浙江专版2025版高考生物一轮复习第29讲微生物的利用浅尝现代生物技术教案

PAGEPAGE19微生物的利用、浅尝现代生物技术章学问内容考试属性及要求考查频率加试微生物的利用1.大肠杆菌的培育和分别2.分别以尿素为氮源的微生物试验与探究实力(1)能独立完成“生物学问内容表”所列的生物试验(活动)，包括理解试验目的、原理、方法和操作步骤，驾驭相关的操作技能，并能将这些试验涉及的方法和技能进行综合运用。(2)具备验证简洁生物学事实的实力，能设计试验，提出或完善试验思路，能对试验现象和结果进行处理、分析和说明。(3)具有对一些生物学问题进行初步探究的实力，能提出问题、做出假设和预期、确认变量、设计试验方案、处理和说明数据、做出合理的推断，能对一些简洁的试验方案做出恰当的评价和修订。2015年10月第32题(1)(3分)2024年10月第32题(一)(7分)2024年4月第32题(一)(1)(2分)酶的应用3.果汁中的果胶和果胶酶4.α－淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测2024年4月第32题(一)(7分)2024年10月第32题(一)(4)(1分)生物技术在食品加工中的应用5.果酒及果醋的制作6.泡菜的腌制和亚硝酸的测定2024年4月第32题(一)(2)(3)(5分)浅尝现代生物技术7.植物的组织培育2015年10月第32题(3)(5)(3分)第29讲微生物的利用、浅尝现代生物技术考点一微生物的利用一、大肠杆菌的培育和分别1.大肠杆菌(1)特性：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。(2)细菌的繁殖：以分裂的方式繁殖，分裂速度很快。2.细菌的扩大培育扩大培育用LB液体培育基。3.分别划线分别用LB固体平面培育基。培育基灭菌↓倒平板↓接种↓划线分别↓培育视察↓菌种保存50mLLB液体培育基和50mLLB固体培育基及培育皿高压蒸汽灭菌将培育基分别倒入4个灭菌后的培育皿中，水平放置，使之形成平面在装有液体培育基的三角瓶中接种大肠杆菌，培育12h用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固体培育基的平板上连续划线，盖好培育皿培育皿倒置(盖在下面)，放在37℃恒温培育箱中培育12～24h，可看到划线的末端出现不连续的单个菌落在无菌操作下将单菌落用接种环取出，再用划线法接种在斜面上，37℃培育24h后，置于4__℃冰箱中保存4.消毒和灭菌比较条件结果常用方法应用范围消毒较为温柔的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物紫外线消毒法接种室、超净台化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源灭菌剧烈的理化因素杀死物体内外全部的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌法接种工具干热灭菌法玻璃器皿、金属工具高压蒸汽灭菌法培育基及容器的灭菌过滤除菌不能加热灭菌的化合物，要用G6玻璃砂漏斗过滤二、分别以尿素为氮源的微生物1.菌种特点含有脲酶，可以通过降解尿素作为其生长的氮源。2.培育基用以尿素为唯一氮源的培育基培育，以LB全养分培育基为比照。3.试验原理(1)筛选以尿素为氮源的微生物，可运用以尿素为唯一氮源的选择培育基进行培育选择。(2)细菌合成的脲酶能将尿素分解成NH3，致使pH上升，使酚红指示剂变红。4.试验步骤制备培育基：将已灭菌的LB固体培育基和尿素固体培育基分别倒入两个培育皿中，摇匀，平放至凝固↓制备细菌悬液：用1g土样和无菌水配制不同浓度的细菌悬液↓用涂布分别法分别细菌：将不同浓度的土壤稀释液分别加入到有LB培育基和尿素培育基的培育皿中，每个浓度分别各接种到三个培育皿中，并用玻璃刮刀涂布到整个平面上↓培育：将培育皿倒置，在37℃恒温箱中培育24～48h↓视察：培育基中菌落数量5.反应的鉴定在配制培育基时，加入指示剂酚红，培育时细菌将尿素分解产生碱性的氨，使培育基上菌落四周出现红色的环带。6.微生物接种的两种常用方法比较比较划线分别法涂布分别法工具接种环玻璃刮刀原理通过接种环在固体培育基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培育基表面。