分子生物学常用技术

一、单项选择题

四、复习自测试题

(-)名词解释

1.DNA克隆或重组DNA(DNAcloningorrecombinantDNA)

2.限制性核酸内切酶(restrictionendonuclease)

(-)选择题

A型题

I类题：

1.在分子生物学领域，分子克隆主要是指

A.DNA的大量复制B.DNA的大量转录C.DNA的大量剪切

D.RNA的大量反转录E.RNA的大量剪切

2.在分子生物学领域，重组DNA又称

A.酶工程B.蛋白质工程C.细胞工程

D.基因工程E.DNA工程

II类题：

1.在基因工程中通常所使用的质粒存在于

A.细菌染色体B.酵母染色体C.细菌染色体外

D.酵母染色体外E.以上都不是

2.将PstI内切醐切割后的目的基因与用相同内切酶切割后的裁体DNA连接属

A.同聚物加尾连接B.人工接头连接C.平端连接

D.粘性末端连接E.非粘性末端连接

B型题

A.抗药性选择B.分子杂交选择C.RNA反转录

D.免疫学方法E.体外翻译

L用于鉴定是否有质粒转人受体菌的一般方法是

2.利用鉴定转化子细胞是否含目的基因的常用方法是

X型题

I类题：

1.可用作克隆载体的DNA分子有

A.染色体DNAB.病毒DNAC.细菌DNAD.噬菌体DNA

2.重组DNA基本过程包括

A.目的基因的获取B.克隆载体的构建

C.目的基因与载体的拼接D.重组分子导入受体菌

II类题：

1.组成PCR反应体系的有

A.RNA引物B.TaqDNA聚合酶C.RNA聚合酶D.DNA模板

2.对于重组体的筛选，属非直接选择法的有

A.免疫化学法B.Southern印迹C.酶联免疫法D.标志补救

(三)填空题

1.基因克隆的基本过程包括、、、、—

2.基因转移的四种方式包括、、、o

(四)简答题

1.DNA重组的类型。

2.基因工程的步骤。

五、习题参考答案

（-）名词解释

1.应用酶学的方法，在体外将目的基因与载体DNA结合成-具有自我复制能力的DNA

分子——复制子，继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞，再

进行扩增，提取获得大量同一DNA分子的过程。DNA克隆又称基因克隆或重组DNA。

2.存在与细菌体内，识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一

类内切酶。限制性内切的分三类，重组DNA技术中常用的是H类酶。

（二）选择题

A型题

I类

1.A2.D

II类

1.C2.D

B型题

1.A2.B

X型题

I类

l.BD2.ABCD

II类

l.ABD2.AC

（三）填空题

1.目的基因的获取；克隆载体的选择与构建；外源基因与载体的切割与连接；

重组DNA导入受体细胞；重组体的筛选

2.接合；转化；转导；细胞融合

（四）简答题

1.同源重组；接合作用；转化作用；转导作用；位点特异的重组；转座

2.重组DNA技术操作过程可形象归纳为

分•分离目的基因

切

•限制酶切目的基因与载体

接

•拼接重组体

转

・转入受体菌

筛

筛选重组体

习题精选

基因工程的基本内容

一、选择题

1.科学家们经过多年的努力，创立了一种新兴的生物技术——基因工程，实施该工

程的最终目的是（）

A.定向提取生物体DNA分子

B.定向对DNA分子进行人工“剪切”

C.定向改造生物的遗传性状

D.在生物体外对DNA分子进行改造

2.下列哪项不是基因工程中用来运载目的基因的载体？（）

A.细菌质粒B.噬菌体

C、动植物病毒D.细菌核区的DNA

3.基因工程中，常用的细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞，原因是（）

A.结构简单，操作方便

B.繁殖速度快

C.遗传物质含量少

D.性状稳定，变异少

4.质粒是基因工程中最常用的运载体，它的主要特点是（）

①能自主复制②不能自主复制③结构很小

④蛋白质⑤环状RNA⑥环状DNA

⑦能“友好”地“借居”

