显微鉴定的基本操作技能

1、第三章 显微鉴定的基本操作技能,第一节 显微标本片的制作,一、组织透化剂及应用： 1、组织透化剂：使细胞组织内含物溶解除去或透明清晰、色素氧化退色、皱缩细胞壁膨胀透明的试剂。 2、作用：（1）浸润作用。 （2）溶解、分解或氧化作用,3、常见的透化剂：（1）水合氯醛的特点：能渗入组织细胞内，使干燥而皱缩的细胞发生膨胀；能溶解多数组织内含物；对观察草酸钙结晶极为适宜；不加热可立刻观察菊糖。,（2）氢氧化钾（氢氧化钠）溶液的特点：（1）5%水溶液为强力透化剂；能迅速溶解除去淀粉和蛋白质，且能使细胞壁膨胀，作用持久；对纤维素性细胞壁组织有解离作用；透化后需将其洗去；常用于解离组织标本片。,二、组织封藏

2、剂及应用： 1、组织封藏剂：能保持原制片要求，利于组织和细胞形状、颜色和内含物观察的溶液。,2、作用：保持原制片要求。 3、常见的封藏剂：（1）蒸馏水加酚、苯甲酸、樟脑等防霉。 特点： 能保持原形、原色，对皱缩的细胞壁可恢复原状态； 用蒸馏水装片可观察淀粉粒； 可使黏液溶解，并破坏糊粉粒。,（2）稀甘油加入酚等防霉。 特点： 保持2 3天； 用稀甘油装片可观察糊粉粒、淀粉粒、油滴、树脂等； 可在透化后滴加，以防水合氯醛析出结晶。,三、显微标本片： 1、粉末标本片：以粉末装片，粉末有细度要求。 2、表面标本片：3、切片标本片：中药鉴定中最多的一类。 4、解离组织标本片。,四、粉末标本装片： 1、

3、暂时性粉末标本片：暂时性的，用完之后就洗掉的，载玻片、盖玻片可重复使用。 过程：（1）粉末加封藏剂、盖盖玻片、清洁、观察。,（2）粉末加水合氯醛溶液加热透化三次，加稀甘油封藏、盖盖玻片、清洁、观察。 2、永久性粉末标本片：做法较复杂，一般我们在外面购买的就是永久性装片，只要不损坏，可以一直看。,五、表面标本片：主要用于叶片、萼片、花瓣和雄蕊等表皮的表面特征观察。 1、整体封藏法：取材料剪取正反2小片，加水合氯醛加热透化3次，加稀甘油封藏，盖盖玻片，清洁，观察。 2、表皮撕离法：适用于较厚的叶片、萼片、花瓣等。,六、切片制片法：此类与粉末装片用得最多，有横切和纵切。 1、机器切片法：生活中很少用

4、，只有生产厂家大量生产时运用。,2、徒手切片法：实验室常用此法。（1）材料的预处理：清洁，（除去非药用部分，选取合适切片部分。）切成适当大小的块，软化。,软化方法： 在吸湿器中放置12 24h。 过硬，水浸或煮12h。 特硬，高压锅煮20min。如天麻。 过软，浸入高浓度乙醇中20min。,软化注意事项： 需观察糊粉粒、黏液、菊糖等水可溶性的物质的，不可与水接触。 需观察挥发油、树脂等，不能与高浓度乙醇或其他有机溶剂接触。,（2）材料的分割：切薄片。 （3）材料的挟持：方便切片，常用胡萝卜、马铃薯。 （4）徒手切片刀：双面和单面，双面切较柔软，单面切较硬，单面应用较多。,（5）持刀方法：右手持