在数次划线后培育，可以分别到由一个细菌细胞繁殖而来的肉眼可见的细胞群体，即菌落将菌液用无菌水进行梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别用涂布器涂布到固体培育基的表面，进行培育。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细菌细胞，从而能在培育基表面形成单个的菌落特点方法简洁，但不相宜计数单菌落更易分开，但操作困难些目的使培育基上形成单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落1.(2015·10月浙江选考节选)科研人员拟将已知的花色基因(目的基因)转入矮牵牛的核基因组中，培育新花色的矮牵牛。请回答：…用________的玻璃刮刀将稀释后的大肠杆菌液________接种到含有抗生素的固体培育基上，经培育形成________，再进行鉴定和扩大培育。解析在细菌涂布分别时，采纳灭菌的玻璃刮刀将稀释后的菌液匀称涂布在固体培育基上，经培育形成单菌落，再进行鉴定和扩大培育。答案灭菌涂布菌落2.(2024·10月浙江选考节选)请回答从土壤中分别产脲酶细菌和脲酶固定化试验的有关问题：(1)LB固体培育基：取适量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入肯定量的蒸馏水溶解，再加________，灭菌备用。(2)尿素固体培育基：先将相宜浓度的尿素溶液用________灭菌过的G6玻璃砂漏斗过滤，因为G6玻璃砂漏斗________________，故用于过滤除菌。然后将尿素溶液加到已经灭菌的含有酚红的培育基中，备用。(3)取适量含产脲酶细菌的10－4、10－5两种土壤稀释液，分别涂布接种到LB固体培育基和尿素固体培育基上，培育48h，推想固体培育基上生长的菌落数量最少的是________。A.10－5稀释液＋尿素固体培育基B.10－5稀释液＋LB固体培育基C.10－4稀释液＋尿素固体培育基D.10－4稀释液＋LB固体培育基在尿素固体培育基上产脲酶细菌菌落四周出现________，其缘由是细菌产生的脲酶催化尿素分解产生________所致。解析(1)本试验中的LB培育基是要与尿素培育基作对比的，所以要用琼脂糖替换琼脂。(2)尿素培育基的灭菌要分开进行，除尿素外的其他成分仍用高压蒸汽灭菌，尿素溶液用G6玻璃砂漏斗过滤除菌，再将除菌的尿素加到已灭菌的其他成分中。G6玻璃砂漏斗由于孔径小，细菌不能滤过，可用于过滤除菌，但须要在运用前进行高压蒸汽灭菌。(3)由于在土壤中产脲酶的细菌远小于一般细菌，所以在尿素培育基上的菌落数相对少得多，另外稀释倍数高的土壤稀释液中细菌数量少，在培育基上菌落数也相对少。在尿素固体培育基上产脲酶细菌菌落四周出现红色环带，这是因为脲酶催化尿素分解产生氨，使培育基呈碱性，酚红指示剂在碱性下呈红色。答案(1)琼脂糖(2)高压蒸汽孔径小，细菌不能滤过(3)A红色环带氨(或NH3)3.(2024·4月浙江选考节选)回答与泡菜腌制和亚硝酸盐测定有关的问题：制作泡菜时，为缩短发酵周期，腌制前可加入乳酸菌。取少量酸奶，用无菌蒸馏水稀释后，再用________蘸取少量的稀释液，在MRS乳酸菌专用培育基的平板上划线，以获得乳酸菌单菌落。下图所示的划线分别操作，正确的是________。解析从酸奶中分别乳酸菌时，可采纳划线分别，方法是用接种环蘸取少量的稀释液，在MRS乳酸菌专用培育基的平板上划线，以获得乳酸菌单菌落。图示的划线分别中B图方法是正确的，A图不分区划线，但划线太稀疏了，分别效果很差，B、C、D都采纳了分区划线，但C、D都没有留意除第一区外，之后每区划线的第一条线都须要从上一区划线的末端起先。答案接种环B本题组对应选修一P19～P28，微生物的利用1.大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌，是基因工程技术中被广泛采纳的工具。2.培育基是指微生物生存的环境和养分物质，一般都含有五大养分要素：即：水、无机盐、碳源、氮源、生长因子。一般来讲，“细菌喜荤、霉菌喜素”，大肠杆菌一般采纳LB培育基，其主要成分为蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、水等，若要扩大培育，则采纳LB液体培育基，若要分别获得纯种，则采纳LB固体培育基，这两者的主要区分在于后者加入了琼脂。