A.①③⑤⑦B.②④⑥

C.①③⑥⑦D.②③⑥⑦

5.在基因工程中用来修饰改造生物基因的工具是（）

A.限制酶和连接酶B.限制酶和水解酶

C.限制酶和运载体D.连接酶和运载体

6.有关基因工程的叙述正确的是（）

A.限制性内切酶只在获得目的基因时才用

B.重组质粒的形成在细胞内完成

C.质粒都可作运载体

D.蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料

7.不属于目的基因与运载体结合过程的是（）

A.用一定的限制酶切割质粒露出粘性末端

B.用同种限制酶切割目的基因露出粘性末端

C.将切下的目的基因的片段插入到质粒切口处

D.将重组DNA导入受体细胞中进行扩增

8.科学家将含有人的抗胰蛋白酶基因的DNA片段注射到羊的受精卵中，该受

精卵发育的羊能分泌含抗胰蛋白酶的奶。这一过程涉及（）

①DNA按照碱基互补配对原则自我复制

②DNA以其条链为模板合成RNA

③RNA以自身为模板自我复制

④按照RNA密码子的排列顺序合成蛋白质

A.①③B.③④

C.①②③D.①②④

9.实施基因工程第步的•种方法是把所需的基因从供体细胞内分离出来，这要利

用限制性内切酶。从大肠杆菌中提取的一种限制性内切酶ECORL能识别DNA分子中的

GAATTC序列，切点在G与A之间。这是应用了酶的（）

A.高效性

B.专一性

C.多样性

D.催化活性受外界条件影响

10.基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤中，不

进行碱基互补配对的步骤是（）

A.人工合成目的基因

B.目的基因与运载体结合

C.将目的基因导入受体细胞

D.目的基因的检测和表达

11.下列有关基因工程技术的叙述中正确的是（）

A.重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体

B.所有的限制酶都只能识别同一种特定的核甘酸序列

C.选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快

D.只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达

12.下列说法正确的是（）

A.DNA连接酶最初是从人体细胞中发现的

B.限制酶的切口一定是GAATTC碱基序列

C.质粒是基因工程中惟一用作运载目的基因的运载体

D.利用运载体在宿主细胞内对目的基因进行大量复制的过程可称为“克隆”

13.下列关于限制酶的说法不正确的是()

A.限制酶广泛存在于各种生物中，微生物中很少分布

B.一种限制醐只能识别一种特定的核甘酸序列

C.不同的限制酶切割DNA的切点不同

D.限制酶的作用是用来提取目的基因

二、非选择题

1.番茄在运输和贮藏过程中，山于过早成熟而易腐烂。应用基因工程技术，通过抑

制某种促进果实成熟激素的合成能力，可使番茄贮臧时间延长，培育成耐贮藏的番茄新品

种，这种转基因番茄已于1993年在美国上市。请回答：

(1)促进果实成熟的重要激素是o

(2)在培育转基因番茄的基因操作中，所用的基因的“剪刀”是，基因的''针

线”是，基因的“运输工具”是。

(3)与杂交育种、诱变育种相比，通过基因工程来培育新品种的主要优点

是、和。

2.科学家通过基因工程培育抗虫棉时，需要从苏云金芽抱杆菌中提取出抗虫基因，“放

入”棉的细胞中与棉的DNA结合起来并发挥作用，请回答下列有关问题：

(1)从苏云金芽泡杆菌中切割抗虫基因所用的工具是，此工具主要存在

于中，其特点是。

(2)苏:W芽胞杆菌一个DNA分子上有许多基因，获得抗虫基因常采用的方法是

“鸟枪法”。具体做法是：用将苏云金芽抱杆菌的切成许多片段，然后将这

些片段，再逾转入不同的受体细胞，让它们在各个受体细胞中大量，

从中找出含有目的基因的细胞，再用一定的方法把分离出来。

(3)进行基因操作一般要经过的四个步骤是：、、、。

3.干扰素是治疗癌症的重要物质，人血液中每升只能提取0.05mg干扰素，因而其价

格昂贵，平民百姓用不起。但美国有一家公司用遗传工程方法合成了价格低廉、药性一样

的干扰素，其具体做法是：

(1)从人的淋巴细胞中提取能指导干扰素合成的，并使之与一种叫质粒的DNA

结合，然后移植到酵母菌内，从而让酵母菌来。

(2)酵母菌能用方式繁殖，速度很快，所以能在较短的时间内大量生产。

利用这种方法不仅产量高，并且成本较低。

(3)科学家陈炬在这方面也做出突出贡献，他成功地把人的干扰素基因嫁接到了烟

草的DNA分子上，其物质基础和结构基础是。

(4)烟草具有了抗病毒能力，这表明烟草体内产生了，由此可见，烟草和人体

合成蛋白质的方式是，从进化的角度来考虑，证明了人和植物的起源是。

答案

基础训练

一、选择题

1.C2.D3.B4.C5.A6.D7.D8.D9.B10.C11.C12.D13.A

二、非选择题

1.(1)乙烯

(2)限制性内切酶DNA连接酶运载体

(3)目的性强育种周期短克服远缘杂交的障碍

8.(1)限制性内切酶微生物一种限制酶只能识别一种特定的核甘酸序列，并在特

定的位点切割

(2)限制性内切酶DNA分别与运载体结合运载体复制带有目的基因的DNA

片断

(3)提取目的基因目的基因与载体结合将目的基因导入受体细胞目的基因的

检测与表达

3.(1)干扰素基因合成干扰素

(2)出芽生殖干扰素

(3)都是脱氧核甘酸组成的，都具有双螺旋结构

(4)干扰素相同的相同的

这是/yixueyuan/bio/word/14-genetic%20engineering.doc的HTML

档。

Google在网路漫游时会自动将档案转换成HTML网页来储存。

基因重组与基因工程

一、选择题

1.F因子从•个细胞转移至另一个细胞的基因转移过程称为：

转化

A.