5、刀，刀身放平，刀口向切片者。 （6）切片：材料和刀口蘸水，切掉不整齐一段，同左前外方向右内方迅速拉切，臂用力。 （7）取片：合乎需要的立即浸入水中。,（8）透化：置载玻片中央加水合氯醛加热透化。 （9）封藏：加稀甘油封藏，盖盖玻片。 （10）清洁观察。,七、解离组织标本片：薄壁组织点大部分的用氢氧化钾法；质地坚硬，木化组织较多用硝铬酸法。,1、氢氧化钾法：供试样置试管中加氢氧化钾，加热，倾去碱液，用水洗，放于载玻片上，用解剖针撕开，加稀甘油，盖上盖玻片。,2、供试样置于试管中，加硝铬酸试液适量，放置，倾去酸液，加水洗，放于载玻片上，用解剖针撕开，加稀甘油，盖上盖玻片。,第二节 显微测量法,显微

6、测量：应用显微镜测量尺在显微镜下测量微细物体的大小。显微测量尺分为目镜测微尺和载物台测微尺。,1、目镜测量尺：安装在目镜内的一个测量尺。 2、载物台测量尺：载玻片中央粘贴的测量尺。,3、两尺的关系及应用：台微尺是不变的，每小格10um；目微尺随目镜和物镜的变化而变化。,4、目微尺的标定： （1）将台微尺放置在载物台上，目微尺放入目镜镜筒内。（2）先低倍镜，将目微尺刻度移至视野中央。（3）旋转目镜，使两尺平行。,（4）移动台微尺，使目微尺零端与台微尺刻度的某刻度线相重合。 （5）再找两尺的第二条重合刻度线，数两条重合线间两尺的小格数，记录。 （6）计算出目微尺每一格在该物镜条件下相当的长度（um

7、）标定值 =台微尺小格数10um/目微尺小格数。,5、测量方法： （1）将需测量的载玻片放于载物台上。 （2）用目微尺测量目的物的小格数，记录。 （3）计算：实际长度um=测得小格数标定值,第三节 显微绘图法,显微绘图法的方法又分为平描和应用显微描绘器描绘。 一、平描：只凭肉眼描绘 1、根据观察到的实物进行绘图。,2、绘图的要求： （1）要排列整齐、部位适中、比例恰当。 （2）要做到形状、比例、倍数正确。 （3）以点、线表示。,（4）图中各部分用阿拉伯数字表示，在图下端注明标号名称。 3、绘图用具：16开白纸或A4白纸。铅笔。,4、绘图：图的类型一般分粉末图及组织图。 （1）粉末图：绘出其粉末

8、特征。（2）组织详图：较详细，需要所有组织全部绘出，较难，一般不绘此种图。,（3）组织简图：以线条表示，清晰，一目了然。实验室常绘出的图，但不实用于出版、做研究等。 二、显微描绘器描绘：分放映装置和描绘器。,第四节 常用显微化学分析,一、细胞壁性质的鉴别： 1、木质化细胞壁：加间苯三酚试液，放置，加盐酸，显红色或紫红色。 2、木栓化或角质化细胞壁：加苏丹试液或紫草试液，微热，显橘红色至紫色。,3、纤维素细胞壁：（1）加氯化锌碘试液湿润，放置，再加硫酸溶液，显蓝色或紫色。 4、硅质化细胞壁：,二、细胞内含物质性质的鉴别： 1、淀粉粒：（1）加碘试液显蓝色或紫色。（2）用甘油醋酸试液装片，末糊化的在显微镜下显偏光。,2、菊糖：加a-萘酚乙醇溶液，再加硫酸，显紫红色并溶解。 3、脂肪油、挥发油、树脂：（1）加苏丹试液或紫草试液，均显橘红色到紫红色。,（2）加90%乙醇，脂肪油和树脂不溶解，挥发油溶解。 4、糊粉粒：（1）加碘试液，显棕色或黄棕色。,（2）加三硝基苯酚试液，显黄色。 （3）加硝酸汞试液，显砖红色。 5、黏液：（1）加墨汁，黏液呈无色透明块状。 （2）加钌红试液，显红色。,6、草酸钙结晶：（1）加稀盐酸溶解而