霉菌培育基一般用无机物配制成或添加蔗糖的豆芽汁。3.单菌落的分别是消退污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。常用的分别方式有划线分别法、涂布分别法两种。它们都采纳固体平面培育基。其中涂布分别法单菌落更易分开，并且可用来计数菌体数目，但操作困难些，且往往要先将培育的菌液稀释；而划线分别操作简洁，但不能用于计数。4.菌种保存往往选用固体斜面培育基，于4__℃冰箱中保存。用灼烧后的接种环从斜面取菌种时，往往要先使接种环接触培育基以达到冷却的目的，然后再取菌体。5.接种完成后应将培育皿倒置培育，目的是：防止水蒸气凝聚成的水滴落入培育基表面冲散菌落，影响单菌落的形成和分别。6.灭菌操作：培育基、培育皿、试管、三角瓶、枪头、接种环、镊子等用具通常用高压蒸汽灭菌，这些用具通常须要用牛皮纸或报纸包好，其中容器先要用棉塞或封口膜封口再包好，放入灭菌锅中，在121℃(1__kg/cm2压力)下灭菌15min。试验用的棉花不能用脱脂棉，因脱脂棉易吸水，吸水后简洁引起污染。假如培育基中有葡萄糖，为防止葡萄糖分解碳化，要用500g/cm2压力(90℃以上)灭菌30min。由于尿素加热会分解，只能用G6玻璃砂漏斗过滤除菌，但玻璃砂漏斗运用前也要在121℃下用纸包好灭菌，用后还需用1mol/L的HCl浸泡，并抽滤去酸，再用蒸馏水洗至洗出液呈中性，干燥后保存。将培育基转移到三角瓶和试管中时必需用三角漏斗，以免培育基沾到三角瓶口和试管口，发生污染。7.无菌操作通常在超净台中进行，超净台运用前30min，打开紫外灯和过滤风，留意打开紫外灯后人必需离开，运用时必需关闭紫外灯。角度微生物的利用1.(2024·嘉兴期末节选)下列有关大肠杆菌的培育试验，请回答：(1)配制培育大肠杆菌的培育基时，依据“细菌喜荤，霉菌喜素”的规律，通常在培育基中加入蛋白胨和________作为养分物质，为维持肯定的渗透压，常需加入肯定量的________。(2)大肠杆菌培育和分别的试验中，在________中进行扩大培育，培育液经________后，在LB固体培育基上进行________，并将培育皿________放在恒温培育箱中培育，可以获得如图效果。为了检测接种、培育过程是否受杂菌污染以及________，应同时将未接种的培育基放入恒温培育箱培育。(3)通常对获得的纯菌种可以依据________的形态、大小等特征进行初步的鉴定。(4)关于“大肠杆菌培育和分别”的操作中，下列叙述正确的是________。A.高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B.倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培育基溅到皿盖上C.为了防止污染，接种工具经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D.用记号笔标记培育皿中菌落时，应标记在皿底上解析(1)配制培育细菌的培育基通常用LB培育基，其成分有蛋白胨、酵母提取物、NaCl、水等，固体培育基还有琼脂。其中蛋白胨、酵母提取物供应养分，NaCl供应无机盐并调整渗透压，琼脂是凝固剂。(2)细菌培育通常用LB液体培育基进行扩大培育和生产，用固体培育基进行分别、鉴定、保存菌种。菌种分别有划线法和涂布法，进行涂布分别时，选稀释菌液，再进行涂布，完成后将培育皿倒置放在恒温培育箱中培育，可获得分布匀称的单菌落。为了检测接种、培育过程是否受杂菌污染以及培育基灭菌是否彻底，应同时将未接种的培育基放入恒温培育箱培育。(3)菌落的形态、大小等特征可以作为鉴定的依据。(4)高压灭菌加热结束后，自然冷却待压力表指针回到零后，开启锅盖，A错误；倒平板时，应将打开上盖的一边，将培育基倒入培育皿，再盖上培育皿上盖，将培育皿置于水平位置，轻轻晃动，使培育基铺满底部，待其凝固，B错误；接种时接种工具经灼烧灭菌后，需先接触培育基使其冷却后，再挑取菌落，C错误；由于培育皿是倒置放在恒温培育箱中培育的，所以用记号笔标记培育皿中菌落时，应标记在皿底上，D正确。答案(1)酵母提取物NaCl(2)LB液体培育基稀释涂布分别倒置培育基灭菌是否彻底(3)菌落(4)D2.