导

转

B.

染

转

C.

座

转

合

D.接

E.

2.通过自动获取或人为地供给外源DNA使受体细胞获得新的遗传表型，称为：

A.转化

B.转导

C.转染

D.转座

E.接合

3.溶原菌是指：

A.整合了噬菌体基因组的细菌

B.整合了质粒基因组的细菌

C.含有独立噬菌体基因组的细菌

D.含有独立质粒基因组的细菌

E.含有独立噬菌体和质粒基因组的细菌

4.由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为：

A.转化

B.转导

C.转染

D.转座

E接合

5.由整合酶催化、在两个DNA序列的特异位点间发生的整合称为：

A.位点特异的重组

B.同源重组

C.基本重组

D.随机重组

E.人工重组

6.发生在同源序列间的重组称为：

A.位点特异的重组

B.非位点特异的重组

C.基本重组

D.随机重组

E.人工重组

7.限制性核酸内切酶切割DNA后产生:

A.5磷酸基和3羟基基团的末端

B.3磷酸基和5羟基基团的末端

C.5磷酸基和3磷酸基团韵末端

D.5羟基和3羟基基团的末端

E.以上都不是

8.可识别并切割特异DNA序列的称：

A.限制性核酸外切酶

B.限制性核酸内切酶

C.非限制性核酸外切酶

D.非限制性核酸内切酶

E.DNAB

9.限制酶的识别顺序通常是：

A.聚腺甘酸

B.聚胞苜酸

C.RNA聚合酶附着点

D.回文对称序列

E.甲基化“帽”结构

10.限制酶:

A.从噬菌体中提取而得

B.可将单链DNA任意切开

C.可将双链DNA任意切开

D.可将双链DNA特异切开

E.不受DNA甲基化影响.

11.限制酶的作用特性不包括：

A.在对称序列处切开DNA

B.同时切开双链DNA

C.DNA两链的切点常在同一位点

D.前切后的DNA片段多具有粘性互补末端

E.酶辨认的碱基一般为4—6个

12.限制酶的特点不包括：

A.只识别一种核甘酸序列

B.其识别不受DNA来源的限制

C.不同生物的DNA经相同限制能切割后产生相同末端

D.对双链和单链DNA同样切割

E.同一限制酶在-DNA分子上可有数个切点

13.关于限制酶的叙述错误的是：

A.能识别DNA特定的碱基顺序并在特定的位点切开DNA

B.切割点附近的碱基顺序一般呈回文结构

C.它能专一降解经甲基化修饰的DNA

D.是重组DNA的主要工具酶

E.主要从细菌中获得

14.在重组DNA技术中催化形成重组DNA分子的是DNA的:

A.聚合酶

B.解链酶

C.连接酶

D.拓扑酶

E.内切酶

15.在重组DNA技术领域所说的分子克隆是指：

A.建立单克隆抗体

B.建立多克隆抗体

C.构建重组DNA分子

D.无性繁殖DNA-

E.有性繁殖DNA

16.无性类殖依赖DNA载体的最基本性质是：

A.青霉素抗性

B.卡那霉素抗性

C.自我复制能力

D.自我转录能力

E.自我表达能力

17.重组DNA技术领域常用的质粒DNA是：

A.细菌染色体DNA的一部分

B.细菌染色体外的独立遗传单位

C.病毒基因组DNA的一部分

D.真核细胞染色体DNA的一部分

E.真核细胞染色体外的独立遗传单位

18.pBR322是：

A.天然的酵母质粒

B.经人工改造的酵母质粒

C.天然的大肠杆菌质粒

D.经人工改造的大肠杆菌质粒

E.经人工改造的噬菌体

19.基因工程的操作程序可简单地概括为：

A.载体和目的基因的分离、提纯与鉴定

B.分、切、接、转、筛

C.将重组体导人宿主细胞，筛出含目的基因的阳性株

D.将载体和目的基因接合成重组体

E.限制酶的应用

20.基因工程的基本过程不包括：

A.载体和目的基因的分离

B.限制酶的切割

C.DNA重组体的形成及转化

D.重组体的筛选与鉴定

E.重组体的序列分析

21.理想的基因工程载体应：

A.分子尽可能大

B.有适宜的限制酶切割位点

C.含有多个耐药性基因

D.不易在宿主细胞间转移

E.能整合于宿主细胞DNA,并随其复制

22.下列哪一种物质不能作为基因（克隆）载体：

A.质粒

B.入噬菌体

C.M13噬菌体

D.病毒RNA

E.逆转录病毒DNA

23.用于转化哺乳类动物细胞的常用载体是：

A.质粒

B.入噬菌体

C.M13噬菌体

D.逆转录病毒DNA

E.大肠杆菌基因组

24.关于建立cDNA文库的叙述，错误的是：

A.从特定组织中提出mRNA

B.将特定细胞的DNA用限制酶切割后，克隆到噬菌体或质粒中

C.用逆转录酶合成mRNA的对应单股DNA

D.用DNA聚合酶，以单股DNA为模板合成双链DNA

E.加SAM,以使新生的DNA双链甲基化

25.cDNA文库包括该种生物：

A.某些蛋白质的结构基因

B.所有蛋白质的结构基因

C.所有结构基因

D.结构基因与不表达的调控区

E.内含子和调控区

26.某限制性内切核酸酶切割5...GGGGGGAATTCC...3序列后产生:

A.5突出末端

B.3突出末端

C.5及3突出末端

D.5或3突出末端

E.平头末端

27.目的基因与载体连接不涉及：

A.限制酶

B.单链核酸酶

C.末端脱氧核甘酸转移酶

D.DNA连接酶

E.核酸外切酶

28.理想的宿主细胞不应有下列哪种特点：

A.易接纳重组子

B.对载体的政制扩增无严格限制

C.不存在特异的限制前体系以降解外源DNA

D.不对外源DNA进行修饰

E.含有载体的筛选标记基因

29.基因工程中不需要：

A.限制酶

B.基因载体

C.DNA连接酶

D.末端脱氧核甘酸转移酶

E.核酶

30.重组噬菌体DNA转入宿主细胞的过程属于：

A.转化

B.转导

C.转位

D.转染

E.转录

31.有关重组体转化及表达的叙述，错误的是：

A.宿主细胞经CaC12处理后对重组体的通透性增加

B.电击法也可增加宿主细胞的通透性

C.噬菌体为载体的重组体必须以体外包装的方式转化宿主细胞

D.真核基因难于在原核细胞中表达

E.转化生殖细胞可采用直接导入的方法

32.连接目的基因与载体不能采用：

A.粘端连接

B.平端连接

C.尾接法

D.人工连接器

E.非共价键连接

33.直接针对目的DNA进行筛选的方法是：

A.青霉素抗药性

B.氨卞青霉素抗药性

C.分子杂交

D.分子筛

E.电泳

34.“克隆”某一目的DNA的过程不包括：

A.基因载体的选择与构建

B.外源基因与载体的拼接

C.重组DNA分子导入受体细胞

D.筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞

E.表达目的基因编码的蛋白质

35.表达人类蛋白质的最理想的细胞体系是：

A.E.coli表达体系

B.原核表达体系

C.酵母表达体系

D.昆虫表达体系

E.哺乳类细胞表达体系

36.不能用作克隆载体的DNA是：

A.质粒DNA

B.噬菌体DNA

C.细菌基因组DNA

D.腺病毒DNA

E.逆转录病毒DNA

37.克隆的真核黄素基因组DNA可在多种系统表达，例外的是:

A.E.coli表达体系

B.酵母表达体系

C.昆虫表达体系

D.COS细胞表达体系

E.CHO细胞表达体系

38.原核生物的粘端连接方式不涉及；

A.质粒

B.限制性核酸内切酶

C.核酸外切酶

D.退火

E.DNA连接酶

二、X型选择题

1.自然界基因转移可能伴发基因重组的有：

A.接合作用

B.转化作用

C.转导作用

D.转座

2.基因组通常是指：

A.一个病毒所含的全套基因

B.几个基因组成的DNA片段

C.体细胞或生殖细胞所含的一整套基因

D.一条染色体上所含的全部基因

3.基因工程的特点：

A.在细胞水平上操作

B.在分子水平上操作

C.在细胞水平上表达

D.在分子水平上表达

4.基因工程过程涉及：

A.载体和目的基因的分离

B.限制酶切割载体和目的基因

C.DNA重组体的转化与表达

D.DNA重组体扩增、筛选与鉴定

5.限制酶:

A.能识别并切开DNA分子中某些碱基序列

B.酶辨认的碱基序列具有回文结构

C.酎辨认的碱基序列不具有倒转的重复顺序

D.能切断DNA的一条单链

6.限制酶作用于DNA；

A.可将单链DNA特异切开

B.可将双链DNA任意切开

C.酶切后可产生粘性末端

D.酶切后可产生平头末端

7.经限制酶切割的DNA,可产生：

A.粘性末端

B.平头末端

C.带有5-磷酸基的末端

D.带有3-羟基的末端

8.目的基因的获得，可以：

A.直接从染色体DNA中分离

B.利用已知序列人工合成

C.提取mRNA,逆转录合成cDNA

D.利用探针自基因文库中“钓”取

9.在分子克隆中，目的DNA的获取途径有：

A.基因组DNA文库

B.真核细胞染色体DNA

C.真核细胞mRNA反转录获得的cDNA

D.聚合酶链式反应

10.从基因组DNA文库或cDNA文库分离、扩增某一感兴趣基因的过程就是:

