安捷伦液相基本操作

1、安捷伦液相的基本操作,目录 一.色谱基础知识 二.Agilent液相色谱仪基本操作 三.常见色谱故障,一.色谱基础知识,1.色谱法的分离原理 溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。,2. HPLC的特点和优点,高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。 高速：分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在1530分钟，有些样品甚至在5分钟内即可

2、完成，一般小于1小时。 高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。,高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在L数量级。 应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。,二.Agilent液相色谱仪基本操作,流动 相瓶,排气阀,电源开关,二元泵,自动进样器,柱温箱,检测器,进入工作站,主界面,编辑完整方法,仪器方法设置,方法信息 仪器/采集 数据分析 运行时选项表,仪器方法设置,仪器方法设置,仪器方法设置,仪器方法设置,单次样品：样品命名,工作站使

3、用,序列样品：命名与序列表设置,工作站使用,打开仪器1脱机,数据文件夹,序列样品数据,单次样品数据,色谱图,样品数据,色谱图编辑,色谱峰数据,数据分析,数据分析,数据分析,调节积分参数,数据分析,报告打印报告,三.常见色谱故障,常见色谱故障-基线噪音 可能原因:a、检测池脏 b、检测池灯能量下降 c、由泵引起的脉冲 d、检测器上的温度效应 e、检测其中有气泡通过,常见色谱故障-基线漂移 可能原因:a、梯度洗脱所用溶剂有吸收 b、流动相脏 c、色谱柱没有用流动相平衡 d、系统中污染物溢出 e、实验温度不稳定,常见色谱故障-拖尾峰 可能原因： a、柱效降低或有柱塌陷 b、进样体积过大 c、柱外扩散

4、效应 d、碱性基质与硅羟基作用 e、重金属反应 常见色谱故障-前伸峰 可能原因： a、色谱柱过载 b、进样体积过大 c、大峰之前有未彻底分离 的小峰,常见色谱故障-负峰可能原因： a、样品吸收比流动相吸收小 b、溶解样品的溶剂通过色谱柱平衡被破坏 c、示差检测器中最常见，溶质的折光指数小 于溶剂的折光指数。,常见色谱故障-鬼峰 常见原因是流动相脏，尤其是水相。要求使用超纯水，最多两天就换 常见色谱故障-双峰 可能原因：a、柱头塌陷或柱床运动 b、柱前滤芯堵塞 c、组分共流出 d、样品量过大 f、进样器的进样流路存在分叉流路,常见色谱故障-峰扩展 可能原因：a、柱效降低或有柱塌陷 b、进样体积过大 c、流动相粘度大,常见色谱故障-压力过高 可能原因： a、色谱柱进样口过滤芯被污染 b、冲洗阀过滤芯被污染 c、色谱柱被污染 d、连接管路的毛细管堵塞 e、进样器转子上凹槽被堵塞 f、进样针或针座被阻塞 常见色谱故障-压力过低 可能原因： a、溶剂