(2024·金丽衢十二校节选)一般酵母菌干脆利用淀粉的实力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α－淀粉酶基因转入酵母菌中，经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种(过程如图1所示)(1)图1中，为达到筛选目的，平板内的固体培育基应以______作为唯一碳源。②③过程需重复几次，目的是________________________________________________________________________________________________。(2)某同学尝试过程③的操作，其中一个平板经培育后的菌落分布如图2所示。该同学的接种方法是________；推想该同学接种时可能的操作失误是________。(3)上述工程酵母菌培育过程中，有关操作正确的是________。A.玻璃刮刀用火焰灼烧进行灭菌B.培育基分装到培育皿后进行灭菌C.倒平板和取菌液都必需在酒精灯火焰旁进行D.获得的菌种假如须要保存，可置于37℃恒温保存解析(1)为筛选得到高效利用淀粉的工程酵母菌菌种，固体培育基应以淀粉作为唯一碳源。多次重复筛选是为获得高效利用淀粉的工程酵母菌的纯化菌种。(2)由图2的结果表明，该同学采纳的是涂布分别法，其操作的失误是涂布不匀称，造成平板上菌落未匀称分布。(3)涂布操作用的玻璃刮刀通常保存在70%酒精中，运用前引燃酒精，火焰熄灭后待其冷却后运用；培育基通常先灭菌，后趁热倒平板；保存菌种通常运用斜面培育基，在4℃冰箱中保存；倒平板和取菌液都必需在酒精灯火焰旁进行，这是无菌操作要求。答案(1)淀粉筛选出真正高效利用淀粉的工程酵母菌菌种(2)涂布分别法涂布不匀称(3)C1.培育基的种类划分标准培育基种类特点用途物理性质液体培育基不加凝固剂工业生产、扩大培育半固体培育基加凝固剂，如琼脂视察微生物的运动、分类、鉴定固体培育基微生物分别、鉴定、活菌计数、保藏菌种化学成分自然培育基含化学成分不明确的自然物质工业生产合成培育基培育基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成)分类、鉴定用途选择培育基培育基中加入某种化学物质，以抑制不须要的微生物的生长，促进所须要的微生物的生长培育、分别出特定微生物鉴别培育基依据微生物的代谢特点，在培育基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物2.培育基养分要素基本养分要素：各种培育基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐。此外还要满意不同微生物生长对pH、特别养分物质以及氧气的需求。养分要素来源功能碳源无机碳源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳无机物①构成细胞中的物质和一些代谢产物；②既是碳源又是能源有机碳源糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油、花生粉饼等氮源无机氮源无机氮：NH3、铵盐、硝酸盐、N2等将无机氮合成含氮的代谢产物有机氮源牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物生长因子维生素、氨基酸、碱基①酶和核酸的组成成分；②参加代谢过程中的酶促反应考点二浅尝现代生物技术1.植物组织培育的原理(1)理论基础：植物细胞具有全能性。(2)植物组织培育的基本过程eq\x(\a\al(离体的植物细胞、,组织、器官))eq\o(→,\s\up7(脱分化))eq\x(\a\al(愈伤,组织))eq\o(→,\s\up7(再分化))eq\x(试管苗)eq\o(→,\s\up7(移栽))eq\x(植物体)(3)植物组织培育影响因素①选材：不同植物组织或同一植物组织的不同部分，培育的难易程度差别很大，菊花的组织培育，一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。②培育基：植物组织培育须要相宜的培育基，常用的是MS培育基，在配制好的培育基中，经常须要添加生长素和细胞分裂素两种植物激素。