A.基因克隆

B.分子克隆

C.重组DNA技术

D.构建基因组DNA文库

11.可用作克隆基因载体的DNA有：

A.细菌质粒DNA

B.噬菌体DNA

C.病毒DNA

D.酵母人工染色体（YAC）

12.基因工程的载体有：

A.pBR322

B.大肠杆菌

C.M13噬菌体

D.昆虫病毒DNA

13.多拷贝质粒是指：

A.细菌中存在多个同种质粒

B.质粒中存在多个目的基因

C.细菌中存在多种质粒

D.在细菌中可自我复制的质粒

14.具有互补粘性末端的载体与目的基因组连接，需经：

A.变性

B.混合

C.退火

D.DNA连接酶催化

15.目的基因与载体连接成的重组体：

A.有独立的繁殖能力

B.无独立的繁殖能力

C.两者用DNA连接酶连接

D.连接键为非共价键

16.“尾接法”的连接方式涉及：

A.polyG

B.polyC

C.TdT

D.ATP

17.进行基因工程实验时，常用技术有：

A.分子杂交技术

B.DNA探针技术

C.质粒重组技术

D.基因调控技术

18.将重组DNA分子导人受体细菌的方法有：

A.接合

B.转座

C.转化

D.转染

19.下述操作可能用于DNA克隆过程的是：

A.DNA的制备和酶解

B.不同来源DNA的拼接

C.核酸分子杂交

D.细菌的生长和繁殖

20.关于质粒DNA的叙述正确的是：

A.是基因组DNA的组成部分

B.具有独立复制功能

C.具有编码蛋白质的功能

D.含有感兴趣的目的DNA

三、填空题

1.自林界基因转移伴发重组有几种形式分别为、、

及。

2.通过自动获取或人为地供给外源，使细胞或培养的受体细胞获得新的

，这就是转化作用。

3.噬菌体感染宿主菌其核酸进入菌体的过程称为,是的一种形

式。

4.由___________和介导的基因移位或重排，称为转座。

5.转座子是可从一个位点转移至另一位点的分散的序列。

6.基因重组有两种类型，即和。

7.依赖整合酶，在两个DNA序列的发生的整合称___________重组。

8.发生在同源序列间的重组称为,又称为。

9.一个完整的基因克隆过程应包括：目的基因的获取，的选择与改造，

的连接，重组DNA分子导入受体细胞，筛选出o

10.限制性核酸内切的是一类识别的核酸醐。

11.DNA经限制性内切酶切割后可产生两种切口：和。

12.科学家感兴趣的外源基因又称，有两种类型：和

。其来源途径有：化学合成，,制备的基因组DNA及

技术。

13.外源DNA离开染色体是不能复制的，将与连接，构建成

重组DNA分子，外源DNA则可被复制。

14.根据采用的克隆载体性质不同，将重组DNA分子导人细菌的方法有、

及感染。

15.DNA重组体筛选的直接筛选法的特点是:；其又可分为：

、和。

四、名词解释

1.基因重组

2.接合作用

3.转化作用

4.转座

5.限制性核酸内切醐

6.DNA克隆（基因工程）

7.cDNA文库

8.基因组DNA文库

五、问答题

1.何谓基因克隆？简述基因克隆的基本过程。

2.目的基因有哪些主要来源（或途径）？

3.常用的限制性内切酶有哪些特点？

4.连接目的基因与载体的方式主要有哪些？

参考答案

1.E2,A3.A4.D5.A6.C7.A8.B9.D10.D11.C12.D13.

C14.C15.D16.C17.B18.D19.B20.E21.B22.D23.D24.

B25.C26.C27.E28.E29.E30.D31.C32.E33.C34.E35.

E36.C37.A38.C

二、X型选择题

1.ABCD2.AC3.BC4.ABCD5.AB6.CD7.ABCD8.ABCD

9.ABCD10.ABC11.ABCD12.ACD13.AD14.BCD15.BC16.ABC17.

