肝靶向丹参酮ⅡA纳米注射剂的制备及其治疗肝癌的研究.ppt

1、1.肝靶向丹参酮A纳米粒的制备及其对肝癌的治疗，上海中医药大学附属普陀医院普陀区中心医院，李奇，2。报告内容、研究背景和研究结论。项目来源：国家自然科学基金资助的上海中医药研究基金，项目基本情况，4。肝癌发病隐匿，进展迅速，生活质量差，生存期短。中医药在治疗肝癌、提高生活质量和延长生存期方面的优势。2007，54 (73) :163-6.2王辉，金刚，严晓艳，原发性肝癌介入治疗的临床研究。应用肿瘤学杂志2006，20(3)193-195，研究背景，5，丹参酮A是丹参的有效成分，近年来发现其具有较强的抗肝癌作用。然而，它不溶于水，难以通过静脉注射给药。口服半衰期为3.63小时，生物利用度低。它限

2、制了其在肿瘤治疗中的应用。6。丹参酮纳米冻干粉针剂的制备及静脉给药：纳米药物局部分布，药物释放缓慢，作用时间延长，局部药物浓度增加，抗癌效果提高。可解决长期口服或静脉注射中药及有效成分难以达到局部有效抗癌浓度的问题。1.丹参酮IIA纳米粒冻干粉针剂制备工艺的建立。丹参酮IIA纳米粒的药代动力学和靶向性研究。丹参酮IIA纳米粒的体外抗肿瘤实验。丹参酮IIA纳米粒对小鼠肝癌的治疗作用。丹参酮IIA纳米粒对肝癌细胞增殖和凋亡相关基因表达的影响。丹参酮IIA纳米粒诱导肝癌细胞凋亡的信号转导，研究内容，药学研究，药代动力学研究，药效学研究，药理学研究，药学研究，9。第一部分，丹参酮IIA纳米粒子冻干粉针

3、剂制备工艺的建立，10，A:乳液溶剂蒸发法，B3360界面沉淀法，C:二元溶剂分散法，D3360乳液扩散法，E3360界面聚合法，11。制备工艺：丹参酮A纳米冻干粉针剂、注射用聚乙烯醇水溶液、室温磁力搅拌挥发有机溶剂、丹参酮A纳米混悬剂、通过0.8m微孔膜、超声探头冰浴5min、二氯甲烷丙酮(91)、丹参酮A、聚乳酸、丹参酮A纳米胶体溶液、加入甘露醇，-40预冻24h、冻干24h、12、中心复合设计-响应面优化技术统计软件包进行多元回归和非线性估计。 三因素五水平星点设计，药物剂量，13，三因素五水平星点设计：因素水平排列表，14，三因素五水平评价表，15，丹参酮IIA纳米粒形态，丹参酮IIA

4、纳米粒圆整均匀分散，16，平均电位-26.67毫伏，17，X-。 TanIIA、PLA和TNP证实丹参酮A纳米粒不是PLA和丹参酮A的简单物理混合物，而是形成了一个新的相。，18，稳定性试验，19，无突释效应，8天释药91.37%，丹参酮A纳米药物释药曲线，药动学研究，21，第二部分，体内药动学研究，给药后各器官药物浓度分布(靶向研究)，丹参酮A纳米药物的药动学研究，22，(注：两种制剂的药动学参数经t检验，丹参酮A纳米颗粒的药动学参数表符合三室模型。23.丹参酮A纳米粒静脉给药后的血浆药物浓度图显示，丹参酮A纳米粒的血浆药物浓度降低，在体内的滞留时间延长。24.丹参酮IIA纳米粒静脉给药后在

5、家兔体内的药物分布(靶向研究)。与丹参酮A相比，丹参酮A纳米粒静脉给药后在肝脏和肝癌中的药物浓度显著增加。药物在血浆、心、肾、脾、肺等组织中的分布明显减少。药效学研究，26。丹参酮A纳米粒的药效学研究、体外抗肿瘤实验。丹参酮A纳米粒对小鼠肝癌27的治疗作用。第三部分。丹参酮A纳米粒体外抗肝癌实验，28。细胞培养：用MTT法测定人肝癌Smc-7721细胞在常规培养中的生长抑制率。为了研究纳米粒释放的药物的抗癌活性，研究方法：29，丹参酮A纳米粒对人肝癌细胞生长的抑制作用，72小时IC50:6.8ug微克/毫升，30，丹参酮A纳米粒对小鼠肝癌的治疗作用，第四部分，31，1。小鼠肝癌模型的建立，造模

