生物制药过程中的细胞系构建与优化考核试卷

生物制药过程中的细胞系构建与优化考核试卷考生姓名：答题日期：得分：判卷人：

本次考核旨在考察考生在生物制药过程中，对细胞系构建与优化的掌握程度，包括细胞系的筛选、培养、鉴定、保存及在生物制药中的应用等方面，以评估考生是否具备相关理论知识和实践操作能力。

一、单项选择题（本题共30小题，每小题0.5分，共15分，在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的）

1.细胞系构建过程中，以下哪项不是常见的筛选方法？（）

A.抗药性筛选

B.限制性内切酶酶切

C.流式细胞术筛选

D.磁珠分离

2.在细胞培养中，以下哪种物质不是维持细胞生长所必需的？（）

A.葡萄糖

B.胰蛋白胨

C.氨基酸

D.氧气

3.细胞冻存时，以下哪种保护剂最为常用？（）

A.DMSO

B.甘油

C.乙醇

D.丙酮

4.细胞培养过程中，以下哪项不是细胞污染的常见原因？（）

A.培养基污染

B.仪器污染

C.实验室环境

D.培养基配比不当

5.以下哪种细胞培养方法适用于大规模生产？（）

A.微生物培养

B.组织培养

C.细胞株培养

D.细胞悬浮培养

6.以下哪种细胞株在生物制药中应用最为广泛？（）

A.293细胞

B.HeLa细胞

C.HUVEC细胞

D.3T3细胞

7.细胞系构建时，以下哪种方法可用于筛选具有特定表型的细胞？（）

A.荧光素酶报告基因

B.抗体检测

C.RT-PCR

D.Westernblot

8.在细胞培养过程中，以下哪种方法可用于检测细胞活力？（）

A.比色法

B.流式细胞术

C.电镜观察

D.Southernblot

9.细胞冻存时，以下哪个温度最为适宜？（）

A.-20℃

B.-80℃

C.-196℃

D.4℃

10.以下哪种细胞死亡方式与细胞凋亡无关？（）

A.凋亡

B.坏死

C.自噬

D.线粒体途径

11.细胞培养过程中，以下哪种物质不是细胞生长抑制因子？（）

A.金属离子

B.糖类

C.氨基酸

D.有机酸

12.以下哪种细胞培养技术可用于基因编辑？（）

A.CRISPR/Cas9

B.TALEN

C.ZFN

D.重组DNA技术

13.细胞培养过程中，以下哪种方法可用于检测细胞周期？（）

A.流式细胞术

B.细胞计数

C.染色体分析

D.荧光显微镜观察

14.以下哪种细胞株在肿瘤研究中应用最为广泛？（）

A.293细胞

B.HeLa细胞

C.HUVEC细胞

D.3T3细胞

15.细胞培养过程中，以下哪种物质不是细胞生长因子？（）

A.EGF

B.bFGF

C.HGF

D.TNF-α

16.以下哪种细胞株在病毒疫苗生产中应用最为广泛？（）

A.293细胞

B.HeLa细胞

C.HUVEC细胞

D.3T3细胞

17.细胞系构建时，以下哪种方法可用于检测细胞的染色体稳定性？（）

A.流式细胞术

B.Southernblot

C.G-banding

D.RT-PCR

18.以下哪种细胞死亡方式与细胞自噬无关？（）

A.凋亡

B.坏死

C.自噬

D.线粒体途径

19.细胞培养过程中，以下哪种方法可用于检测细胞DNA损伤？（）

A.比色法

B.流式细胞术

C.电镜观察

D.Southernblot

20.以下哪种细胞株在免疫学研究应用最为广泛？（）

A.293细胞

B.HeLa细胞

C.HUVEC细胞

D.3T3细胞

21.细胞培养过程中，以下哪种物质不是细胞外基质成分？（）

A.纤维连接蛋白

B.胶原蛋白

C.纤维蛋白

D.透明质酸

22.细胞系构建时，以下哪种方法可用于检测细胞的基因表达？（）

A.Westernblot

B.Northernblot

C.RT-PCR

D.Southernblot

23.以下哪种细胞株在神经科学研究中应用最为广泛？（）

A.293细胞

B.HeLa细胞

C.HUVEC细胞

D.3T3细胞

24.细胞培养过程中，以下哪种方法可用于检测细胞的细胞因子分泌？（）

A.比色法

B.流式细胞术

C.电镜观察

D.Southernblot

25.以下哪种细胞株在免疫治疗中应用最为广泛？（）

A.293细胞

B.HeLa细胞

C.HUVEC细胞

D.3T3细胞

26.细胞系构建时，以下哪种方法可用于检测细胞的药物敏感性？（）

A.比色法

B.流式细胞术

C.电镜观察

D.Southernblot

27.以下哪种细胞株在干细胞研究中应用最为广泛？（）

A.293细胞

B.HeLa细胞

C.HUVEC细胞

D.3T3细胞

28.细胞培养过程中，以下哪种方法可用于检测细胞的细胞因子受体的表达？（）

A.Westernblot

B.Northernblot

C.RT-PCR

D.Southernblot

29.以下哪种细胞株在基因治疗中应用最为广泛？（）