ABC18.CD19.ABCD20.BC

三、填空题

1.接合作用，转化作用，转导作用，转座

2.DNA,遗传表型

3.感染，转化

4.插入序列，转座子

5.染色体，重复

6.位点特异的重组，同源重组

7.特异位点间，位点特异的

8.同源重组，基本重组

9.克隆基因载体，目的基因与载体，含感兴趣基因的重组DNA转化细胞

10.DNA特异序列，内切

II.粘性末端，平头（或钝性）末端

12.目的基因，cDNA,基因组DNA,酷促合成cDNA,PCR

13.外源基因，载体

14.转化，转染

15.直接测定基因或基因表型，抗药性标志选择，标志补救选择，分子杂交法

四、名词解释

1.基因重组指整段DNA在细胞内或细胞间，甚至在不同物种之间进行交换，并能在新

的位置上复制、转录和翻译。

2.接合作用指当细胞与细胞、或细菌通过菌毛相互接触时，质粒DNA就可从一个细胞

（细菌）转移至另一细胞（细菌），这种类型的DNA转移称为接合作用。

3.转化作用指通过自动获取或人为地供给外源DNA,使细胞或培养的受体细胞获得新

的遗传表型，这就是转化作用。

4.转座指在基因组内由可移动的DNA序列包括插入序列和转座子介导的基因移位或重

排现象称为转座。

5.限制性核酸内切酶，就是识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链

DNA的一类核酸内切酶。限制性核酸内切酶存在于细菌体内，与相伴存在的甲基化酶共

同构成细菌的限缶必修饰体系，限制外源DNA、保护自身DNA,对细菌遗传性状的稳定遗

传具有重要意义。限制性核酸内切酶分为三类，重组DNA技术中常用的限制性内切核酸

酶为II类酶。

6.DNA克隆（基因工程），就是应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质：同源

的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA,与载体DNA结合成一具有自我复

制能力的DNA分子（即复制子），继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的

转化细胞，再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子，即DNA克隆，又称基因克隆、重

组DNA或基因工程。

7.cDNA文库指以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA,即cDNA；

再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受体菌。不同细菌包含了不同mRNA

为模板的cDNA分子或片段，这样生长的全部细菌所携带的cDNA分子或片段就代表了整

个组织工细胞表达的各种mRNA信息，即cDNA文库。

8.基因组DNA文库指利用限制性核酸内切酶和克隆载体技术，将人们感兴趣的基因片

段转入不同的受体菌，使每个细菌内都携带一种重组DNA分子。这样存在于不同转化细

菌内、由克隆载体所携带的所有基因组DNA片段的集合称基因组DNA文库。基因组DNA

文库涵盖了基因组全部基因信息。

五、问答题

1.（1）基因克隆就是指应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质：同源的或异

源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA,与载体DNA结合成-具有自我复制能力

的DNA分子（即复制子），继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化细

胞，再进行扩增、提取获得大量同DNA分子，即基因克隆，又称DNA克隆、重组DNA

或基因工程。

（2）一个完整的DNA克隆过程应包括；目的基因的获取，基因载体的选择与构建，目的

基因与载体的拼接，重组DNA分子导入受体细胞，筛选并无性繁殖含重组分子的受体细

胞（转化子）。

2.目前获取目的基因大致有以下儿种途径工来源：（1）人工合成对已知某种基因的核

甘酸序列，或根据已知多肽链的氨基酸序列，推得编码这些氨基酸的核甘酸序列，再利用

DNA合成仪通过化学合成原理合成目的基因。（2）从染色体DNA中直接分离主要针对

原核生物，由于真核生物染色体DNA庞大繁杂，难以用此法。（3）cDNA从mRNA合

成，在反转录酶作用下生成mRNA—cDNA杂合分子，用碱降解mRNA,剩下的cDNA在

DNA聚合酶催化下合成互补双链DNA,然后用单链核酸酶S1,将双链连接处切开，即得

到cDNA。（4）基因组DNA用核酸探针将所需目的基因自基因组DNA文库中“钓”取出

来（5）PCRPCR是一种在体外利用酶促反应获得特异序列的基因组DNA或cDNA的

专门技术。目前，采用聚合酶链反应获取目的DNA十分广泛。

3.限制性核酸内切酶（限制酶）是基因工程中重要的工具酶，是一类能识别双链DNA分

子中特异核甘酸序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。常用限制酶

主要有以下特点：（1）均来自于细菌，并以其来源的微生物学名进行命名；（2）其与相伴

存在的甲基化酶共同构成细菌的限制-修饰体系，限制外源DNA、保护自身DNA,对自身

细菌遗传性状的稳定遗传具有重要意义；（3）识别序列多有回文结构；（4）经其切割后的

双链DNA可以有两种切口：平端切口或粘端切口；（5）不同限制性内切核酸酶识别DNA

中核甘酸序列长短不一，识别序列有：四、六或八核甘酸序列。

4.与自然界发生的基因重组不同，这种人工DNA重组是靠目的DNA与载体共价连接

的。连接方式主要有：（1）粘性末端连接，其以下方式——同-限制酶切割位点连接及不

同限制性内切酶位点连接；（2）平端连接；（3）同聚物加尾连接，是利用同聚物序列，如

多聚物A与多聚T之间的退火作用完成连接；（4）人工接头连接，对平端DNA片段或载