6、后7天，32，2。丹参酮A纳米粒对小鼠肝癌生长的抑制作用，32，2。P 0.05 vs TSA组；* P 0.01对其他组，34，4。治疗后，比较各组肿瘤坏死程度，aP 0.05与TanA组；血压0.05 vs NS组，35，生理盐水组(200)，空白纳米组(200)，丹参酮a纳米低剂量组(200)，丹参酮a纳米中剂量组(200)，丹参酮a纳米高剂量组(200)，药理学研究，37，丹参酮IIA纳米粒对肝癌细胞增殖和凋亡相关基因表达的影响；38.第五部分：丹参酮IIA纳米粒对肝癌细胞增殖和凋亡相关蛋白表达的影响；39.1.对小鼠肝癌细胞凋亡的影响：采用原位末端标记技术检测小鼠原位肝癌治疗后第7天

7、的凋亡指数；40.治疗后各组细胞凋亡指数，* p005对p005对TSA组；* * p001对其他组，41，42，* p005对B-NP组；*治疗后肝癌组织中p38丝裂原活化蛋白激酶信号蛋白表达为0.01，治疗后肝癌组织中TGF-1蛋白表达为43，对照组为0.05。* P 0.01与其他组相比，44、治疗后肝癌组织中CyclinE蛋白的表达，与生理盐水组和空白纳米组相比，* * P 0.01与丹参酮A组比较，p0.01，45，第六部分，丹参酮IIA纳米调节p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导诱导肝癌细胞凋亡的研究，46，丹参酮IIA纳米对肝癌细胞周期的影响，47，生理盐水组，空白纳米组，丹参酮A组

8、，丹参酮A纳米低剂量组，丹参酮A纳米中剂量组，丹参酮A纳米高剂量组，48，丹参酮IIA纳米激活p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路；丹参酮IIA纳米粒激活p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路：50.阻断p38信号通路对细胞凋亡的影响：p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路对肝癌细胞凋亡的影响：提示：丹参酮A纳米粒通过p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导途径诱导肝癌细胞凋亡和调节细胞周期，51。P38 MAPK对人肝癌细胞Fas和caspase-3表达的影响，Fas和caspase-3的扩增曲线，52。结论：建立了丹参酮A纳米粒冻干粉针剂的制备方法和质量评价方法。与丹参酮A相比，静脉给药后，丹参酮A在肝脏和肿瘤中

9、的药物浓度显著升高，而在血浆、心脏、肾脏、脾脏和肺中的药物浓度显著降低。纳米的药物持续释放超过8天。药动学过程符合三室模型，具有肝靶向和缓释的特点。丹参酮A以纳米剂型给药，抗癌作用明显增强。丹参酮纳米粒通过调节p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导诱导肝癌细胞凋亡，阻断肝癌细胞G0/G1期，降低转化生长因子1和细胞周期蛋白E的表达，抑制细胞增殖。通过激活p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路上调Fas和caspase-3基因表达是丹参酮a纳米粒诱导肝癌细胞凋亡的重要机制之一。53，本项目主要产出，发表论文9篇(国内期刊7篇，SCI 2篇)，申请国家发明专利1项，获得上海市科技成果1项，获得上海市医学科技奖

10、二等奖，培养研究生3名，54名，用于化疗栓塞的新型含去甲斑蝥素聚合物微球。控制释放杂志，2006，116(1):35-41。SCI (4.756) 9。用于治疗肝癌的含丹参素的新型聚合物纳米粒子。药物靶向杂志，2008。丹参酮a及其纳米粒诱导肝癌细胞凋亡及对p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子1信号蛋白表达的影响。肿瘤学，2008，28(1)丹参酮a纳米粒子治疗小鼠肝癌及其对细胞周期蛋白E表达的影响。上海中医杂志，2007，41(9):74-77。纳米中药治疗肿瘤的研究。中国中西医结合杂志，2007，4(4):378-383。丹参酮A纳米粒治疗肝癌的实验研究。国家肝胆和胰腺癌学会会议录，2007年，2007年12月。南宁大鼠移植性肝癌模型的建立。第二军医大学学报，2002，23(10):1074载药纳米粒子在肝癌治疗中的应用。中成药，2008.475-478。丹参酮A在调节p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路诱导人肝癌细胞及其相关基因凋亡中的作用。世界中国消