试验中运用的生长素类似物是萘乙酸(NAA)，细胞分裂素类似物是苄基腺嘌呤(BA)。③其他条件：pH、温度和光照等条件对植物组织培育也很重要。2.菊花组织培育过程制备MS固体培育基：配制好的培育基进行高压蒸汽灭菌↓外植体消毒：自然生长的茎离体→用70%的乙醇浸泡10min→再用5%的次氯酸钠浸泡5min→再用另一5%的次氯酸钠浸泡5min→最终用无菌水清洗↓接种：始终在酒精灯火焰旁进行，对接种工具要用灼烧灭菌↓生芽培育：①培育基：发芽培育基(MS＋BA＋NAA)；②培育条件：温度为18～25℃；光照≥14.5h/d；pH为5.8～6.0；③培育标准：健壮的丛状苗↓生根培育：①培育基：生根培育基(MS＋NAA)；②培育条件与发芽培育相同↓炼苗：①培育基：草炭土或蛭石；②培育条件：2～3d内湿度限制为80%；2～3d后渐渐降低湿度至自然湿度↓移栽(定植)(2015·10月浙江选考节选)科研人员拟将已知的花色基因(目的基因)转入矮牵牛的核基因组中，培育新花色的矮牵牛。请回答：(1)取田间矮牵牛的幼嫩叶片，经自来水冲洗，先用70%________浸泡，再用5%次氯酸钠浸泡，最终用________清洗，作为转基因的受体材料。(2)取出试管苗，在相宜的光照、温度和80%以上的________等条件下进行炼苗。解析(1)用作组培的外植体若取自自然环境则须要消毒，方法是外植体经自来水冲洗，先用70%酒精浸泡，再用5%次氯酸钠浸泡，最终用无菌水清洗，才能用于接种。(2)组培时，试管苗需经炼苗才能定植，炼苗时需将试管苗从培育瓶中取出，移栽至具相宜的光照、温度和较低湿度的环境中。答案(1)酒精无菌水(2)湿度本题组对应选修一P59～P61，植物的组织培育1.组织培育就是取一部分植物组织，如根、茎、花瓣、叶或花粉等，在无菌的条件下接种在三角瓶中的琼脂培育基上，赐予肯定的光照和温度，使之产生愈伤组织，或进而生根发芽。组织培育必需在培育基中加入生长素和细胞分裂素。两者的摩尔浓度比确定组织是生根还是生芽。当细胞分裂素与生长素的比例高时，诱导芽的生成，两者比例大致相等时，愈伤组织接着生长而不分化；当细胞分裂素与生长素的比例较低时，会趋于生根。2.本试验首先用细胞分裂素相对较多和生长素相对较少的发芽培育基进行培育，获得丛状苗；然后将丛状苗分株培育。分株后，再移入含较多生长素的生根培育基中，使其生根；将生根的苗从三角瓶中移至草炭土或蛭石中接着生长；苗健壮后再移至土中。角度植物组织培育1.某愈伤组织在如下图甲所示的培育基中培育一段时间后得到如图乙所示的结构，经分析可知该培育基中()A.细胞分裂素多，生长素少B.细胞分裂素少，生长素多C.细胞分裂素和生长素用量相等D.只有生长素解析从图乙中可以看出该培育基有利于生根且抑制芽的形成，所以可推断该培育基中生长素多，细胞分裂素少，B正确。答案B2.(2024·温州选考模拟节选)卡那霉素和头孢霉素都有抗菌作用，此外，卡那霉素还对葡萄细胞有抑制作用。探讨人员将Barnase基因(雄性不育基因)转入葡萄细胞，利用卡那霉素和头孢霉素，通过植物克隆方法胜利培育出大粒、无核的葡萄新品种。请回答：(1)构建含Barnase基因、β－葡糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因的重组质粒，导入农杆菌，在固体培育基中培育形成________以便鉴定是否混有杂菌，再用________将农杆菌转移至LB________培育基中进行扩大培育。(2)将经过________的幼嫩葡萄叶片切成小块，浸入农杆菌悬浮液中，4分钟后取出(此时已有较多农杆菌附着在叶片小块上)并接种到固体培育基中。培育至第3天时，可以看到在叶片小块四周出现________和大量菌落。这时再用头孢霉素处理叶片小块，其目的是________(A.抑制葡萄细胞脱分化B.促进葡萄细胞再分化C.杀灭农杆菌D.促进农杆菌生长)。(3)将叶片切成小块放入卡那霉素培育基中培育一段时间后，转移至生芽培育基中，待其长出________后，再转移至生根培育基中接着培育形成试管苗。卡那霉素培育基起着________作用，植物克隆的技术基础是________。(4)在卡那霉素培育基中，由于转化细胞对四周的非转化细胞有爱护作用，获得的试管苗中可能存在假的转基因试管苗，因此还需对试管苗的________基因的表达产物进行生化检测，才能鉴别出真正的转基因试管苗。