维生素类药物的分析课件

1、维生素类药物的分析 The Analysis of Vitamines,维生素是维持人体正常生理机能所必需的生物活性物质。 如果人体缺少某种维生素，就会引起维生素缺乏症，而影响人体的正常生理机能。 例如: VA 缺乏夜盲症 VB1缺乏脚气病,概 述,按溶解性分类,VA、VD、VE、VK等,B族（VB1、VB2等）、VC 、烟酸、叶酸、泛酸等,脂溶性维生素：,水溶性维生素：,第一节 维生素A的分析,一结构与性质 1 化学结构,R=H VA醇 VA1 R= COCH3 VA醋酸酯 R= COC15H31 VA棕榈酸酯,（1）环己烯+共轭多烯侧链； （2）天然VA侧链为全反式； （3）天然来源主要是

2、鱼肝油，为醋酸酯，棕榈酸酯等,目前多由人工合成。,结构特点：,a. 紫外吸收 具有共轭多烯侧链紫外吸收。 最大吸收波长在325328nm，随VA存在状态以及所用的溶剂，最大吸收波长的位置有所不同。,2 .性质,不溶于水， 溶于乙醚，氯仿，异丙醇，环己烷，脂肪和油。,b.溶解性：,共轭多烯侧链性质非常活泼.,c. 不稳定性,C,H,2,O,H,O,C,H,2,O,H,O,C,H,O,C,O,O,H,维生素A的氧化产物（无生物活性）：,环氧化物,维生素A醛,维生素A酸,or,d.与SbCl3作用 （Carr-Price反应） 维生素A在氯仿中与SbCl3试剂作用，产生不稳定的蓝色。 鉴别 含量测定

3、,1. 三氯化锑反应,二. 鉴别试验,维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液中即显蓝色，渐变成紫红色。,2. 紫外吸收光谱 VA的无水乙醇溶液在326nm有最大吸收。,确认醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯， 例：VA和其标准品用环己烷溶解 展开剂：环己烷乙醚（80：20） 板：硅胶G 显色：SbCl3T.S. Rf： VA 醇 0.08 VA 醋酸酯 0.41 VA棕榈酸酯 0.75,3、TLC,三含量测定,1、概述 共轭多烯的结构具有特征的紫外吸收。 相关物质结构相似,维生素A最大吸收波长附近也有吸收，对测定有影响。 Morton和Stubbs等人提出了三点校正法。,紫外分光光度法三点校正法,三

4、点校正法:,在三个波长处测得吸收度，根据校正公式计算含量，故称为“三点校正法”。,2. 原理（根据、假定）,1、物质对光的吸收具有加和性，即,2、维生素A中的无关吸收在310340nm范围内近似一条直线。,效价为维生素A1的40%，max345350nm,3. 相关物质的吸收,a. 维生素A的衍生物,维生素A2 去氢维生素A,效价低于维生素A1，max385390nm,b. 维生素A的氧化产物,维生素A3 去水维生素A,c. 合成时的中间体,侧连有4个双键应有24 （16）种异构体。目前，包括维生素A在内，共发现有6种异构体。它们是：,e. 维生素A异构体,d. 鲸醇,维生素A醇的二聚体，没有

5、生物活性,新维生素Aa,新维生素Ab,新维生素Ac,异维生素Aa,异维生素Ab,维生素A,1：维生素A的max 2、3：分别在1两侧,4、 三个波长的选择方法,等波长差法：两个波长分别在1两侧12nm处，即,1=328nm; 2 =316nm; 3=340nm,VA在这两个波长下的吸光度应该等于1下的吸光度的 ，即,1=325nm; 2 =310nm; 3=334nm,等吸光度法：,5. 方法,Ch.p收载有2种方法。,第一法（适用于酯式维生素A的测定）,a. 操作方法,规定波长：300、316、328、340和360,max不在326329nm，第二法测定。,b. 计算方法,（1）最大吸收波

6、长确认,max 在326329nm，第一法测定。,（2）计算吸收度比及比值差,首先要计算吸收度比值。,然后计算吸收度的比值差。,（3）计算校正吸收度,吸收度校正公式：,（4）换算因数,定义：每一个 数值所相当的效价。,1IU=0.344g全反式维生素A醋酸酯， 1g的维生素A醋酸酯就相当于,维生素A醋酸酯,维生素A醋酸酯,：,1530（环己烷、 328 ）,消除植物油干扰：适合VA醇,第二法（皂化法）：,在波长300、310、325、334nm处测定吸收度，找出max 。,1g维生素A醇所含 VA的国际单位数=,1830,b.计算,c.校正公式 A325（校）=6.815A325-2.555A

7、310- 4.260A334,d. 判断,max不在323327nm或A300/A325大于0.73，先纯化后再测定。,max在323327nm之间且A300/A325小于或等于0.73 ，则：,（1）VA遇光易氧化变质，操作应半暗室中快速进行，所用试剂不得含氧化性物质，以防VA 受紫外线或氧化性物质破坏。,注意事项,（2）用三校正法测定时，一点在max处，其余两点均为吸收曲线的上升和下降陡坡处。对波长的正确性要求严格。340nm处，若波长误差0.5nm，可影响结果-3.12.07%。所以测定时所用仪器的波长读数应注意，必要时应作标准对照。,第二节 维生素B1的分析,一、化学结构与性质 1.结