A.293细胞

B.HeLa细胞

C.HUVEC细胞

D.3T3细胞

30.细胞系构建时，以下哪种方法可用于检测细胞的代谢活性？（）

A.比色法

B.流式细胞术

C.电镜观察

D.Southernblot

二、多选题（本题共20小题，每小题1分，共20分，在每小题给出的选项中，至少有一项是符合题目要求的）

1.细胞系构建过程中，以下哪些是常见的细胞筛选方法？（）

A.抗药性筛选

B.限制性内切酶酶切

C.流式细胞术筛选

D.磁珠分离

2.细胞培养时，以下哪些因素会影响细胞生长？（）

A.培养基成分

B.温度

C.氧气浓度

D.实验室环境

3.细胞冻存时，以下哪些措施有助于保护细胞？（）

A.使用合适的保护剂

B.控制冻存温度

C.使用无菌技术

D.短时间内完成冻存过程

4.细胞培养中，以下哪些是常见的细胞污染？（）

A.细菌污染

B.真菌污染

C.病毒污染

D.螨虫污染

5.以下哪些方法可用于检测细胞活力？（）

A.比色法

B.流式细胞术

C.细胞计数

D.荧光显微镜观察

6.细胞培养过程中，以下哪些是细胞生长抑制因子？（）

A.金属离子

B.糖类

C.氨基酸

D.有机酸

7.以下哪些细胞培养技术可用于基因编辑？（）

A.CRISPR/Cas9

B.TALEN

C.ZFN

D.重组DNA技术

8.细胞培养中，以下哪些方法可用于检测细胞周期？（）

A.流式细胞术

B.细胞计数

C.染色体分析

D.荧光显微镜观察

9.以下哪些细胞株在肿瘤研究中应用最为广泛？（）

A.293细胞

B.HeLa细胞

C.HUVEC细胞

D.3T3细胞

10.细胞培养中，以下哪些是细胞外基质成分？（）

A.纤维连接蛋白

B.胶原蛋白

C.纤维蛋白

D.透明质酸

11.细胞系构建时，以下哪些方法可用于检测细胞的基因表达？（）

A.Westernblot

B.Northernblot

C.RT-PCR

D.Southernblot

12.以下哪些细胞株在神经科学研究中应用最为广泛？（）

A.293细胞

B.HeLa细胞

C.HUVEC细胞

D.3T3细胞

13.细胞培养中，以下哪些方法可用于检测细胞的细胞因子分泌？（）

A.比色法

B.流式细胞术

C.电镜观察

D.Southernblot

14.以下哪些细胞株在免疫治疗中应用最为广泛？（）

A.293细胞

B.HeLa细胞

C.HUVEC细胞

D.3T3细胞

15.细胞系构建时，以下哪些方法可用于检测细胞的药物敏感性？（）

A.比色法

B.流式细胞术

C.电镜观察

D.Southernblot

16.以下哪些细胞株在干细胞研究中应用最为广泛？（）

A.293细胞

B.HeLa细胞

C.HUVEC细胞

D.3T3细胞

17.细胞培养中，以下哪些方法可用于检测细胞的细胞因子受体的表达？（）

A.Westernblot

B.Northernblot

C.RT-PCR

D.Southernblot

18.以下哪些细胞株在基因治疗中应用最为广泛？（）

A.293细胞

B.HeLa细胞

C.HUVEC细胞

D.3T3细胞

19.细胞系构建时，以下哪些方法可用于检测细胞的代谢活性？（）

A.比色法

B.流式细胞术

C.电镜观察

D.Southernblot

20.以下哪些是细胞培养过程中常见的质量控制措施？（）

A.定期检测细胞活力

B.定期进行细胞污染检测

C.定期进行细胞计数

D.定期更换培养基

三、填空题（本题共25小题，每小题1分，共25分，请将正确答案填到题目空白处）

1.细胞系构建的第一步通常是______。

2.细胞培养过程中，维持细胞生长和分裂的培养基通常含有______、______和______。

3.细胞冻存时，常用的保护剂有______和______。

4.细胞培养过程中，细胞污染的主要途径包括______、______和______。

5.细胞培养的适宜温度通常为______℃。

6.细胞培养过程中，pH值的理想范围是______。

7.细胞培养的氧气需求通常较高，因为细胞需要______。

8.细胞系构建时，常用的筛选方法包括______和______。

9.细胞培养中，细胞周期分为______、______、______和______四个阶段。

10.细胞凋亡过程中，细胞膜会形成______。

11.细胞培养过程中，常见的细胞死亡方式包括______、______和______。

12.细胞培养中，细胞活力检测常用的方法有______和______。

13.细胞培养的培养基中，维生素和激素的作用是______。

14.细胞培养过程中，维持细胞生长的营养物质主要包括______、______、______和______。

15.细胞培养中，细胞密度达到______时，需要传代。

16.细胞培养过程中，为了防止污染，通常需要______。

