血液学血细胞化学染色

1、第三章细胞化学染色技术，学习目标，1 .把握：细胞化学染色的基本阶段；铁染色、过氧化物酶染色、酯酶染色、过碘酸-希夫染色、碱性磷酸酶染色、酸性磷酸酶染色的正常血细胞染色反应及临床意义。熟悉：细胞化学染色的概念和林爽应用。理解：细胞化学染色的原理和影响因素。第一节概述了1，概念细胞化学染色是结合细胞学和化学形成的科学。以细胞形态为基础，结合化学反应的原理，对血细胞内的各种化学成分(酶/脂肪类/糖类/铁/蛋白质/核酸等)进行定性、定位、半定量分析的方法。要求：血细胞化学染色的基本要求是将细胞成分和结构标记到位，反应产物必须是有色沉淀物，具有一定的稳定性。血细胞化学染色可以表示糖原，脂质，酶，蛋白质

2、等。第二，在必要性、形态观察方面有更多的主观性。一些远视细胞形态比较相似，很难识别。结合细胞化学染色提高疾病的诊断率。3，林爽应用程序，1 .有助于判断急性白血病的细胞类型。2.辅助血液系统疾病的诊断和鉴别诊断3。观察疾病的疗效和预后。4.对疾病发病机制的探讨，白血病的诊断：micm分型m: morphology i: immunology c: cy形态学分型：初步诊断免疫学分型：明确细胞瘤细胞遗传学型：与疾病预后相关的分子生物学分类：到分子水平，4，基本程序。固定物理方法：干燥，火焰(2)化学方法：a，蒸汽固定，2。标记：着色沉淀反应，(1)偶氮结合法：酯酶染色，(2)苄叉民法：pox (

3、3)普鲁士蓝反应：fe (4)希夫反应：pas (5)金属沉淀法：nn浆，5 .研究对象外周血和骨髓新鲜涂层单个细胞中的化学物质：酶、脂肪、糖类、铁、蛋白质、核酸等亚铁氟化铁(蓝色沉淀在fe部位)、铁、酸环境、普鲁士蓝反应、骨髓中的小颗粒所含的fe血黄素(细胞外铁)细胞内铁(中晚遗迹血细胞，观察油镜)，(1)等级(取决于铁颗粒的数量和大小)小颗粒：细沙粒等铁粒，看不清。粗粒子：容易看到的粒子。(2)阳性率观察100个中晚红细胞，计算铁质红细胞的比例。结果判断油红细胞核染色为鲜红色，铁卵染色为蓝绿色。细胞内铁(乳经观察遗迹血细胞)，类型：12个小铁粒子；类型：35个小型铁粒子；类型：610个小铁

4、粒子或14个大粒子；类型：10多个小铁粒子或5个以上大粒子。环形铁粒遗迹血细胞胞质内的6个铁粒，核周2/3以上。铁粒遗迹血细胞：胞质上出现蓝色铁粒的遗迹血细胞。铁粒红细胞(siderocyte):在细胞质中出现蓝色铁粒的成熟红细胞。，绿色箭头如下：环形铁粒子年轻红细胞；蓝色箭头是铁唇红细胞，1。细胞外铁：()()2。细胞内铁：铁粒红细胞的阳性率约为1244%，iii型(i型)，无形，型，环状铁粒红细胞，铁粒红细胞。三，参考范围，四，临床意义，铁染色是评价铁缺乏的最实用方法，反映储存铁的禁忌标准，是临床上应用最广的细胞化学染色之一。1 .缺铁性贫血：外铁，耐铁10%；治疗有效的话内外的铁。铁粒幼

5、细胞贫血：外部铁；耐铁阳性率，环状铁蛋红细胞增多，粗颗粒，形铁蛋红细胞引人注目。3 .mds-ras:内外的铁含量增加，环状铁粒红细胞为15%。4.非铁缺乏性贫血：龙斌、巨乳贫血症、再生障碍、白血病等内外铁正常或增加。感染、肝硬化、慢性肾炎、血色病等：外层铁增加了。5.应用评价，铁染色是临床上常用的细胞化学染色，对血浆铁蛋白不敏感，但反映了机体储存铁的禁忌标准。外铁：反映了骨髓中铁的存储量。耐铁：反映骨髓中可用的铁量。2，过氧化物酶染色(peroxidase，pox)，1，原理，粒细胞和一些单核细胞的溶酶体颗粒中含有过氧化物酶(pox)，分解h2o2，释放新生的氧，二甲基苯丁法(dab)原理，

