长春中医大《中药化学》实验指导

实验报告

通过实验将书本上的理论知识运用到实际当中，最终通过写

实验报告，总结实验的过程、原理及意义，最终把理论知识用于

实践，并通过实验结果补充理论知识真正做到理论和实践相结

合，而这一结合的体现是撰写实验报告。根据本课程的特点现将

实验报告要求总结如下：

一、实验题目

一按实验讲义写。

二、实验原理

一提取、分离、TLC检识的原理分别写。

三.实验流程与解析

——按实际操作写，解析主要要求说明所操作步骤的原因

及注意事项。

四.实验步骤

——根据实验流程写，并写出注意事项，并表明哪步是自

己做的。

五.实验结果

——产率（计算）、试管反应现象（描述）、薄层图（画或

照片，并标示Rf值）

六、小结及讨论

1、对产率分析：理论应得多少，实际得了多少，并对其进行

分析；

2、对试管反应现象：解释，并说明可以推测的结果；

3、薄层图:对色谱图解释，如色谱原理、展开剂、显色剂，Rf

比较。

连续回流提取法操作规程

一、安装前检查（20分）

1.装置组成（各部件名称准确）

（1）玻璃仪器部分：三部分组成，烧瓶、索氏提取器（虹吸管、蒸气上升管）、

冷凝管

（2）固定装置部分：铁架台、双顶丝（自由夹）、万能夹

（3）热源：（种类及温度）根据溶剂选热源及控制温度（水浴锅、电热套）

（4）其他：滤纸、乳胶管、银子

2.装置是否干净：干净的判断标准（干燥、无水痕）

3.装置有无破损（尤其注意磨口处、虹吸管、冷凝管）

4.装置是否匹配：索氏提取器部分的大小决定烧瓶大小

5.装置是否干燥，若不干燥特别是磨口若不干燥，用乙醇或甲醇或丙酮润洗后吹

干或晾干。

二、安装设备（20分）

1.整体安装位置确定：注意根据热源、冷凝水位置确定具体安装位置及铁架台位

置

2.玻璃仪器部分从下至上安装，冷凝管斜口对着蒸气上升管

3.目测双顶丝和铁架台的位置后，将双顶丝安装在铁架台上，不合适可以微调

4.将圆底烧瓶（带有水浴锅保温圈）与万能夹相连，万能夹要固定在圆底烧瓶

和索氏提取器的磨口处

5.将万能夹固定在铁架台上的双顶丝部分，高度不合适可以微调

6.水浴锅水的加入量和加入时间：不要加满，应该在装置安装完毕后补加水，

以免烧瓶漂起，加水量为烧瓶三分之二处。

7.•系统稳定性相关-万能夹的方向一致；重心与铁架台平行

8.打开冷凝水之前，要先检杳水笼头是否有水，有气，流速大小，以决定提取

时冷凝管水流大小。

三、灌纸筒填装（20分）

1.滤纸包的叠法：原则保证不漏

2.滤纸包的高度：应低于蒸汽上升管

3.装药量：药材粉碎成粗粉；高度低于虹吸管

4.装药后滤纸包封口

四、如何加入提取溶剂（20分）

1.加入时间：加入滤纸包及冷凝管安装完毕后加入，从冷凝管上方放置漏斗加入。

2.加入量：加入溶剂量不少于1个半虹吸量，不超过2个虹吸量（结合烧瓶体

积），溶剂量过少难以完成提取，过多增加回收时间，同时受圆底烧瓶体积的限制，

注意不同规格装置加入量是不同的。需要根据提供的装置预判加入量，因此需要理解

加入量是如何确定的。

3.加入位置：从冷凝管加入，用三角漏斗，或从装药筒加入，用三角漏斗：冷凝水

打开循环，防止溶剂挥散。

4.提取终点的确定方法

五、器材整理（20分）

1.提取完毕后先关闭水浴锅，再拔下水浴锅电源；待溶剂从冷凝管不滴后再关冷

凝水

2.拆仪器与安装顺序相反

3.滤纸包用银子夹出后置密闭容器中暂放，待处理。

