第三章 培养基制备.ppt

1、第三章培养基准备，第二，知识目标1。掌握培养基常见的原材料。掌握淀粉水解糖的制备。掌握徽章的丰口惠方法。能力目标1。根据生产要求，可以选择合适的培养基。2.在生产中，根据企业现状，可以选择适当的培养基灭菌方法。3，第一节工业发酵培养基，1，培养基的营养成分及用途光光滋养菌氢，硫，氨化为1。能源亚硝酸盐、亚铁盐碳水化合物等有机石油天然气和石油化学产品(如乙酸)异养菌功能：生长，需要繁殖，4，碳酸盐2。碳源淀粉水解糖、糖蜜、亚硫酸盐浆废液等石油、政古石蜡、天然气醋酸、甲醇、乙醇等石油化工产品功能：构成能源、菌体、代谢产物的物质基础，5，有机氮：豆粉、花生粉、玉米浆、6无机盐铁、锰、钴等微量元素功能

2、：菌体组成、酶组成、酶活性裴珉姬、渗透压力调节、pH值调节、氧化还原潜力裴珉姬5。生长因子硫胺、生物素、对氨基苯甲酸、肌醇等功能：酶的辅助部分、7，6前体、促进剂及抑制剂发酵培养基中部分成分的添加有助于控制产物的形成，而不促进微生物的生长。这些物质包括前体、促进剂、抑制剂。8，(1)前体，一些化合物被添加到发酵培养基中，在生物合成过程中，可以由微生物直接与产物分子结合，其本身的结构没有太大变化，但产物的产量被添加到前体中，大大提高。研究结果表明，在青霉素生产中加入玉米浆，青霉素产量从20u/mL增加到100u/mL，玉米浆中的苯乙胺有限地结合青霉素分子，提高了青霉素G的产量。9，10，(2)促

3、进剂不是营养素，也不是前驱体，但是指可以提高产量的添加剂。例如，在酶发酵过程中，将衍生物、表面活性剂及其他酶生产促进剂(如吐温80、植酸、洗涤剂等)、11、(3)抑制剂在发酵过程中加入抑制剂，可以抑制一些代斯途径的进展，激活其他代斯途径，获得人们需要的某些产物。例如：微生物发酵产生甘油(如亚硫酸氢钠)，它在代斯中产生乙醛和添加剂。12，-磷酸甘油的合成，糖原1-P-葡萄糖6-P葡萄糖EMP途径6-P合成培养基：也称为组合培养基(常用于定量研究)。半合成培养基： (按天然有机碳源、氮源、生长因子适当添加化学药品。)，15，2。根据培养基的物理状态，(1)固体培养基A，凝固培养基：即遇热就能融化，

4、冷却就能凝固的固体培养基。b，天然固体培养基：用天然固体基质直接制作的培养基(如麦麸、米糠、木屑等)。(2)半固态培养基中放入0.5%左右的琼脂作为凝固剂形成的培养基称为半固态培养基。主要用于观察菌种鉴定、细菌运动特性及噬菌体的功效测定等。(三)液体培养基；培养基中8090%是水。，16，3。根据培养基的用途，选择(1)孢子培养基(2)种子培养基(3)发酵培养基(4)补充剂(5)浓缩培养基(6)选择性培养基(7)鉴别培养基(8)；(a)，培养基准备原则1。根据微生物的营养要求，徐璐准备其他培养基。2.注意各营养素的浓度和比例。3.调节适当的物理化学条件。4.根据培养微生物的目的5。使用尽可能便

5、宜、容易获得的原料。18，1。文献复习2。使用优化法或正交试验法精心设计培养基配方。发酵培养基的用途和要求、成分、配方经实验确认，配方时原料来源、成本及工艺管理并行。(2)，选择培养基的方法，19，3节培养基的赵霁，1，培养基的赵霁原则培养基应提供合成微生物细胞和发酵产物的基本成分。有助于减少培养基原料的单耗，单位营养素的合成物数量多或生产率大。提高培养基产品的浓度，有利于提高单位窖发酵罐的生产能力。有助于加快产品的合成，缩短发酵周期。最小化副产品的形成。降低发酵过程中对通气挥发的影响，有助于提高氧气的利用率，减少能源消耗。有助于产品的分离和精制。可以最小化引起“三废”的物质。根据20，1微生

6、物培养的要求。2营养成分的比例在配制适当的3渗透率4pH 5氧化还原电位时，应考虑营养成分的添加顺序，为了避免产生沉淀物，为了避免营养成分的损失，添加顺序通常先加入缓冲化合物，溶解后添加主要物质，然后添加维生素氨基酸等生长素类。21，2，培养基成分比例的选择培养基组(包括这些成分的来源和加入方法)，比例，缓冲能力，粘度，消毒是否彻底，消毒后营养破坏程度，原料中的杂质含量影响菌体生长和产物形成。22，3，培养基配置的基本过程培养基配置的基本过程如下。原料计量溶解调节pH值过滤，化妆塞和绷带灭菌，23，1。原料计量，溶解根据培养基配方准确地指各种原料成分。容器(通常使用铝锅或不锈钢锅)中需要的水先