17.细胞冻存时，冻存管应置于______温度保存。

18.细胞培养过程中，无菌操作是防止______的关键。

19.细胞系构建时，常用的抗生素有______、______和______。

20.细胞培养中，常用的抗生素抑菌浓度为______。

21.细胞培养过程中，细胞贴壁生长的细胞层称为______。

22.细胞培养中，细胞贴壁生长的细胞密度达到______时，称为单层细胞。

23.细胞培养过程中，细胞传代是指将______。

24.细胞培养中，细胞冻存时，解冻后的细胞需要______。

25.细胞培养过程中，细胞冻存后的复苏时间一般为______。

四、判断题（本题共20小题，每题0.5分，共10分，正确的请在答题括号中画√，错误的画×）

1.细胞系构建过程中，所有细胞都会发生突变。（）

2.细胞培养时，培养基的pH值对细胞生长没有影响。（）

3.细胞冻存时，DMSO比甘油更适合作为保护剂。（）

4.细胞培养过程中，细胞污染可以通过肉眼观察发现。（）

5.细胞培养的适宜温度范围通常为25-37℃。（）

6.细胞培养中，氧气浓度对细胞生长没有影响。（）

7.细胞系构建时，抗药性筛选是唯一的方法。（）

8.细胞培养过程中，细胞活力可以通过MTT法检测。（）

9.细胞凋亡是细胞主动死亡的过程，与坏死不同。（）

10.细胞培养中，细胞密度达到90%时，需要传代。（）

11.细胞培养过程中，无菌操作是防止细胞污染的唯一方法。（）

12.细胞冻存时，冻存管应置于室温保存。（）

13.细胞培养中，抗生素的添加可以促进细胞生长。（）

14.细胞系构建时，常用的抗生素有青霉素和链霉素。（）

15.细胞培养中，细胞贴壁生长的细胞层称为悬浮细胞层。（）

16.细胞培养过程中，细胞传代是指将培养的细胞分装到新的培养瓶中。（）

17.细胞冻存后的复苏时间越长，细胞活力越低。（）

18.细胞培养中，细胞冻存后的复苏时间一般为30分钟。（）

19.细胞培养过程中，细胞冻存后的复苏应立即进行实验操作。（）

20.细胞培养中，细胞冻存后的复苏后，细胞通常需要24小时恢复期。（）

五、主观题（本题共4小题，每题5分，共20分）

1.请简述细胞系构建的基本步骤，并说明每个步骤的关键点。

2.在生物制药过程中，为什么需要对细胞系进行优化？请列举至少三种优化方法及其目的。

3.请解释细胞系构建过程中可能遇到的常见问题及其解决方法。

4.结合实际案例，说明细胞系构建与优化在生物制药中的应用及其重要性。

六、案例题（本题共2小题，每题5分，共10分）

1.案例题：某生物制药公司正在进行一种新型疫苗的研发，需要构建一个能够高效表达目标抗原的细胞系。请根据以下信息，回答以下问题：

-该公司选择了HEK293细胞作为构建细胞系的起始细胞。

-研究人员将含有目标抗原基因的重组质粒通过脂质体转染技术导入HEK293细胞。

-转染后，研究人员通过筛选方法筛选出稳定表达目标抗原的细胞克隆。

问题：

a.请简述HEK293细胞作为构建细胞系的起始细胞的原因。

b.在筛选稳定表达目标抗原的细胞克隆时，研究人员可能会采用哪些方法？请至少列举两种方法并简述其原理。

2.案例题：某研究团队正在进行一种抗肿瘤药物的开发，该药物需要通过细胞培养技术进行活性筛选。请根据以下信息，回答以下问题：

-研究团队从肿瘤组织中分离出原代肿瘤细胞，并成功建立了原代细胞系。

-为了筛选出对肿瘤细胞具有抑制作用的化合物，研究团队设计了一种基于细胞增殖抑制的筛选方法。

问题：

a.请简述从肿瘤组织中分离原代肿瘤细胞的过程。

b.在基于细胞增殖抑制的筛选方法中，研究人员可能会如何评估化合物的活性？请简述评估方法及其依据。

标准答案

一、单项选择题

1.B

2.D

3.A

4.D

5.D

6.B

7.A

8.A

9.C

10.B

11.B

12.A

13.A

14.B

15.B

16.A

17.C

18.C

19.A

20.B

21.A

22.A

23.D

24.A

25.B

26.A

27.D

28.A

29.B

30.A

二、多选题

1.A,C,D

2.A,B,C,D

3.A,B,C

4.A,B,C

5.A,B,C

6.A,D

7.A,B,C

8.A,C

9.A,B

10.A,B,C,D

11.A,B,C

12.A,B,C

13.A,B,C

14.A,B,C,D

15.A,B,C

16.A,B,C,D

17.A,B,C

18.A,B,C

19.A,B,C

20.A,B,C

三、填空题

1.细胞分离

2.氨基酸、维生素、激素

3.DMSO,甘油

4.培养基污染,仪器污染,实验室环境

5.37

6.6.5-7.5

7.有氧呼吸

8.抗药性筛选,限制性内切酶酶切

9.G1期,S期,G2期,M期

10.空泡

11.凋亡,坏死,自噬

12.比色法,流式细胞术

13.促进细胞生长和增殖

14.糖类,脂类,氨基酸,