(5)最终，对转基因试管苗还需进行渐渐________湿度的熬炼，使之适应自然环境。解析(1)构建含Barnase基因、β－葡糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因的重组质粒，导入农杆菌，在固体培育基中培育形成单菌落以便鉴定是否混有杂菌，再用接种环将农杆菌转移至LB液体培育基中进行扩大培育。(2)将经过消毒的幼嫩葡萄叶片切成小块，浸入农杆菌悬浮液中，然后取出并接种到固体培育基中。培育至第3天时，可以看到在叶片小块四周出现愈伤组织和大量菌落。这时再用头孢霉素处理叶片小块，其目的是杀灭农杆菌，从而获得处理的葡萄叶片细胞。(3)将叶片小块放入卡那霉素培育基中培育获得导入目的基因的葡萄叶片细胞，转移至生芽培育基中，待其长出丛状苗后，再转移至生根培育基中接着培育形成试管苗。卡那霉素培育基起着筛选导入目的基因的葡萄叶片细胞作用，植物克隆的技术基础是植物组织培育。(5)最终，对转基因试管苗还需进行渐渐降低湿度的熬炼，使之适应自然环境。答案(1)单菌落接种环液体(2)消毒愈伤组织C(3)丛状苗筛选植物组织培育(4)β－葡糖苷酸酶(5)降低生长素和细胞分裂素用量比例与根、芽的分化生长素和细胞分裂素比值结果比值高时促进根的分化，抑制芽的形成比值低时促进芽的分化，抑制根的形成比值适中促进愈伤组织的生长eq\a\vs4\al\co1(课后限时训练)(时间：40分钟分数：100分)1.检验饮用水的细菌含量是有效监控疾病发生的必要措施。请回答下列与检验饮用水有关的问题：(1)要测定饮用水中大肠杆菌的数量，常采纳________法，通常将水样进行一系列的梯度________，然后将上述的水样用涂布器分别涂布到________的表面进行培育，记录菌落数量。用该方法统计样本菌落数时________(填“是”或“否”)须要比照组。缘由：__________________________________________。(2)下面所示的四种菌落分布图中，不行能由上述方法得到的是________。(3)大肠杆菌的培育条件是无菌，培育基配制时需加入氯化钠，以维持________。配制培育基时先________(填“调整pH”或“灭菌”)后________(填“调整pH”或“灭菌”)。解析对细菌计数时通常用涂布法接种到LB固体培育基上，必要时要先对菌液稀释再接种。因为须要推断培育基运用之前是否被杂菌污染，所以须要空白比照组。D培育基的培育结果说明是划线法接种的。培育基配制时，添加氯化钠除供应无机盐外还能调整渗透压，配制培育基时通常先调整pH后灭菌。答案(1)涂布分别稀释LB固体培育基是因为须要推断培育基运用之前是否被杂菌污染(培育基灭菌是否合格)(2)D(3)渗透压调整pH灭菌2.(2024·3月稽阳联考节选)回答下列小题：炭疽杆菌能引起人畜患炭疽病。对炭疽病疑似患者，可通过下图所示鉴定炭疽杆菌的试验进行确诊，其中试验组中的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌。(1)若要从炭疽病疑似患者体内分别出炭疽杆菌，可将患者皮肤脓胞渗出物稀释后滴于培育基表面，用无菌玻璃刮刀涂匀，该接种方法称为________。(2)制备图中的液体培育基时需实行________法灭菌。接种可疑菌后，需将三角瓶置于35℃下的摇床上________培育24小时，可疑菌会大量繁殖，液体培育基变浑浊。(3)图中，比照组与试验组试管同时培育6小时后，若试验组液体培育基的浑浊度比比照组________(填“高”或“低”)，则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则解除。此推断的依据是______________________________________。解析(1)将细菌培育液滴于培育基表面，用无菌玻璃刮刀涂匀，这种接种方法称为涂布分别法。(2)培育基一般实行高压蒸汽灭菌法灭菌。液体培育基扩大培育时，需将三角瓶置于35℃下的摇床上振荡培育24小时，细菌大量繁殖，导致液体培育基变浑浊。(3)试验组中的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌，炭疽杆菌大量死亡，使培育基浑浊度降低。答案(1)涂布分别法(2)高压蒸汽灭菌振荡(3)低噬菌体侵染炭疽杆菌，炭疽杆菌数量下降3.