第4节 分光光度测量方法.ppt

1、第一章 紫外-可见分光光度法,一、普通分光光度法 二、示差分光光度法 三、双波长分光光度法 四、导数分光光度法,第四节 分光光度测定方法,一、普通分光光度法,1.单组分的测定 通常采用 A-C 标准曲线法定量测定。 2.多组分的同时测定 若各组分的吸收曲线互不重叠，则可在各自最大吸收波长处分别进行测定。这本质上与单组分测定没有区别。 若各组分的吸收曲线互有重叠，则可根据吸光度的加合性求解联立方程组得出各组分的含量。 A1= a1bca b1bcb A2= a2bca b2bcb,二、示差分光光度法（示差法）,普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量较高时，将产生较大的误差。需采用示

2、差法。即提高入射光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液。 设：待测溶液浓度为cx，标准溶液浓度为cs(cs cx)。则： Ax= b cx As = b cs x s =b(cx cs ）=bc 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差。,示差分光光度法（示差法）,AAx As =b(cx cs ）=bc 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差A 。 示差法测得的吸光度与c呈直线关系。由标准曲线上查得相应的c值，则待测溶液浓度cx ： cx = cs + c,示差法标尺扩展原理：,普通法： cs的T=10%；cx的T=5% 示差法： cs 做

3、参比，调T=100% 则： cx的T=50% ；标尺扩展10倍,三、双波长分光光度法,不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束单色光(1和2)；以参比波长1处的吸光度A1作为参比，来消除干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提高。 A A2 A1 (2 1)b c 两波长处测得的吸光度差值A与待测组分浓度成正比。1和2分别表示待测组分在1和2处的摩尔吸光系数。,关键问题:,测量波长2和参比波长1的选择与组合 以两组分x和y的双波长法测定为例： 设：x为待测组分，y为干扰组分，二者的吸光度差分别为: Ax和Ay，则该体系

4、的总吸光度差Ax+y为： Ax+y = A x + A y 如何选择波长1 、2有一定的要求。,选择波长组合1 、2的基本要求是：,选定的波长1和2处干扰组分应具有相同吸光度，即： Ay = A y2 A y1 = 0 故： Ax+y = A x=(x2x1)bcx 此时：测得的吸光度差A只与待测组分x的浓度呈线性关系，而与干扰组分y无关。若x为干扰组分，则也可用同样的方法测定y组分。,可采用作图法选择符合上述两个条件的波长组合。,在选定的两个波长1和2处待测组分的吸光度应具有足够大的差值。,四、导数分光光度法,导数分光光度法在多组分同时测定、浑浊样品分析、消除背景干扰、加强光谱的精细结构以及

5、复杂光谱的辨析等方面，显示了很大的优越性。 利用吸光度(或透光度)对波长的导数曲线来进行分析： 0 e-bc 假定入射光强度0 在整个波长范围内保持恒定： dI 0 /d0 则：dI/d0 bc e -bc d/d 0 bc d/d,导数分光光度法,dI/d 0 bc d/d 一阶导数信号与试样浓度呈线性关系； 测定灵敏度依赖于摩尔吸光系数对波长的变化率d/d。吸收曲线的拐点处d/d最大，故其灵敏度最高(见图）。 同理可以导出其二阶和三阶导数光谱（略）,请选择内容：,第一节 基本原理 第二节 紫外-可见分光光度计 第三节 显色与测量条件的选择 第四节 分光光度测定方法 第五节 有机合物紫外光谱

6、解析,结束,紫外可见分光光度法的特点：, 仪器设备和操作条件比较简单，费用较少分析速度较快。 灵敏度较高最低检出浓度可达10-6g.mL-1。 有较好的选择性一般可在多组分共存的体系中，对某一种物质进行测定。 精密度和准确度较高。现在新型仪器测定，相对误差可达1%2%之内。 用途广泛。医药、化工、冶金、环保等。,紫外可见分光光度法的原理：,定性分析主要用：吸收光谱，max和 max。 定量用：Lambert-Beers Principle。 对象：含有双键的化合物。 主要是-跃迁和n -跃迁。,光源,单色器,样品室,检测器,显示,主要由：光源、单色器、比色池、检测器 四部分组成。 在实验前要进行波长校正及比色皿选择（T=98%101%）,紫外可见分光光度