基因工程的基本操作程序.ppt

1、a，1，审阅，1。基因工程的基本工具是什么？基本工具的作用和特征是什么？3.限制性内切酶，DNA连接酶分别对DNA的哪些部分起作用？基因工程的基本阶段是什么？如何获得目标基因？a，2，目的基因，a，3，1。质粒是基因工程中最常用的载体，主要特征如下。()可以自主复制不能自主复制。结构很小的蛋白质环RNA环DNA环DNA “可以方便地”借用。a .b .c .d .，c，2。以下不是基因载体必须具备的条件()a，可自我复制b，具有多种限制性酶的c，具有标记基因的d，d，a，4，a，5，真核生物的基因结构，前体信使RNA，成熟的信使RNA，a，6，基因组库：包括特定生物在内的全部基因部分基因库：包

2、括特定生物在内的部分基因(如cDNA库)，a，9，cDNA库基因组库，从基因库中获取目标基因，a，10，弹弓：射击，构建基因组库和获取目标基因包含的基因组片段分别复制到质粒或噬菌体载体上，通过转染细菌或对噬菌体粒子进行体外包装，构成了该生物的基因组库。a，12，构建逆转录，cDNA库，获得目的基因的方法，a，13，a，14，a，15，根据已知氨基酸序列直接合成DNA，化学合成人工合成，核苷酸序列要合成的dnna，a，17，PCR反应系统模板：DNA原料：4种脱氧核苷酸；酶：Taq酶(TaqDNA聚合酶)从嗜热细菌中分离引物获得：DNA片段Mg2(维持酶活性必需)PCR缓冲液：保持PH不变，保护

3、Taq酶，a，18，PCR反应过程可以分为3个阶段改性双链模板DNA被分离成单链结构。(90 95)，DNA双股，DNA单股，变性，a，19，2。退火底漆补充模子，形成双股。(55 60)(底漆浓度高，序列短，容易与模具结合。)，PCR反应过程可以分为三个阶段：变性、退火、扩张、引物、a，20、PCR反应过程可以分为三个阶段：变性、退火、扩张、3 .通过Taq酶作用扩展，合成特定的DNA序列。70 75，扩张，a，21，变质，二次循环，a，22，退火，二次循环，a，23，扩张，二次循环，a，24，ii PCR此时放大产物的数量随着周期数的增加不再呈指数增长。a，25，PCR程序设置，a，26，

4、PCR的应用，PCR具有节省时间、易于操作、特异性、高灵敏度、高效率、广泛的应用。PCR技术广泛应用于分子生物学、医学和事件检测领域。，a，27，例1: 1，获得以下目的基因的方法中需要模型链()a .从基因库中获取目的基因。b .利用PCR技术扩增目的基因。c .通过反转录方法D. DNA合成器进行化学合成。a，28，(b)基因表达载体的构建形成重组DNA分子，切割目的基因和质粒的限制酶是同一限制酶吗？同类，a，29，目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并遗传给下一代，表达和操作目的基因。a，30，目的基因进入受体细胞内，在受体细胞内稳定表达的过程称为“转化”。常用的受体细胞：大肠杆菌、枯

5、草杆菌、土壤亚基帕、酵母、动植物细胞等；(iv)将目的基因导入受体细胞；a，31；常用的受体细胞：大肠杆菌、亚基杆菌、土壤农杆菌、土壤农杆菌，主要学习细菌或病毒如何感染细胞。介绍方法：(3)将重组DNA分子引入受体细胞，a，32，导入微生物细胞，将目的基因克隆到大肠杆菌细胞的操作步骤：1)获得目的基因和质粒载体；2)形成重组质粒。3)制造易感细胞，用重组质粒转化大肠杆菌细胞。4)培养大肠杆菌，使重组质粒形成很多拷贝。5)筛选含有重组质粒的大肠杆菌细胞。a，33，植物细胞导入：土壤亚基帕转化，土壤亚基帕菌：化学柱星(苯酚)，双子叶植物和裸子植物感染，a，34，气丛法：子叶植物常用的基因转化方法，

6、但代价很高。花粉管通道法：非常简单经济的方法。我国转基因抗虫棉是通过这种方法获得的。a，35，将目的基因导入动物细胞。方法：显微注射法程序：微量注射重组DNA精制鸡蛋(受精卵)受精卵，开发新性状的动物，a，36，转基因动物，a，37，1。筛选包含目标基因的受体细胞，检测是否有标记基因，判断目标基因是否被引入受体细胞。(1)抗生素抗性筛选方法：菌株是抗生素缺陷型，质粒包含其抗性基因(如氨苄西林、卡拉霉素等)。如何筛选包含目标基因的受体细胞？只有包含这种抗生素的培养基才能生长转基因者。)，(4)目标基因的检测和鉴定，a，38，pBR322质粒结构，标记基因，筛选，限制性内切酶，识别序列，外源基因连接，a，39，(2)转基因生物利用DNA分子杂交，克隆、检测包括目标基因在内的细菌的方法：DNA分子杂交技术，a，41，DNA分子杂交示意图，利用一定的技术手段定位两种生物的单链DNA分子，如果这两条相互补充的碱基序列，互补的碱基序列结合在一起，形成混合的双链区域； 在没有互补碱基序列的部分，仍然是两条玻璃单链。，a，42，2。检查目标基因的表达，检测目标基因是否已将mrna检测目标基因翻译成蛋白质，显示目标基因已成功表达，特定性状的表达，特征检测，a，43，(3)鉴定(个体生物学水平):(1)检测目标基因是否已转录mRNA，() 如果出现混合带，则目标基因为mRNA，a，44