维生素C注射剂的制备

1、抗坏血酸注射液的处方设计摘要：采用正交试验法，通过对抗坏血酸注射液制剂工艺的优选，科学地选择原料药物（供注射用原料及质量要求）、附加剂（品种、用量）及生产条件和生产成本统筹兼顾。从制剂的稳定性和内毒素检查两个主要方面综合考虑，确定科学的处方和制备工艺。关键词：抗坏血酸注射液；正交试验法；稳定性；热原检查；处方；质量控制 1、 抗坏血酸简介1.1、理化性质图一、维生素CIUPAC名：2,3,4,5,6-五羟基-2-己烯酸-4-内酯。本品为无色晶体，熔点：190 - 192，紫外吸收最大值：245nm，水溶性，比旋度：+20.5至+21.5，酸性，具有较强的还原性，加热或在溶液中易氧化分解，在碱性

2、条件下更易被氧化，为己糖衍生物。1 1.2、药理毒理作用维生素C参与氨基酸代谢、神经递质的合成、胶原蛋白和组织细胞间质的合成，可降低毛细血管的通透性，加速血液的凝固，刺激凝血功能，促进铁在肠内吸收，促使血脂下降，增加对感染的抵抗力，参与解毒功能，且有抗组胺的作用及阻止致癌物质(亚硝胺)生成的作用。每日l-4g，可引起腹泻、皮疹、胃酸增多、胃液反流，有时尚可见泌尿系结石、尿内草酸盐与尿酸盐排出增多、深静脉血栓形成、血管内溶血或凝血等，有时可导致白细胞吞噬能力降低，每日用量超过5g时，可导致溶血，重者可致命。孕妇应用大量时，可产生婴儿坏血病。21.3、抗坏血酸注射剂药效学研究蛋白结合率低。少量贮藏

3、于血浆和细胞，以腺体组织内的浓度为最高。肝内代谢。极少数以原形物或代谢物经肾排泄，当血浆浓度l4g/ml时，尿内排出量增多。可经血液透析清除。2 2、 处方筛选实验证明，抗坏血酸注射液的色泽变化比含量下降敏感得多，注射剂在贮存或加热过程中，当透光率降至80%左右时，含量一般仍维持在95%左右，因而在筛选处方时以透光率作为考察指标。 本文采用初筛和正交试验法对稳定剂的种类和用量、溶液的PH以及制剂工艺条件作了较大量的筛选工作，经过多次重复和对比试验，最后拟定以下处方。配制的抗坏血酸注射液经过滤后，在CO2气流下灌封于2ml曲颈安瓿中，流通蒸气灭菌30分钟后备用。33、处方设计3.1、处方4 维生

4、素C 50.0g 碳酸氢钠 49.0g 焦亚硫酸钠 2.0g L-半胱氨酸盐酸盐 1.0g EDTA- Na2 0.05g 注射用水 加至1000ml 制成2ml/支，共500支。3.2、处方分析维生素C ：主药；碳酸氢钠： pH调节剂；焦亚硫酸钠：抗氧剂；L-半胱氨酸盐酸盐：抗氧剂；EDTA- Na：络合剂；注射用水： 溶剂。3.2.1、维生素C分子中有烯二醇式结构，显强酸性，注射时刺激性大，产生疼痛，故加入碳酸氢钠调节PH，以避免疼痛，并增强本品稳定性。3.2.2、本品易氧化水解，原辅料的质量，特别是维生素C原料和碳酸氢钠，是影响维生素C注射液的关键。空气中的氧气、溶液PH和金属离子对其稳

5、定性影响较大。因此处方中加入抗氧剂、金属离子络合剂及pH调节剂，工艺中采用充惰性气体等措施，以提高产品的稳定性。但实验表明，抗氧剂只能改善本品色泽，对制剂含量变化几乎无作用，亚硫酸盐和半胱氨酸对改善本品色泽作用显著。4 4、抗坏血酸稳定性研究4.1、.不同pH值对抗坏血酸注射液质量的影响： 称取抗坏血酸 7.5g ，配成5溶液150ml，取样进行含量测定。余液分成4份、分别用化学纯碳酸氢钠（固体）调pH值原液4.0、6.0、8.0，然后分别用20ml注射器分装于2ml安瓿中，熔封，编号放入沸水中，按表1观察色泽变化及测定含量。 表1. pH对抗坏血酸注射液稳定性的影响样品号 PH 煮沸后不同时