(2024·3月宁波模拟节选)回答下列小题：下表是用于从土壤中分别纯化细菌的培育基配方。材料牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂水用量5g10g5g20g1000mL请回答：(1)培育基的类型许多，依据“细菌喜________，霉菌喜________”的原则配制上述培育基后，一般还要调整pH并对培育基进行________处理。(2)分别纯化微生物最常运用的划线分别法中，接种环在菌液中蘸菌液________(A.一B.二C.三D.四)次；若用涂布分别法，则制备细菌悬液时，一般需进行________处理，为确保操作过程不被杂菌污染，接种必需在________旁边操作。(3)假设培育结束后，发觉培育基上菌落连成一片，可能的缘由是什么？(列举一项)___________________________________________________________。解析(1)依据微生物的养分需求，培育基配制原则是“细菌喜荤，霉菌喜素”，培育基配制完成后，一般还要调整pH并对培育基进行灭菌处理。(2)在划线分别法中，接种环在菌液中蘸菌液一次。在涂布分别法中，则制备细菌悬液时，一般需进行稀释处理，为确保操作过程不被杂菌污染，接种必需在酒精灯火焰旁边操作。(3)假设培育结束后，发觉培育基上菌落连成一片，可能的缘由是：稀释倍数不够，菌液的浓度太高；划线时，划完第一次没有灭菌即接着划其次次；培育过程灭菌不严格，受到微生物的污染。答案(1)荤素灭菌(2)A稀释酒精灯火焰(3)稀释倍数不够，菌液的浓度太高(或划线时，划完第一次没有灭菌即接着划其次次；或培育过程灭菌不严格，受到微生物的污染。)4.(2024·10月稽阳联考节选)回答下列小题：为了增加发酵效果，提高秸秆的养分价值，探讨人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素实力进行了探讨。请回答有关的问题：(1)纤维素是植物多糖，它在植物细胞中的作用是________(A.能源物质B.贮能物质C.结构组成成分D.将不同的细胞粘连在一起)。该菌株在生态系统中能促进________循环。(2)用________培育基来扩大培育纤维素酶高产菌株，在将培育基转移到三角瓶或试管中时必需用________，以防止培育基沾到三角瓶壁或试管壁上。为了测定纤维素酶高产菌株的数量可以用________法在培育基上进行测定。(3)刚果红与纤维素形成红色复合物，但并不与纤维素降解产物发生这种反应。探讨人员在刚果红培育基平板上，筛选到了几株有透亮圈的菌落。透亮圈的大小与纤维素酶的________有关。解析(1)纤维素是植物细胞壁的主要成分，是植物细胞结构组成成分。由于纤维素很少能被生物利用，而该菌株能利用纤维素，所以能促进碳循环。(2)通常用液体培育基对菌种进行扩大培育。在将培育基转移到三角瓶或试管中时必需用三角漏斗，以防止培育基沾到三角瓶壁或试管壁上。为了测定菌株的数量可以用(稀释)涂布分别法在培育基上进行测定。(3)由于刚果红不与纤维素降解产物发生反应，所以菌落透亮圈的大小与纤维素酶的数量、活性有关。答案(1)C碳(物质)(2)液体三角漏斗涂布分别(3)数量、活性5.(2024·衢丽湖舟四地模拟节选)请回答黄花蒿植物组织培育的有关问题：(1)黄花蒿的植物组织培育探讨在我国已有数年历史。选取黄花蒿的茎段后，通常用体积分数为70%的酒精等药品对茎段进行________，然后再放入________溶液中浸泡，最终用无菌水冲洗。若外植体不慎被细菌感染，采纳划线分别法纯化细菌，在4个区域内划线须要将接种环灼烧灭菌________次。(2)植物组织培育的培育基可采纳________灭菌。形成愈伤组织的过程中，除需无菌、养分和激素外，________等外界条件也很重要。(3)2～3周后将生长健壮的丛状苗在________(A.LB培育基＋相宜浓度BAB.LB培育基＋相宜浓度NAAC.MS培育基＋相宜浓度BAD.MS培育基＋相宜浓度NAA)上接着生根，形成完整植株。定植前，还需渐渐________进行炼苗。解析(1)植物组织培育时，需对外植体消毒，方法是先后用70%的酒精和5%次氯酸钠溶液浸泡，再用无菌水冲洗。