8、构：,氯化4-甲基-3（ 2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基）甲基-5-（2-羟乙基）噻唑嗡离子盐酸盐,a.氨基嘧啶次甲基噻唑环季铵化合物 b.碱性基团： 嘧啶环上的氨基 噻唑环上的季铵 与酸成盐,2. 结构特点：, 硫色素反应 VB1噻唑环在碱性条件下可被铁氰化钾K3Fe(CN)6等一些氧化剂氧化后，与嘧啶环上的氨基缩合成具有荧光的硫色素。,3. 性质：, 加碱分解后与醋酸铅反应 VB1与NaOH试液一起加热，分解产生NaS，可与PbAc2反应生成PbS的黑色沉淀。, 沉淀反应 VB1的含氮杂环，能和生物碱沉淀试剂反应产生沉淀。 如： VB1与硅钨酸反应可生成组成一定的沉淀。重量法测定VB1含量

9、。, 硫胺显碱性 具有两个碱性基团:嘧啶环上的氨基、噻唑环上的季铵可以和酸成盐。如：盐酸硫胺、硝酸硫胺,维生素B1的水溶液显氯化物的特征反应。 紫外吸收特性,二. 鉴别试验,1. 硫色素荧光反应,可与某些生物碱沉淀试剂生成组成恒定的沉淀 如：与碘化汞钾产生淡黄色沉淀 与碘生成红色沉淀 与硅钨酸生成白色沉淀 与苦味酸生成扇形白色结晶,2、沉淀反应：,3、加碱分解后与醋酸铅反应,非水滴定法（Ch.P所用方法） 硅钨酸重量法 银量法 硫色素荧光法 紫外分光光度法 比色法 络合滴定法,三. 含量测定,1、原理： VB1分子中含有已成盐的伯胺和季铵基团，在非水溶液中，在醋酸汞存在下，均可被高氯酸滴定。

10、2、方法： 溶剂：冰醋酸（醋酸汞） 指示剂：喹哪定红- 亚甲蓝混合指示液 滴定剂：高氯酸 终点：天蓝色 T=16.86mg/ml,（一）非水溶液滴定法（ Ch.P VB1原料药）,VB1分子中具有共轭双键结构。,（二）紫外分光光度法（ Ch.P VB1制剂）,（三）硫色素荧光法,硫色素反应所形成的硫色素与VB1的浓度成正比，可用于含量测定。,第三节 维生素C的分析,一. 化学结构,二稀醇,内酯,手性碳,维生素C分子中具有2个手性C原子，具有4种光学异构体。 其中生理活性最强的是L（+）-抗坏血酸,结构特点：, 具有内酯结构。 碱性下可水解。, 具有烯二醇基。 还原性，能够被氧化成去氢抗坏血酸。

11、 酸性,能与碱成盐。,D(-)-异抗坏血酸,L(+)-异抗坏血酸,L(+)-抗坏血酸,D(-)-抗坏血酸,1. 酸性 烯二醇结构酸性。 C3-OH， pKa=4.17(共轭效应)酸性强， C2-OH，pKa=11.57(邻位羰基)酸性极弱， 表现为一元酸。能与NaHCO3作用生成钠盐。,二性质与鉴别试验,2.还原性,（烯二醇基）,去氢抗坏血酸,3、糖类的反应,VC,HCl,-CO2,水解,-H2O,戊糖,糠醛,吡咯,蓝色,4. 荧光反应,5. UR,BP,三、杂质检查,1、溶液的澄清度与颜色检查,内酯结构,水解,-CO2,糠醛,有色聚合物,Ch.P（2005） VC 原料、片剂、注射液,2、铁

12、、铜离子的检查,Ch.P（2005） VC 原料,四、含量测定,1. 碘量法,原理,操作,终点颜色：无色蓝色 1ml 0.1mol/L碘液1ml相当于8.806mg C6H8O6,反应条件： 酸性（使VC在空气中氧化速度减慢 ） 溶剂： 新沸放冷的水（减少水中溶解氧的影响 ）。,讨论,还原性物质的影响及排除 VC注射液中常加有亚硫酸盐如NaHSO3作为抗氧剂。 排除：加入丙酮或甲醛,+,原理： 在酸性下2,6-二氯吲哚酚 氧化型是红色的;还原型是无色的 酸性下直接用2,6-二氯吲哚酚滴定，用滴定剂自身的颜色变化指示终点，不需要另外的指示剂。,2、 2,6-二氯吲哚酚滴定法,终点的颜色是溶液由无

13、色变为红色。,氧化型（红色）,还原型（无色）,+,+,一化学结构与性质,第五节 维生素E的分析,1、硝酸反应 本品，无水乙醇溶解，加硝酸，75加热约15分钟，显橙红色。 2、水解后氧化反应 本品，在碱性条件下水解，得-生育酚，在联吡啶和三氯化铁试液的作用下，反应产生血红色配离子。,二、鉴别试验,3、UV吸收 VE的0.01%无水乙醇液： max=284nm； min=254nm 4、三氯化铁反应,检查游离生育酚: 取0.1g样品，按铈量法用Ce(SO4)2(0.01mol/L)滴定，以二苯胺为指示剂，消耗Ce(SO4)2液不得超过1.0ml。,三、杂质检查,1、色谱条件及系统适应性试验 色谱柱：2m4mmI.D.硼硅玻璃柱， 内装硅藻土（80100目） 固定相：硅酮（OV-17） 载气：N2，,四、含量测定,气相色谱法,柱温：265 内标：正三十二烷 检测器：F