6、福克斯(a)()颗粒较小，分布稀疏。(b)()粒子粗，病灶分布。(c)()颗粒粗，分布紧密，占细胞质的1/22/3。(d)()粗糙的粒子，块状分布；(e)()所有细胞质均充满颗粒，能复盖细胞核(f)。正常血细胞染色反应 1。粒细胞系统pox主要存在于粒子系统细胞中。区分的前粒细胞语音；分化的原粒弯曲到中性成熟果球，每个阶段呈阳性，阳性反应程度随细胞成熟而逐渐增加。中性分叶核细胞：强阳性嗜酸细胞：阳性最大嗜碱细胞： ()，2。单核细胞系统阴性或弱阳性3紧急列表：弱阳性；粒子：阳性()。2 .单核细胞系统： ()或弱，阳性粒子少，小。3.其他系统细胞：淋巴细胞系统、红细胞系统、巨核细胞系统、肠细胞

7、、组织细胞()。，临床评价，急性骨髓细胞白血病急性淋巴细胞白血病，鉴别，1。急性髓细胞白血病(1)急性髓细胞白血病阳性反应(2)急性单核细胞白血病弱阳性反应，2。急性淋巴细胞白血病女性反应或阳性率为3%(残留原粒细胞)，a苏丹黑b是溶解脂肪结构(中性脂肪，卵磷脂，糖脂，甾体)的脂溶性中氮染料，脂肪物质呈褐色或深黑色(粒细胞：丰富)。单核细胞：少量)。第三，苏丹黑b染色(sudan black b，sbb)，正常血细胞的染色反应，与pox染色基本一致的临床意义类似于pox染色。第二，sbb和pox之间的差异：1 .pox特异性高于sbb，敏感性低于sbb。2.pox染色应保持涂布新鲜，酶活性，s

8、bb染色可用作旧涂布。1 .特异性酯酶(specific esterase)主要存在于粒细胞，又称“粒细胞酯酶”氯乙酸as-d萘酚酯酶(nas-dce)中。1，分类，4，酯酶染色，2。非特异性酯酶单核细胞，组织细胞含量多，颗粒细胞，淋巴细胞含量少，氟化钠抑制单核细胞的非特异性酯酶，as-dnephenolase乙酸盐酶：nas-nas 单核细胞系统： ()肥大细胞： ()淋巴细胞，肠细胞主要用于确认急性白血病细胞类型： ()急性早期骨髓性白血病： ()强()急性单核细胞白血病： ()急性颗粒-()颗粒细胞()单细胞-醋酸酚酯酶染色(-naphthol acetate esterase，-nae

9、)，-醋酸酚酯酶(细胞内)，-醋酸酚(底物液中)，-萘酚，中氮盐，-用两种茄子方法染色后，用油镜数100或200个被检细胞，分别计算抑制前和抑制后的阳性率或阳性点。，氟化钠抑制率=，抑制前阳性率或阳性点-抑制后阳性率或阳性点，抑制前阳性率或阳性点，100%，a:急性单核细胞白血病-nae染色远视，幼稚的单核细胞大部分为强阳性，b:急性单核细胞白血病-nae 2.临床意义，急性白血病细胞类型急性表：单核细胞阳性，可被naf抑制。急性粒子：粒细胞弱、阳性，不受naf抑制。m3:强阳性，不能被naf抑制。m4:有些阳性细胞可以被naf抑制，有些阳性细胞不能被naf抑制。all:原来婴儿是阴性或阳性，

10、不能被naf抑制。正常血细胞染色反应，1 .单核细胞系统远视单核细胞分化差异培养幼稚和成熟单核细胞培养，被氟化钠抑制，2。粒细胞系统原细胞阴性或弱阳性以下阶段为弱阳性3。淋巴细胞系统多数阴性，少数弱阳性，不受氟化钠抑制，2。-；原理：血细胞中-nbe在碱性条件下水解基质液中-丁酸奈酚，产生-奈酚，它与肩袖紫色gbc结合形成不溶性红色沉淀，位于胞质内。-nbe染色反应，1 .粒子系统：每个周期(-) 2。单核系统：分化差异的原表(-)；分化的原书有糖成熟单核可以被naf抑制。淋巴系统：tc，郑智薰t郑智薰b() bc () 4。其他细胞：巨核、核红细胞、肠细胞(-)或弱()。原理：血细胞的酸性-醋酸酚酯酶(anae)为ph弱酸性(ph5.8)，酸性-醋酸酚酯酶染色(扩散棕色)- m5，anae染色反应，1。单核系统：河流可以被naf抑制。淋巴系统：tc ()bc (-) 3。其他急性颗粒-单细胞白血病诊断有独特的价值，-nae和nas-dce红(单)-nbe和nas-dce蓝(颗粒)，骨髓涂层特异性酯酶(ce)，非特异性酯酶(nae)，nas-dce: m1弱()/m2 () /m3强