6、间的色泽变化 含 量 含量下降比例 20 40 60 0 60 （） 1 原液 2 4 3 6 4 84.2、抗氧剂的作用 称取抗坏血酸 5.50g ，加注射用水100ml溶解，用NaHCO3(固体)调节pH至5.86.2，测定含量后，分成三份，第一份加入0.1gNaHSO3，第二份加0.5%半胱氨酸，第三份作对照。将上述溶液分别灌封于2ml安瓿中，标记、煮沸、观察颜色变化及含量测定，按下表记录结果： 表2.抗氧剂的作用 样品号 抗氧剂 煮沸后不同时间色泽变化 20 40 60 1 NaHSO3 2 半胱氨酸 3 -4.3、金属离子的影响及金属络合剂的作用 微量的金属离子对维生素c注射液的主成

7、分的分解有显著的催化作用。其催化作用顺序为：Cu2+Go2+Mn2+Zn2+Fe2+，以Cu2+最为显著5称取抗坏血酸 8g ，加注射用水62ml，溶解后，用碳酸氢钠（固体）调pH5.86.2，分别精密量取10ml，放入25ml容量瓶中，共分六份，分成三组（每组2份）按组号顺序分别加入 0.0001M 硫酸铜溶液1ml、0.04ml、0ml（用刻度吸管精取），将其中相同一组各取出一份，再分别加入5EDTA-2Na溶液4ml，最后加注射用水至25ml，摇匀，取其中1份立即测含量，代表原始含量。然后分别灌封于2ml安瓿中，标记放入沸水浴中观察，按表3记录： 表3金属离子的影响及金属络合剂的作用样品

8、号 CuSO4 EDTA-2Na 煮沸后不同时间的色泽变化 含量 含量下降比例 用量 用量 20 40 60 0 60 （） 1 1ml 0ml 1ml 4ml 2 0.04ml 0ml 0.04ml 4ml 3 0ml 0ml 0ml 4ml4.4、空气中氧的含量对抗坏血酸注射液质量的影响称取抗坏血酸 5.0g 用新鲜煮沸放冷的注射用水配成5的溶液100ml，用碳酸氢钠（固体）调pH5.86.2。取样测定含量后，将溶液分成三份，第一份于2ml安瓿中灌装1ml溶液；封口，标记；第二份于2ml安瓿中灌装2ml溶液，封口标记；第三份于2ml安瓿中灌装2ml溶液通入CO2（约5秒钟）后立即封口，标记

9、，然后放入水浴锅内煮沸，按表4观察色泽变化并测定含量： 表4. 氧含量对抗坏血酸稳定性的影响样品号 条件 煮沸后不同时间的色泽变化 含 量 含量下降比例 20 40 60 0 60 （） 1 1ml 2 2ml 3 2ml+CO2 5、内毒素检查6 5.1试验前的处理试验中用到的试管、西林瓶、加样头等玻璃用具用硫酸洗液浸泡12h后，用清水洗净，再放入超声波清洗器用蒸馏水清洗，最后用蒸馏水冲洗三遍并用铝箔纸包好放入烤箱，在250的温度下烘烤1h。5.2建立标准曲线5.2.1稀释内毒素工作标准品取试剂盒内效价为100Eu/ml工作标准品1支，在100级净化工作台中开启（先用砂轮画痕，再用酒精棉球将

10、瓶颈擦净后开启，以后这类瓶开启均按此法）加入1ml细菌内毒素检查用水（超纯水）溶解，然后用封口膜封闭瓶口，在混旋器上混合15min，混旋后得到100Eu/ml的内毒素工作标准品溶液。按十倍稀释法制备内毒素工作标准品浓度梯度，使其最终内毒素浓度分别为10Eu/ml、1Eu/ml、0.1Eu/ml、0.01Eu/ml稀释系列。5.2.2制备鲎试剂溶液取出鲎试剂，分别加入0.1ml细菌内毒素检查用水，放置3min，待其充分溶解后，将它们混合在一支试管内轻轻摇匀，待用。 取出10支定量专用小试管，分别加入0.1ml鲎试剂。5.2.3 加样 将稀释好的内毒素标准品溶液加入鲎试剂中，每试管加0.2ml，每

