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DB41DB41/T1525—2018猪圆环病毒Ⅱ型实时荧光PCR检测方法2018-01-03发布2018-04-03实施河南省质量技术监督局发布I1猪圆环病毒Ⅱ型实时荧光PCR检测方法2.1.2酚/氯仿/异戊醇混合液(25:24:1)、0.01mol/L（pH7.2）的磷酸盐缓冲），2.1.3消化液Ⅱ、阳性对照、阴性对照（见附录A），置-20℃保存。实时荧光定量PCR仪，高速冷冻离心机（12000×g以上二级生物安全柜，恒温水浴锅，2℃~，－采集疑似PCV2感染猪的肺脏、肝脏、肾脏、脾脏用无菌注射器自耳静脉或前腔静脉采集血液3mL～5mL，待血清析出后直接吸取至无菌Eppend管中，编号备用；用无菌注射器先吸入抗凝剂（阿氏液）2mL～3mL2采集的样品密封后，采用保温壶或保温桶加冰密封，尽快运送到实验室。样品在2℃~8℃条件上清液，将无菌离心管倒置于吸水纸上，吸干液体；不同无菌离心管应在吸3在质量控制标准成立的前提下，样品Ct值＞32.0或无，且无特定扩增曲线，判定为PCV2核酸阴在质量控制标准成立的前提下，样品29.0＜Ct值≤32.04试剂的配制A.60.01mol/L（pH7.2）的磷酸盐缓冲）：A.6.30.01mol/LPBS的配制：A液14mL，565'-FAM-TTACCAGCAATCAGACCCCGTT7

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