SDS PAGE电泳ppt课件

1、SDS-page，养病，主要内容：一，SDS-page简介2，实验试剂和设备3，实验阶段4，注意事项加入SDS的作用？SDS-PAGE的用途是什么？SDS-page蛋白质分离原理？SDS-PAGE的优点和缺点？竖板传记电泳装置，样品移动方向，相加，1。聚丙烯凝胶，聚丙烯酰胺凝胶，单体丙烯酰胺(Acr)和交联剂N，N-甲壳双丙烯酰胺(BIS)在加速剂N，N，N，N四甲酰胺(Bis)中，聚丙烯酰胺凝胶传记永冻中蛋白质的迁移率为它所具有的纯在蛋白质溶液中加入足够数量的SDS，12碳基硫酸根会带负电荷，因此各种蛋白质SDS复合物会带相同密度的负电荷，其数量大大超过蛋白质分子的原电荷量，因此，隐藏了不同

2、蛋白质之间的原电荷差异，SDS和蛋白质结合后，可以引起构象变化，蛋白质SDS复合物形成“雪茄烟”。徐璐不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度相同。SDS消除了蛋白质传记电泳的电荷和分子大小因素，蛋白质分子的传记电泳迁移率主要取决于分子量，但电荷和形状无关。2 .SDS订阅的作用：3 .SDS-PAGE的用途：主要用于测定蛋白质分子量。分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数是线性关系。logMW=K-bX式：MW表示分子量，X表示移动速率，K，B表示常数。将分子量已知的标准蛋白质的迁移率对数映射到分子量，就可以得到未知蛋白质在相同条件下传记电泳的标准曲线，并根据传记电泳迁移

3、率，从标准曲线上得到分子量。分子量范围与凝胶浓度的关系，4 .SDS-page蛋白质分离原理，分子体效应：蛋白质分子在SDS-聚丙烯凝胶中传记游泳时，传记游泳迁移率主要取决于分子量，分子量越小，迁移率越快。凝胶由分离胶和浓缩胶组成。上层是浓缩胶，明胶孔径大，分子筛效果差，其pH值为6.8，由于缓慢离子形成的高压梯度，跨性别蛋白质分子在游泳中压缩到了很薄的一层，分辨率大大提高。楼下是分离胶，凝胶孔径小，有分子筛效果，pH为8.8，跨性别蛋白质分子的负电荷几乎一致，游泳速度主要取决于分子量。蛋白质分子迁移规律：蛋白质分子越小，迁移率越快。混合样品、孔胶、按分子大小分离、传记电泳方向、传记电泳、小分

4、子、大分子、5、SDS-page优缺点、优点缺点：许多蛋白质由血红蛋白、色氨酸等两个或多个肽链组成，它们是由变性和强还原剂的作用引起的或单个肽因此，对于这些蛋白质，SDS-PAGE不是完整蛋白质的分子量，而是婴儿或单个钚链的分子量。，ii。实验试剂和设备，1 .试剂：(1) 30%丙烯酰胺(2) 10%SDS (3)分离胶缓冲区：3.0mol/L Tris-HCl pH 8.8 (4)浓缩胶缓冲区3360.5mol父缓冲区：Tris实验器材：垂直板传记永动机、传记永动机脱色、摇动移动枪滤纸大Petri盘子、垂直板传记永动机、电动永动机(1)、电动永动机、推杆(2)、推杆(3)、橡胶垫(4)实验

5、阶段，1 .安装塑料模具。2.分离胶的制备及添加：按照规定的比例准备分离剂。充分混合分离胶后，小心倒入塑料模具，在明胶上复盖一层水，水平固定在胶体凝固(聚合时间因室温而异)。3.倒入水，用滤纸吸掉剩下的水分。4.浓缩胶的制备及添加：按规定的比例准备浓缩胶。倒入混合的浓缩胶(注意不要产生气泡)，将梳子底部和分离胶的前向距离约1厘米，水平放置，直到胶体变硬。准备分离胶，准备浓缩胶，相加：聚合浓缩溶液后，小心地取出样品梳子，将电极缓冲液填充传记游泳罐前后凹槽，将试件溶液和标准蛋白溶液(添加量按每个品种规定)放入试件孔。7.传记电泳：垂直板传记电泳：恒压传记电泳，初始电压为80V，进入分离胶时曹征为1

6、50200V，溴酚蓝移至胶底时停止传记电泳。、浓缩pH 6.8、分离打开盖子，取出传记游泳模块，打开密封夹，取出玻璃板(凝胶)。取出玻璃板放入水中，用明胶(绿色)轻轻撬开玻璃板，将凝胶推进水中。9.染色：用至少5倍的体积染液浸泡凝胶，在缓慢摇晃的平台上室温1h左右。10.脱色：用水冲洗多次，用脱色液脱色，蛋白质带清晰。4，注意事项，(1)安装传记游泳插槽时，应均匀用力，防止玻璃板破裂，防止缓冲液泄漏。(2)应用硫酸铵TEMED催化剂后，明胶1520 min可以观察凝胶的形成，但至少需要40 min牙齿，以确保95个以上的单链聚合生长短，适当的孔径大小。梳子要轻轻地拔出一次。否则，附加插槽的完整性将受到损害。(4)聚合体的最佳温度为23 25，移植前