微生物的选择培养与计数课件高二下学期生物人教版选择性必修3

配制培养基↓灭菌↓接种↓分离↓培养纯培养物由单一个体繁殖所获得的微生物群体如何从自然界中分离出需要的特定微生物？寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。纯培养一、选择培养基完全培养基完全培养基+青霉素长出各种各样的细菌对青霉素有抗性的细菌对青霉素无抗性的细菌被淘汰怎样选择出对青霉素有抗性的细菌?概念：在微生物学中，允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。怎么证明一个选择培养基具有选择性？

应设置基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作为对照，若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数菌多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性。类型：①利用添加某种化学物质进行选择培养加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌（青霉素能杀死细菌、放线菌,对真菌不起作用）加入高浓度食盐的培养基分离金黄色葡萄球菌②利用改变培养条件进行选择培养70～80℃的高温分离耐高温的水生栖热菌使用将PH调至酸性的培养基分离耐酸菌无氧环境下培养分离厌氧型和兼性厌氧型微生物③利用营养缺陷进行选择培养不加氮源的无氮培养基分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物石油是唯一碳源的培养基筛选出石油降解菌牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g蒸馏水定容到1000ml培养基一KH2PO41.4gNaH2PO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0g蒸馏水定容到1000ml培养基二✔可作为完全培养基（起对照作用）选择哪种培养基更合适？如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？讨论：1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？设计一种选择培养基，用尿素作为唯一氮源，可以将分解尿素的细菌分离出来。这种培养基与普通培养基相比，只是用尿素作为唯一氮源，培养基的其他营养成分（碳源、水、无机盐）基本相同。2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？3.从物理性质来分，该培养基属于什么培养基？为什么固体培养基，因为添加了凝固剂琼脂思考：仅通过选择培养基可以知道1g土壤中有多少能分解尿素的细菌吗？还需要对土样进行适当的处理以及科学的测定微生物数量的方法P18探究实践：能分解尿素的细菌都是异养型微生物，不能利用CO2来合成有机物，可用葡萄糖等有机物作为碳源。

仅通过选择培养基可以知道1g土壤中有多少能分解尿素的细菌吗？分离：获得分解尿素的细菌的纯培养物计数：测定分解尿素的细菌的数量可否直接制备土壤溶液，利用平板划线法接种到选择培养基上，进行培养计数？不能。平板划线法最开始的划线细菌可能会长成一片，导致无法计数，此外灼烧接种环的时候也会杀死一部分细菌。A.梯度稀释菌液

B.涂布平板稀释度足够高时，能在培养基表面形成单个菌落。聚集的微生物菌液梯度稀释涂布平板单个细胞生长繁殖单个菌落

取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要灭菌。操作完成后，一定要洗手。已稀释10倍6支试管，分别加入9ml无菌水（1）注意：多余的酒精在烧杯中滴尽，然后再放在火焰上灼烧。移液枪（2）涂布平板1×107该过程中所有操作都应在酒精灯火焰旁进行；待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37℃的恒温培养箱中培养1～2d，在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。4.稀释涂布平板法和平板划线法的比较方法平板划线法稀释涂布平板法纯化原理接种工具单菌落的获得用途效果图相同点连续划线梯度稀释→涂布平板接种环涂布器从最后划线区挑取稀释度合适的整个平板上都可找到单菌落分离纯化菌种，获得单菌落①分离纯化菌种，获得单菌落②用于计数①都能分离纯化菌种；②都在固体培养基上进行二、微生物的选择培养A104（2）统计菌落数目时，要选择菌落数范围为多少的平板？（3）在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数求平均值的原因是什么？（4）通过此方法统计的细菌的数目与它的实际数目相同吗？①②③④比实际值偏大三、微生物的数量测定1.间接计数—稀释涂布平板法（1）2.直接计数—计数板计数法甲同学做此实验在稀释倍数105获得3个平板，菌落数分别是80、90、100，涂布平板时均使用0.1ml菌液，试计算每克土壤中可以分离尿素的细菌数目？（80+90+100）/30.1×105=9×107个/克2.直接计数—计数板计数法（1）原理：利用细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积样品中微生物的数量。血细胞计数板：细菌计数板：常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。对细菌等较小的细胞进行观察和计数。三、微生物的数量测定土壤是微生物的天然培养基，下面是有关土壤中分解尿素的细菌的分离和计数的实验过程，请根据下图回答相关问题。（1）为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用

的选择培养基进行分离。

（2）若取土样5g，应加入

中配制成1×101倍稀释的土壤溶液。因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配制成如上图所示的不同浓度的土壤溶液。取样稀释前，一定要

以减少误差。

稀释倍数1×1031×1041×1051×1061×107平均菌落数>5003672482618以尿素为唯一氮源45mL无菌水摇匀（振荡、混匀）课堂练习稀释倍数1×1031×1041×1051×1061×107平均菌落数>5003672482618（3）从1×103~107倍稀释的稀释液中分别吸取0.1mL加到固体培养基上，用

将其分散，每个浓度稀释液至少接种

个平板，以减少实验误差。（4）将接种的培养皿

在30-37℃的