4.取出盛有提取液的烧瓶，用磨口塞或胶皮塞塞上后待回收，防止溶剂挥散到

空气中（比赛时如果有时间,可直接利用该装置回收溶剂）

5.刷洗玻璃仪器（尤其是虹吸管部分如何涮洗，用少量乙醇洗涤，用蒸储水冲

洗）、晾干、整洁归位。

操作考试实例：请完成下列采用连续回流提取部分实验操作

穿山龙粗粉（50g）

置圆底烧瓶中,加水250ml、浓硫酸20ml,室温浸泡24小

时，文火加热回流4~6小时，放冷，倾出酸水液。

酸性药渣

用清水漂洗3次，然后将药渣倒入乳钵中，加Na2c03粉末，

反复研磨，调pH至中性，水洗，抽干。

中性药渣

1低温（80℃）干燥12小时。

干燥药渣

I置乳钵中研成细粉，置索氏提取器中，以石油酶（60~90℃沸

।程）为溶剂，连续回流提取4~5小时。

石油醯提取液

回收石油酸至剩时，迅速倾入小三角烧瓶中,放置

使充分冷却，过滤。

滤液沉淀

I用少量冷石油酸洗二次抽干。

薯藤皂首元粗品

硅胶或聚酰胺薄层检识SOP

一、准备工作（20分）

L供试品溶液及对照品溶液制备

（1）供试品溶液制备：经提取分离后得到待检识成分，如果是已知化合物，溶解

的溶剂选择可根据该化合物的溶解性选择溶剂溶解样品。如果是亲脂性成分（如挥发

油、游离的生物碱、香豆素甘元、葱醍昔元、黄酮甘元），除选择甲醇或乙醇溶解样

品，可选择甲醇、乙醇、三氯甲烷、乙酸乙酯溶解样品制成溶液，但不宜选择沸点较

低的乙醛溶解样品；如果是亲水性的成分（昔类化合物），常选择甲醇、乙醇或丙酮

溶解样品，但不宜选择沸点较高的正丁醇溶解样品。注意通常不易选择水溶解样品。

如果是未知化合物，可参考提取分离过程中选择的溶剂判断。

（2）对照品溶液制备：同上。

注意事项：样品与对照品要配制成溶液，吸取溶液点样，不要将混浊液或固体物

点到薄层板上。溶液制备是影响薄层效果的重要因素。

2.仪器与材料的准备

（1）薄层板：市售薄层板分普通板和高效薄层板，常用硅胶薄层板、硅胶GF254

薄层板、聚酰胺薄膜等。在保证色谱质量的前提下，如需对薄层板进行特别处理或化

学改性，以适应分离要求，可以选择自制薄层板。

市售薄层板使用前处理：如需要，硅胶板临用前••般应在110P活化30分钟。聚

酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板可根据需要剪裁，但需注意剪裁后的薄层板底部的

硅胶层不得有破损。如存放期间被空气中杂质污染，使用前可用三氯甲烷、甲醇或二

者的混合溶剂在展开缸中上行展开预洗，u（rc活化，置干燥器中煤存备用。

自制薄层板：①玻板要求：应光滑、平整。用温热洗衣粉水涮洗后、用自来水冲

洗干净，再用蒸馀水冲洗至不附水珠，置干燥洁静处晾干，备用。必要时铺板前用乙

醇擦试后铺板。②称取吸附剂（硅胶或硅胶GF254,200~300目）置乳钵中，按1:3比

例加0.3%〜0.5%竣甲基纤维素铜水溶液（或水），在研钵中按同一方向研磨混匀（目

的避免产生大量气泡），研磨时间一般不超过4分钟（以研杵沾取有粘稠感），倒入

涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(厚度0.3mm和0.5mm),取下涂好

薄层的薄板，置水平台上于室温下晾干后，在110'C活化30分钟，即置有干燥剂(如

变色硅胶)的干燥箱中备用。

使用前检查其均匀度，在反射光及透视光下检查，表面应均匀、平整、光滑、无

麻点、无气泡、无破损及污染。