采纳划线分别法纯化细菌，在4个区域内划线须要将接种环灼烧灭菌5次，在每区划线前都须要灼烧接种环，而最终划线完成后还要灼烧接种环，才能结束分别操作。(2)植物组织培育的培育基可采纳高压蒸汽灭菌法灭菌。在形成愈伤组织的过程中，除需无菌、养分和激素外，光照、温度等外界条件也很重要。(3)健壮的丛状苗需在生根培育基上接着生根培育，形成完整植株。生根培育基成分为MS培育基＋相宜浓度NAA，BA可以不加，D正确。定植前，还需渐渐降低湿度进行炼苗。答案(1)消毒5%次氯酸钠5(2)高压蒸汽灭菌法光照、温度(任写一个也可)(3)D降低湿度6.(2024·绿色联盟适应性考试节选)已知某细菌的两种突变类型细菌Ⅰ和细菌Ⅱ的养分条件和菌落特征都相同，但细菌Ⅰ能分解有机物A而不能分解有机物B，细菌Ⅱ能分解有机物B而不能分解有机物A。现有这两种类型细菌的混合液样品，要将其分别，有人设计了一种方案，部分操作步骤如下图。(1)步骤一运用的是________培育基，其中含有细菌生长所需的水、无机盐、碳源和氮源等养分物质，此外还必需加________，以利于对不同菌种进行分别操作。(2)步骤一采纳________方法接种，此接种法可使接种细菌渐渐稀释，经相宜条件培育，可形成单个、独立的________，最终可能得到纯种的细菌；要进行上述接种操作，必需在________及酒精灯火焰旁边进行，以避开杂菌污染。(3)步骤三中，若对其中某瓶培育液中A、B两种有机物含量进行测定，当培育液中检测出如下的试验结果，其中能说明培育液只有细菌Ⅰ的是________。A.化合物A与B含量都明显下降B.化合物A含量明显下降，B含量基本不变C.化合物A含量基本不变，B含量明显下降D.化合物A、B含量都基本不变解析(1)从图中不难知道步骤一是为了分别菌种，分别细菌通常采纳固体培育基，须要向培育基中添加凝固剂(琼脂)。(2)从图中“蛇形线”描述中可知步骤一采纳的是划线分别法，通过划线可以获得单个菌落，从而纯化菌种。(3)由于已知细菌Ⅰ能分解有机物A而不能分解有机物B，所以当培育液中化合物A含量明显下降，B含量基本不变时，可以确定培育液只有细菌Ⅰ没有细菌Ⅱ，B正确。答案(1)LB固体琼脂(2)划线(单)菌落超净台(3)B7.(2024·名校联盟第三次联考节选)请回答野生酵母的培育和分别及果酒制作试验的有关问题：(1)从葡萄多年生长的环境中获得少量土样，配制成土壤稀释液，然后取0.1mL稀释液加入到________培育基中，用________(工具)进行________分别，最终培育得到野生酵母菌。将分别获得的菌种进行诱变培育后，依据不同菌株的________特征，分别筛选出高产谷胱甘肽酵母菌(甲)和低产硫化氢的酵母菌(乙)。试验结束后，运用过的培育基应进行灭菌处理才能倒掉，目的是___________________________________________________________。(2)成熟的紫葡萄，常用________(A.高锰酸钾B.次氯酸钠C.乙醇D.无菌水)溶液浸泡约5min，然后制成匀浆放入发酵罐中，并接种相应菌株，发酵获得高品质的葡萄酒。若向发酵罐中加入肯定量的________，可获得酒精含量和糖含量较高的果酒。解析(1)在进行涂布分别微生物时，须要将稀释的样液0.1mL加到固体培育基上，再用玻璃刮刀匀称涂布，然后进行培育。菌种进行诱变培育后，可依据不同菌株的菌落特征筛选出目的菌株。微生物试验结束后，要对运用过的培育基应进行灭菌处理才能倒掉，这是因为培育基中残留的微生物可能污染环境。(2)酿制葡萄酒时，须要用高锰酸钾溶液浸泡约5min，起到消毒的作用；若向发酵罐中加入肯定量的蔗糖，可获得酒精含量和糖含量较高的果酒。答案(1)固体玻璃刮刀涂布菌落防止造成环境污染(2)A蔗糖8.(2024·7月杭州期末节选)科研人员拟用组织培育繁殖一种粮食作物，其基本过程为“取材→消毒→愈伤组织培育→出芽→生根→移栽”。请回答：(1)用于植物组织培育的离体材料都须要消毒，通常消毒所用的药剂是________。植物组织培育试验中无需运用的设备及用品是________(A.封口膜B.灭菌锅C.酒精灯D.玻璃刮刀)。(2)植物组织培育过程中，发觉培育基上长有多种细菌，若要从中分别出某种细菌，可用接种环挑取少量细菌，在LB培育基上________，形成单________后，再进一步视察确认。(3)在幼苗培育过程中，生根培育基的主要成分是________(A.MS培育基B.MS