体DNA,可在连接前将磷酸化的接头或适当分子连到平末端，使产生新的限制性内切酶

位点，再用识别新位点的限制性内切核酸酶切除接头的远端，产生粘性末端。

核酸凝胶电泳

细菌转化

第二章习题

一、单选题

1.在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（B）

A.I类限制酶B.n类限制酶c.ni类限制酣D.核酸内切酶

E.RNAase

2.下列关于同裂酶的叙述错误的是（B）

A.是从不同菌种分离到的不同的酶，也称异源同工酶。

B.它们的识别序列完全相同。

C.它们的切割方式可以相同，也可以不同。

D.有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。

E.两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。

3.多数限制酶消化DNA的最佳温度是（A）

A.37℃B.30℃C.25℃D.16℃E.33℃

4.下列关于限制酶的叙述错误的是（B）

A.I类限制酶反应需要Mg2+、ATP和S-腺甘蛋氨酸。

B.II类限制酎反应需要Mg2+、ATPo

C.Ill类限制酶反应需要Mg2+、ATP,S-腺甘蛋氨酸能促进反应，但不是绝对

需要。

D.I、III类限制酶对DNA有切割和甲基化活性，II类限制酶对DNA只有切割

活性而无甲基化活性。

E.II类限制酶要求严格的识别序列和切割点，具有高度精确性。

5.如果一个限制醐识别长度为6bp,则其在DNA上识别6bp的切割概率为（D）

A.144B.166C.1/64D.l/46E.1/106

6.多数II类限制酶反应最适PH是（C）

A.PH:2-4B.PH:4-6C.PH:6-8D.PH:8-10E.IH:4-10

7.下列关于限制酶反应的说法错误的是（D）

A.限制酶识别序列内或其邻近的胞喀咤、腺喋吟或尿喘咤被甲基化后，可能会阻碍

限制前的能解活性。

B.许多限制酶对线性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明显差异的。

C.有些限制酶对同一-DNA底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。

D.限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。

E.BSA对许多限制酶的切割活性都有促进作用，所以酶切反应中常加入一定量的

BSA。

8.II类限制醐反应中必须的阳离子是（C）

A.Ni+B.Ca2+C.唾2+D.312+E.Mn2+

9.RFLP形成的原因是（A）

A.由于遗传变异造成同源染色体中碱基的随机变化。

B.使用不同的限制性内切酶进行切割。

C.杂交时使用不同的探针。

D.每种染色体存在两条。

E.提取不同的染色体DNA酶切。

10.下列关于限制酶命名的表示方法，正确的是（E）

A.9u.3AIB.B.amHIC.piID.EcorIE.HindIII

11.需进行DNA部分酶切时，控制下列哪种条件最合适（D）

A.反应时间B.反应体积C.PHD.限制醐量E.反应温度

12.下列酶在反应中不需要ATP的是（D）

A.E<oKB.T4DNA连接酶C.BamHID.EcoBE.DNApolI

13.限制性内切酶可特异性识别（B）

A.双链DNA的特定碱基对B.双链DNA的特定碱基序列

C.单链RNA的特定碱基序列D.单链DNA的特定碱基序列

E双链RNA的特定碱基对

14.下列与RFLP相关的一条是(D)

A.不同限制酶在单个染色体DNA上的限制性图谱。

B.两种物种个体间的限制性图谱。

C.同一个体等位基因的限制性图谱。

D.同一物种不同个体的限制性图谱。

E.非同源染色体用同种限制酶切形成的限制醐图谱。

15.限制酶的星号活性是指在非正常条件下，限制酶(A)

A.识别和切割序列发生变化。B.切割活性大大提高。C.识别和切割

序列与原来完全不同。D.可以任意切割DNA。E.只能部分切割DNA。

二、多选题

1.下列因素中影响限制酶切割的有(A,B,C,D,E)

A.EDTA浓度B.甘油浓度C.DNA纯度D.能的自身活性E.

盐浓度

2.限制酶反应中出现星活性的可能原因是(ABDE)

A.酶浓度太高B低盐C盐浓度过高D高PHE甘油浓度＞5%

(V/V)

3.限制能切割后的DNA电泳得到的电泳条带有些扩散，可能原因是(B,C,

D,E)

A.酶失活B有蛋白质与DNA结合C酶切条件不合适

D有外切核酸酶污染E星号活性

4.下列有关回文序列的描述正确的是(A,B,C)

A.是n类限制酶的识别序列B是某些蛋白的识别序列C是基因的旁

侧序列D是高度重复序列E是卫星序列

5.下列有关回文序列的一般特征正确的是(B,C,D,E)

A.可增强基因表达B有对称轴C是自我互补的序列

D.两条链从5'3'方向的序列一致E是II类限制醐的识别序列

6.关于II类限制酶说法正确的是(B,D)

A.具内切核酸酶和甲基化酶活性

B.仅有内切核酸酶活性

C,只识别非甲基化的DNA序列

D.II类限制前反应条件只需要Mg2+

E.II类限制酶反应需要Mg2+,ATP

7.通过限制性片段分析，可对等位基因进行精确比较是因为(B,C)

A.限制酶只切割两个变异等位基因中的一个

B.限制酶位点可作为遗传标记

C.它不依赖变异的等位基因的产物的功能

D.不同组织等位基因的核甘酸序列存在差异

E.同一组织等位基因核甘酸序列不会完全相同

8.下列关于II类限制酶的叙述正确的是(B,C,D,E)

A.它既有内切酶的活性，也有外切酶活性

B.在特异位点对DNA进行切割

C.同•限制酶切割双链DNA忖产生相同的末端序列

D.有些限制酶切割双链DNA产生粘末端

E.有些限制酶切割双链DNA产生平末端

9.限制酶反应结果若显示没有切割，可能原因是(A,B,C,D,E)

