、熏蒸3、环境菌库酒精棉球分离微生物新凝胶分离微生物、中国药品生物制品检查站、9、环境菌库清洁环境中常见的菌(浮游菌) :头状葡萄球菌(Staphylococcuscapitis )溶血葡萄球菌(Staphylococcushaemolyticus

3、)慢性链球菌(Streptococcusmitis )科luteus )，中国药品生物制品检验所，10，(二)，操作环境，1，1 洁净工作台，中国药品生物制品检验所，11，(二)，操作环境(三)，关键设备，微生物检验薄膜过滤器一次性薄膜过滤培养器应急检验用一次性薄膜过滤培养器，中国药品生物制品检验所，14，(四)，对照培养基，培养基的适用性(灵敏度)培养基的性能稳定性(标准化)。 培养基、理化评价(可控性)、生物学评价(有效性)、回收率比较、MPN比较、生长曲线比较、生态评价、某CRS原则、固体培养基、液体培养基、琼脂加减任务实验方案实验准备样品对照实验操作过程监视培养观察、有效结果、物质保证

4、、中国药品生物制品检定所、17、 实验室管理规范(软件)、中检所抗生素室微生物实验室质量管理体系制作说明和批准页1实验室概况1.1实验室概况1.2实验室通信资料1.3实验室批准项目/残奥表1.4实验室平面图和功能区域1.5仪器设备概要1.6常备试剂消耗品一览表1.7实验室发展目标2管理规范2.1安全管理2.2业务流程2.3人员管理(6个SOP) 2.4样本管理(3个SOP) 3标准操作规程3.1检查作业SOP(13个) 3.2仪器操作SOP (30个) 3.3实验记录SOP(9个) 4实验室保障4.1实验室设施、设备及消耗品供应商确定原则4.2实验室设施供应商4.3实验设备供应商4.4实验室消

5、耗品供应商、中国药品生物产品检定所、18、(1)、实验准备、实验准备必须坚持“平战结合”特别要注意常备有效期所要求的：培养基、冲洗液、过滤器、小型实验器材等。中国药品生物制品检验所、19、实验准备无菌室专用酒精棉球制造实验准备场所清洗实验准备场所清洗实验准备场所清洗、中国药品生物制品检验所、20、(二)、样品对照、及早取样，以确保样品在传递过程中的完整性、安全性、有效性，充分了解样品和样品资料关注媒体公布样品(问题样品)，同时尽量取得与非问题样品同种样品，进行比较实验、比较分析的样品外观检验、完整性检验。中国药品生物制品检验所，21、样品外观检验欣弗样品外观检验刺五加样品外观检验双黄连样品完整

6、性真空检漏，中国药品生物制品检验所，22，(3)，不断完善实验操作、标准化操作规程(SOP )，严格避免实验室污染。药品食品生产过程中可能污染微生物的主要环节，药品食品微生物检验过程中可能污染微生物的主要环节，中国药品生物制品检查站，23、实验操作材料的入场、消毒液擦拭物品的外表面、清洁的传递(风淋、紫外照射)、双重无菌包装、核心区、周边、实验操作中国药品生物制品检查站， 24、(四)、实验过程监测、样品监测、手指监测、沉降菌监测、无菌检查框架模式图、中国药品生物制品检定所、25、3、结果判断、长菌有无分离鉴定的跟踪调查结果报告、可靠的结论是什么微生物？ 微生物是从哪里来的？ 想想： FTIR

7、法是药品检测菌和药品微生物检验洁净室环境菌的相似性试验药学学报，2007，42 (11 ):11891194无菌检查阳性结果有效性的实验研究药物分析杂志，2008，28 (05 ):6671，中国药品生物制品沾满污泥经验2、实验3严格程序控制，避免干扰中国药品生物制品检验所，28、微生物、(1)液体培养基浊水物理变化？ 化学变化？ 生物学上的变化？ (2)、平板上菌落琼脂表面、琼脂中、琼脂和碟子夹层菌落or药渣经中国药品生物制品检验所、29、菌落or药渣、60Co射线大量照射复验延长培养时间进行7天再刻划培养镜检验，中国药品生物制品检验所、30，2，分离鉴定，(1) 立即将2ml的培养物转移到

8、同一培养基继续培养(2)取5根冷冻保存管，每1管分注1ml混浊的培养物，保存- 80 (3)取混浊的培养物，在TSA平板/血琼脂上划线，分离污染微生物(4)硫代乙醇酸盐流体培养管混浊从平板上分离的菌落必须进一步鉴定，逐个保存。中国药品生物制品检验所，31，哪些微生物宏观：生长形态微观：镜检鉴定：生化鉴定(API，BD )核酸鉴定(16sRNA，DNA )，中国药品生物制品检验所，32，3，可追溯性调查， 样品阳性培养物分离菌株检测过程监测菌株环境菌(最近相似性分析脉冲场电泳(PFGE )、傅里叶红外(FTIR )、中国药品生物制品检测所，34，Sample Preparation，automa

9、tedmeasurementafterdryingofth 2. Suspending，1. Harvesting，3. Loading，FT-IR Spektrum of microorganisms，图不同来源的阴沟肠杆菌红外图像聚类关系，中国药品生物制品检验所。 ft-irspectrumisafingerprintofthecells、Biochemical Structure of Cells、中国药品生物产品检验所、36、中国药品生物产品检验所、37、可追溯性分析例1欣弗事件。 中国药品生物制品鉴定所，38，中国药品生物制品鉴定所，39，可追溯性分析例1欣弗事件头状葡萄球菌头状亚种

10、(staphylococcuscapitissspcapitis )溶血葡萄球菌(Staphylococcushaemolyticus ) 慢性链球菌(Streptococcusmitis )棒状杆菌亚种黄微球菌(Micrococcusluteus )溶血葡萄球菌(Staphylococcushaemolyticus )。 监测环境菌株、中国药品生物制品检验所、40、可追溯性分析例2、双黄连注射液、利巴韦林注射液、FTIR相似性分析、 DuPont RiboPrinter基因指纹分析需要深入认识微生物自身的微生物变异和保守的相对性的分析方法的偏差和微生物本身的偏差生物学的先驱者林玛格丽丝(Ly

11、nn Margulis )说：“如果在大肠菌中嵌入特殊的质粒，大肠菌就会突然变成克雷伯菌” 中国药品生物制品检验所，42，何时考虑？(2)，最佳技术是什么？微生物分析技术和手段形态学分析和相似性分析(生化反应谱、片段相似性、FTIR谱相似性等)需要深入认识，方法在权衡本身边界和微生物变异性边界的基础上，确定亲缘关系中国药品生物制品检验所，43，4，何时考虑？(2)，什么是最佳技术？16sRNA cDNA序列，需要研究，保守过于不利于区别的变异率过高(高到普通的传代，培养难以控制)没有意义。 但是，一般16sRNA cDNA序列水平有确定的意义，很难确定足够的长度。 可追溯性分析不仅仅是鉴定种子，而且是去植株，对菌株的稳定性认识还是相关技术的粗放性问题。 中国药品生物制品检查站，44，4，几点思考，(3)，怎么得出结论？ 分析的根本目