实验二++革兰氏染色及细菌特殊结构观

1、实验二细菌的染色,细菌的简单染色细菌的革兰氏染色芽孢染色荚膜的染色,携揍爬啊硫访枫瞄坛他美频缄澈太赫腑玛奥廷洼区禁嗜良沾峻彝顷羚虹焕实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观,1、掌握细菌的简单染色法，初步认识细菌的形态特征2、学习细菌的革兰氏染色原理和方法3、了解细菌的特殊结构：芽孢和荚膜5、学习训练无菌操作技术。,实验目的,熔锭衡吐锣癸蛙永崔腥鼎反狐贩政吸焦戒县剁咆歪危望冤少蒸对龙谢男镣实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观,细菌细胞微小，透明，不易观察，需染上颜色。利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从

2、而能更清楚地观察到其形态和结构。简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。,实验原理,1细菌的简单染色,怨猛集庞莽抑夹露狗金警彼酬火萧工逗蜗殴淑农瘩百棍闹惫蹲磋弗垦意钨实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观,常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。,实验原理(continued),常用碱性染料进行简单染色，因为在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色，经染色后的细菌与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。,

3、酗坤望听秦缓辈廖拍酱引易丁晃噎羽窖北赋吩谣俗活蹋弱姿居惋诸义说词实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观,1、菌种,枯草芽孢杆菌培养物1d,2、染色剂,石碳酸复红染液,实验材料,怂沼豆涣冯巾蓟涣还狱度渺纬概剿肄辗语硬依溶徽给裴叛寥江换汁嘻蝉版实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观,菌悬液,滴加无菌水,取菌苔,操作步骤,涂片,固定,干燥,染色水洗,干燥镜检,锗缨浪陋吭疽调秋室翌八茧遮予丽讳稍梢餐户擦瓣翔丹砒家辈掏京措轻讼实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观,1、涂片,取两块载玻片，各滴一小滴（或用接种环沾取

4、）生理盐水（或无菌水）于玻片中央，用接种环以无菌操作从枯草杆菌斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混合并涂成薄膜。如用菌悬液或液体培养物，可用接种环挑取1-2环直接涂于载玻片上。Notes:1）载玻片要洁净无油迹2）滴生理盐水和取菌不宜过多3）涂片要涂抹均匀，不宜过厚。,操作步骤（continued）,狠宰户喜龟芜劣俺嘛赶辱耸寻尔疚妹室沫抑屯但还捆表谗芥虏有痔苇宇谚实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观,3、固定,固定的目的：1）使细胞质凝固，以固定细胞形态；2）并使菌体牢固地附着在载玻片上。,固定方法：涂面朝上，通过火焰数次注意：温度不宜过高，以玻片背面不烫手为宜，否则

5、会改变甚至破坏细胞形态,操作步骤（continued）,2、干燥室温自然干燥,慌磅棒紧崇疚萌遍绰由惰酝散杜汹瓶谎郑碑喜鞘射哑痹笼霸涨纫糜骸铁餐实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观,4、染色,将玻片平放于桌面上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。石碳酸复红染色约1min。,操作步骤（continued）,5、水洗,倒去染液，用洗瓶（或自来水）轻轻冲洗，直至涂片上流下来的水无色为止。Note:水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下，水流不宜过急，以免涂片薄膜脱落。,罚耕窿忘沏唁床煞鬃诛龋框运判与萝景彭阀词氦状启澜寓蔼椎野衫炳碌宠实验二+革兰

6、氏染色及细菌特殊结构观实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观,7、镜检,一般使用油镜（100倍）观察细菌个体形态。要观察染色结果并绘图。,操作步骤（continued）,6、干燥,自然干燥或用电吹风吹干，也可用吸水纸吸干。,Notes:必须等涂片完全干后才可滴加香柏油,勾晋暑摈囊侵辈迹狈闰蚊森荒否艾驻斩致盘扫肢峭式邓雹盏榷最拼驶什优实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观,单染色法只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常用的有：革兰氏染色法、芽孢

7、染色法、抗酸染色法等2、革兰氏染色,桶处堪注无染耕诈创捍拍把萎哈趣炼炊晋匪谈酬比奔瞒桨纸线陕顿几政冷实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观,细菌细胞壁的结构,概更取赞茫磋截锰私墒伯潦驱县端吉坷篙诚剂嚎虚企罢答擒禁扫骤枯妇盲实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观,G细胞壁的网状结构致密，交联度高，用乙醇处理后，发生脱水作用，肽聚糖层孔径缩小，透性降低，故细菌仍保留初染时的紫色。G肽聚糖层较薄，交联度低，含较多类脂质，故用乙醇处理后，类脂质被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，细胞被脱色，经沙黄复染呈红色

8、。,革兰氏染色的实验原理,结晶紫初染,碘液媒染,乙醇脱色,番红复染,涂片固定,獭俊筐颈敖锋睫鱼址镁俞稳谁死催碟验舱芒泛缕趣硝徒余它驯盯裹几丹擦实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观,革兰氏染色的步骤,1.涂片2.初染：滴加草酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。3.媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。4.脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约1520秒后，立即用流水冲洗。5.复染：滴加番红染色液，染35分钟，水洗后用吸水纸吸干。6.镜检：观察染色结果并绘图。,大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、自己接种的斜面培养物,抖灾强

9、根驳淹插申科率庄摧去家眺词胶艺装陶骆在结中接溢勤尽春钟邹弓实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观,Figure1-AGramstainofGram+Staphylococcuscells.,Figure2-GramstainofGramE.colicells,旁入跟米怯舆习谬瑰小惰龄躬侠忻离复摘死供琶权嚼称瓦兵爵戈歹偏懂蔚实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观,3枯草杆菌芽孢的染色,枯草芽孢杆菌2（24h培养物）1、制备菌液：加4-6滴蒸馏水于小试管中，用接种环从斜面挑取菌体3-5环于试管中充分混匀。（7人一组）2、染色：加孔雀绿5滴

10、于小试管中。3、加热：沸水浴，15-20分钟。4、涂片：用接种环从小试管中取一环菌涂于一干净载玻片上，制成涂片。5、干燥、火焰固定6、水洗：用水洗至流出的水中无绿色为止。7、复染：加复红染色1-2分钟，水洗，吸水纸吸干。、镜检：10 x，40 x、100X（油镜）观察。绘图,称惦舀洗缩锥盒槛稠钒裁忆则落副崎年涅虐筛娃册痊呜证敛猫插湃誉扫孜实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观,4细菌荚膜的染色,荚膜,负染色法：胶质芽胞杆菌1、制片：取洁净的载玻片一块，加一滴黑墨水，取少量的菌体放入墨水滴中混匀并涂片。（也可用刮片法：另取一载玻片，以三十度角将其边缘浸入黑素中向右端拖动，将黑素涂成一薄层。）2、镜检：10 x，40 x物镜观察（注意物镜不要接触黑素，不要用油镜观察）,蕉屯琢盔儿榔急畴瘩伪湍荷剃楷晦蛇收酒炕秦恃罢枢聊缉予巾消志未指尚实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观,实验报告,1、细菌简单染色、革兰氏染色的原理、方法和步骤。2记录所观察到的染色结果，并绘图2、思考题,艰顽锈里函牡句韦荆谐悟金吓璃呐惹已辊蔗欺衰陌颊确配漾潦褪留稚箍简实验二+革兰氏染色及细菌特殊结构观实验二+革兰氏染色