A.限制酶无活性B存在抑制剂如SDS,EDTACDNA不纯

D.缓冲液组成不合适EDNA甲基化

10.下列关于限制酶的叙述正确的是（B,C,D）

A.在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他限

制酶就不能切割了。

B.限制酶在DNA中的识别/切割位点的二、三级结构影响酶切效率。

C.如果限制酶的识别位点位于DNA分子末端，那么接近末端的程度也影响切割。

D.已知某限制的在一环状DNA上有3个切点，因此该酶切割这•环状DNA,

可得到3个片段。

E.能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌，其自身的基因组中没有该酶识别的序列。

11.酶在储存过程中迅速失活，可能原因是（A,B,C,E）

A.储存温度不合适B稀释后储存C储存缓冲液不合适

D.分装后储存E储存缓冲液中蛋白浓度低

12.限制能切反应结果显示为部分切割，可能原因是（A,B,C,D,E）

A.限制酶失活B有抑制剂如SDS,EDTA等存在C反应条件不合

适

DDNA不纯EDNA结构（线形或超螺旋）的影响

13.如果用限制酶切割DNA后得到的片段比预期的多，可能原因是（B,C,E）

A.限制酶失活B限制酶的星号活性C有其他限制酶污染

D有抑制剂存在E测试DNA中有其他DNA污染

14.限制酶切割后的产物连接反应效果差，可能原因是（A,B,C,E）

A.限制酶去除不完全B平端连接C核酸外切醐污染

D.连接反应温度低于16℃

E.从限制酶消化中带来太高浓度的磷酸盐或其他盐类

15.下列限制酶属同裂酶的是（A,B,D,E)

A.BamHIGIGATCCSau3AIIGATC

CCTAGtGCTAGt

B.SalIG1TCGACXhoIClTCGAG

CAGCT1GGAGCTIC

C.BamHIGIGATCCEcoRIGIAATTC

CCTAGIGCTTAAIG

D.HpaIGICGCMspICICGG

CGCIGGGCIC

E.XbaITICTAGANheIG1CTAGC

AGATCITCGATC1G

三.填空题

1.限制酶是一类专门切割DNA的酶，它能特异性识别切割双链（单、双）

DNA。

2.II型限制酶识别位点一般长度为4~6个核甘酸对。

3.个体之间DNA限制酶片段长度存在差异称限制性片段长度多态性（RFLP）。

4.限制酶命名采用Smith和Athens提议的方案，第一个字母大写取自来源细菌的

属名；第二、三个字母取自来源细菌的种名；第四个字母（如果有）取自来源菌的

株系。

5.需要部分酶切时可采取的方法有（1）减少酶的用量（2）缩短反应时间（3）

增大反应体积。

6.限制酶识别序列为n个碱基，则其切割频率的理论值应是4n。

7.限制性内切酶通常保存在50%浓度的甘油溶液中。

8.甘油浓度是导致一些酶的星活性的原因之、在酶切时反应体系中的甘油浓度应控制

在5%以下。

9.限制与修饰是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA的限制和对自身

DNA的修饰来实现的。

10.II型限制酶既具有识别位点的专一性，也具有切割位点的专一性。它

作用时需要Mg2+离子作辅助因子。

四.简答题

1.在酶切缓冲液中加入牛血清白蛋白（BSA）的目的与机理是什么？

答：目的是保护酶的活性；机理是通过提高反应体系中蛋白质的浓度，防止内切的失活。

2.如果用EcoRI酶切DNA时出现星活性，试分析原因？

答：主要原因有：酶浓度太高；高PH；低盐；含Mn2+、Cu2+等非Mg2+金属离

子；甘油浓度高于5%；存在某些有机溶剂。

3.下列序列中哪些可能是II类限制酶的识别序列？

ATATCGCCCGGGGATATCAGCCGAGAGTC

答：CCCGGGGATATCGAGTC

4.用Klenow酶可将5'粘末端填补成平末端，而导致某些限制位点消失，下列酶切

后用klenow处理再连接不会丢失识别位点的是哪些？

XmalCICCGGGBssHIGICGCGCPstICTGCAIG

HhalGCGICHpallGICGC

答：BssHI,Hpall

5.当两种限制酶反应条件不同时;若要用双酶切，应采取什么措施？为什么？

答：要避免星活性及部分酶切。（1）先用低盐缓冲液中活性最高的酶切，再补盐和第二

种酶；（2）用一种酶消化后，以酚：氯仿：异戊醇抽提，再经乙醇沉淀，将DNA重新

溶解与适合第二种醐的缓冲液，加第二种酶消化；（3）先低温酶，后高温酶；（4）使

用通用缓冲液。

6.试计算下列三种限制酶各自在某染色体DNA序列上的切割概率

Sau3AIGATCPstICTGCAGHinfIGANTC

AcyIGPuCGPyC

答：1/44.|/46；1/44；（1/44）x（l/22）

7.一长为4.2kb的DNA片段，分别用EcoRI、PstI及EcoRI+PstI消化，电泳结果

如下图所示，请根据结果绘出该片段限制性图谱

0.