7、放入。一些难以溶解的原料(如蛋白质、牛肉奶油等)可以事先在小容器里放一些水加热，然后进入容器。部分原料用量少，不易计量。首先配制高浓度溶液，按比例转换后，将一定体积的溶液放入容器。2.酸度(pH值)调整通常用盐酸和氢氧化钠溶液调节。3.培养基的过滤和净化培养基的过滤和澄清方法有几种：纱布过滤；棉花过滤保温过滤器，24，4。如果培养基中有不溶于水的原料(如碳酸钙资源)，则在盆景前要继续搅拌，使其悬浮，这样才能均匀地进入每个容器。培养基的分量必须根据使用目的和实验的具体情况来决定。5.包棉花塞和棉塞的作用主要在于防止外部微生物进入培养基，防止由此引起的污染。还能保证良好的通气性能，使微生物不断开花

8、，获得无菌空气。25，6。培养基灭菌一般在经过盆栽、棉花塞、绷带后立即灭菌，需要做斜面的试管热的时候要立即提高斜面，斜面可以放在特殊斜面上，斜面要适当，斜面长度约为管状长度的三分之一。7。培养基的储存应避免在含有染料或其他对光敏感的物质的培养基上特别是长期直接照射阳光。，26，4，固体谷料的赵霁，以固体原料直接加水制成的固体培养基称为谷料。1.谷类的成分原料2。粮价的增加值一般是1:1133601.5倍。检查标志是加水后用手抓住，稍微用力捏，手指之间有水滴溢出但不掉的程度。3.谷山碱度曹征，第27，4节淀粉对应的制备，淀粉对应的制备方法1。酸解法：定义：以酸(无机酸或有机酸)为催化剂，在高温高

9、压下将淀粉水解为葡萄糖的方法。优点：设备要求简单，水解时间短(20min)，设备生产能力大。缺点：在高温高压下进行，设备防腐蚀、高温、耐高压、副作用多，对原料要求严格，淀粉颗粒太大，渡边杏，渡边杏淀粉浓度过高。28，29，2。酶解法： (双酶水解法)定义：用淀粉酶将淀粉水解成葡萄糖的过程。一般分为两个阶段。第一步是利用淀粉酶将淀粉液化转化为明胶和低聚糖，增加淀粉可溶性的过程称为液化。第二阶段，利用糖化酶进一步水解明胶或寡糖，将其转化为葡萄糖的过程称为糖化。也称为双酶法。30，-淀粉酶(液化)葡萄糖淀粉酶(糖化)优点：(1)反应条件温和。(2)酶的特异性强，副作用小。(3)可在高淀粉吴优浓度下水

10、解。(4)糖液的营养素很丰富。(5)糖液色泽浅，没有苦味，有利于糖液的精制。缺点：长时间(23)工作，需要的设备多，糖液过滤困难。31，1浆批罐；2，8过滤器3，9，14，17泵4，10喷射加热器；5缓冲6液化层流罐；7液化液体贮罐；11灭菌罐；12板式换热器；13糖化罐；15压滤机；16糖化临时储罐；18糖罐，双酶糖工艺流程图，32，3。酸酶结合酶酸法，33，淀粉糖生产过程检查指标，DE值：糖化液中还原糖含量(葡萄糖系)对干物质的比例为DE值，34，我一般只能杀死营养细胞，不能杀死细菌孢子。灭菌：用物理或化学方法杀死或去除环境中的所有微生物，包括营养细胞、细菌孢子。消灭杂菌，防止杂菌污染。3

11、5，2，灭菌方法：干热灭菌、湿热灭菌、物理灭菌(射线、微波等)、化学灭菌(各种化学药品)；1.干热灭菌法用于燃烧灭菌，在设备上加热电热或红外线，主要用于保持干燥的材料、器具等，36，2。湿热灭菌法利用蒸汽释放的热量，使微生物细胞中的蛋白质、酶、核酸分子内部的化学结合，特别是氢键受损，引起不可逆转的变性，使微生物死亡。优点：1)蒸汽来源容易，运营成本低，本身无毒。2)蒸汽有很强的穿透力，灭菌容易3)蒸汽都有很大的潜热，凝结的水分有利于湿热灭菌。4)蒸汽输送可以用自己的压力调节，调节方便，技术管理容易受到缺点。1)设备成本高。3.射线灭菌紫外线4。化学药品灭菌法表面消毒剂高锰酸钾溶液：0.10.2

12、5%，漂白粉，75醇，新洁灭和双氯芬酸，甲醛37，戊二醛，过氧乙酸，焦炭二乙基酯，苯酚，38，38，39，1。批灭菌工作流程(实际罐灭菌)(1)培养基的预热培养基先加热到8090，然后取蒸汽加热到120180。目的：1)直接引进蒸汽时，培养基和蒸汽温度过高，产生大量凝结水，防止培养基稀释。2)防止直接蒸汽引起的泡沫急剧上升引起的材料泄漏。40，(2)培养基灭菌在每条路上进入蒸汽(进气口、出气口、样品口)，温度上升到120130，保温30min，41，2。批次灭菌的事项(1)各蒸汽进口必须顺畅，才能防止短路逆流，罐子里的液体严重翻转，使罐子里的材料达到均匀的灭菌温度。(2)排气量太大，节约蒸汽渡边杏。(3)灭菌结束时，应立即引入无菌空气，保持缸压力，然后打开钳子或蛇管冷却，防止缸压力迅速下降，吸入外部空气或发生发酵罐损坏。(4)引进无菌空气之前，罐