11、个浓度加2管，加完后轻轻摇匀并用封口膜将试管口封好。5.2.4 反应 将试管按顺序插到反应器中，进行反应，在反应的同时可以观察全部反应曲线。5.2.5 数据处理 反应结束后，保存数据，将反应不正常的点剔除，生成标准曲线，相关系数r=-0.9932(r-0.98)。5.2.6 制作标准曲线的结果分析6、质量控制7【性状】 本品为无色至微黄色的澄明液体。【鉴别】 （1）取本品适量，加水制成1ml含维生素C 10mg的溶液，取4ml，加0.1mol/L的盐酸溶液4ml，混匀，加0.05%亚甲蓝乙醇溶液4滴，置40水浴中加热，3分钟内溶液应由深蓝色变为浅蓝色或完全褪色。（2） 取本品适量，加水制成1m

12、l含维生素C 1mg的溶液为供试液；另取维生素C对照品适量，加水溶解制成1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录 B）试验，吸取上述两种溶液各2l，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯乙醇水（5：4：1）为展开剂，展开后，晾干，立即（1小时内）置紫外光灯（254nm）下检视，供试品溶液所显主斑点的颜色和位置应与对照品溶液的主斑点相同。（3）取本品4mL，加二氯靛酚钠试液12滴，试液颜色即消失。8 【检查】 pH值 取本品1瓶，按2010年版中国药典附录VI H进行测定，pH应为50 70。颜色 取本品，配制成每1mL含抗坏血酸50mg的溶液，按紫外一可见分光光度法（附

13、录IV A）进行测定。于420nm波长处吸收度(A)不得超过006。草酸 取本品，加水稀释成每1ml中含维生素C 50mg 的溶液，精密量取5ml，加2mol/L醋酸溶液1ml，加氯化钙试液0.5ml，摇匀，放置1小时，作为供试品溶液。精密称取草酸75mg，置500ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，加2mol/L醋酸溶液1ml，加氯化钙试液0.5ml，摇匀，放置1小时，作为对照溶液。，供试品溶液产生的浑浊不得浓于对照溶液（0.3%）。细菌内毒素9 取本品，依法检查（附录 E），每1ml中含内毒素的量应小于0.020EU。热原 取每1mL中含抗坏血酸25mg(以无水物计算)的本品

14、适量，按热原检查法进行检查，剂量按家兔体重每lkg注射2mL。5批样品均符合规定。装最差异、可见异物、不溶性微粒、无菌检查 均按2005年版中国药典(二部)相关内容进行检查。5批样品均符合规定。【含量测定】 （1）精密量取本品适量（约相当于Vc0.2g），加水15ml与丙酮2ml，摇匀，放置5分钟，加稀醋酸4ml与淀粉指示液1ml，用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色并持续30秒不褪色。每毫升碘滴定液（0.05mol/L）相当于8.806mg的C6H8O6.（2）色谱柱为Phenomenex luna氨基柱(46 mmx250 mm，5 Ixm)；流动相为磷酸二氢钾液和乙腈的混合

15、液(体积比1：1)，浓度为002 molL，pH由磷酸调至30；柱温为25 ；系统流速为10 rnYmin；检测波长为245 nm。进样量：20L。对照品：精密称取010 g维生素C对照品，用流动相溶液溶解并定容至100 ml，得1 ragm1的储备液，避光保存108、参考文献1郑虎.药物化学第六版M.北京：人民卫生出版社，2008：425.2山西普德药业有限公司.注射用维生素C说明书Z.3郭英喜，陈小林，赵荣伟等.抗坏血酸注射液新处方的筛选及稳定性研究J.华西医大学报1996,27（3）.4崔福德.药剂学M.北京:人民卫生出版,2008:85.5安登魁药物分析第2版M.北京：人民卫生出版社，1989： 175-176.6宁康健，洪占丽，吕锦芳.维生素C注射液细菌内毒素含量的定量检测J.安徽技术师范学院学