![双脱氧法测DNA序列.ppt_第1页](http://file1.renrendoc.com/fileroot2/2020-1/10/485f7a32-dc26-4ba3-b15c-23aa4b09564f/485f7a32-dc26-4ba3-b15c-23aa4b09564f1.gif)
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文档简介
1、双脱氧法测定DNA序列,NTP, dNTPs and ddNTPs,ddNTPs,2,5,13,16,9,10,15,19,1,4,7,8,12,14,20,3,6,11,17,18,ddA,ddC,ddG,ddT,Separate and display these DNA fragments.,2,5,13,16,9,10,15,19,1,4,7,8,12,14,20,3,6,11,17,18,ddA,ddC,ddG,ddT,Labelled,Radioactive isotope labelled,PRIMER/TEMPLATE MIX DISTRIBUTED TO FOUR TUBES
2、 4 dNTPs PLUS DNA POLYMERASE A RADIOACTIVE dNTP ONE OF FOUR TUBES ADD ddA A SECOND ADD ddC THIRD ddG FOURTH ddT,To Perform Sequencing,THUS: TUBE 1. PRIMER+TEMPLATE+4dNTPs + ddATP TUBE 2. PRIMER+TEMPLATE+4dNTPs + ddCTP TUBE 3. PRIMER+TEMPLATE+4dNTPs + ddGTP TUBE 4. PRIMER+TEMPLATE+4dNTPs + ddTTP ALL
3、TUBES CONTAIN DNA POLYMERASE,SCHEMATIC OF A TRADITIONAL SEQUENCING GELAUTORADIOGRAM,SEQUENCE IS READ FROM BOTTOM TO GIVE 5 ACGCTAGGGCTCAA 3,The radioactive isotope-labelled di-deoxy nucleotides are replaced with 4 fluorescent derivatives, each base specificity being labelled a different colour; Therefore all four reactions combined; The DNA fragments are visualised by an automated spectroscope as they pass an observation The DNA fragments are identified by their fluorescent signals; The information is stored directly on a computer,Automated DNA sequencing,COMBINED REACTIONS
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