(2)点样器：①定性和定量微升毛细管；②手动、半自动、全自动点样器材。

(3)展开容器：称为展开缸(层析缸)。上行展开一般可用适合薄层板大小的专

用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭。水平展开时用专用的水平展开缸。

(4)显色装置：喷雾显色用①玻璃喷雾瓶；②专用喷雾器。采用脚踏式或电动装

置压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出。浸渍显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开

缸代用；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。

(5)检视装置：装有可见光、254nm及365nm紫外光光源及相应滤光片的暗箱，

可附加摄像设备供拍摄图像用，暗箱内光源应有足够的亮度。

(6)其他：配制展开剂溶剂、电吹风、铅笔、格尺、移液管、分液漏斗、垃圾

缸。

二、点样(20分)

1.实验材料准备：将供试品溶液、对照品溶液、薄层板、点样器(毛细管等)、

电吹风、格尺、铅笔摆放在洁净干燥的实验台上，并注意光线、高度及周围环境等是

否适合点样，实验者端坐在试验台旁。

2.定位：定位用铅笔，不要用其它笔标记位置。预制板或自制板点样基线距底边

10mm~15mm5cm),高效板一般基线距底边8mm~10mm(0.8cm~1cm),具体

用铅笔在两侧先确定，然后连接两点成直线，保证点样样品在一条直线上；点间距离

可视斑点扩散情况以相邻斑点互相不干扰为宜，一般不少于8mm(0.8cm)，高效板

不少于5mm(0.5cm)；点样圆点状直径一般不大于3mm；高效板不大于2mm；条

带状宽度一般为5mm-10mm(0.5cm-1cm)；高效板条带状宽度一段为4mm~

8mm(0.4cm〜0.8cm),可用专用半自动或自动点样器械喷雾法点样。

3.点样注意：①接触点样时注意力度，勿损伤薄层表面；②根据点样量要求，选

择合适的毛细管（或其他点样器）一次性将溶液取足量，尤其定量时最好要一次性取

量；③根据点样量及圆点大小决定点样次数，如果需要多次点样，应将前次点样溶液

用吹风吹干后再次上样，以避免斑点扩散出现复斑或拖尾现象，用电吹风时，先预测

一下风力和温度，必要时用凉风，注意将实验台上实验材料吹落或温度过热。

4.点样后整理：点样后将毛细管置垃圾缸中，供试品溶液和对照品溶液等实验材料归

位放好，再进行展开。

三、展开剂配制（20分）

1.实验材料准备：①干净和干燥的展开缸，检查是否密闭，如果密闭性差，在边

缘涂少许凡士林，注意不要污染层析缸；②不同规格干净及干燥专用移液管：③分析

纯溶剂；④如果用展开剂需要分层，则需要干净及干燥的分液漏斗；⑤展开缸的干燥

不要用烘箱加热烘干或用热风长时间吹干。

2.展开剂取量确定：根据层析缸规格，按比例配制的总量应以将点好的薄层板放

入层析缸中，浸入展开剂的深度为距原点5mm（0.5cm）为宜，切记不要浸泡或超过

原点。

3.展开剂配制：按上述确定取量，用移液管吸取溶剂。如果展开剂不分层［如氯仿-

甲醇（8:2）］,吸取后直接放入层析缸中（如果是双槽，放入一侧），迅速密闭，展开

剂如果需要饱和，则可以在点样前将展开剂配好静置；如果展开剂分层［如氯仿■中静-

水（65:35:10）下层］,则应在分液漏斗中配制，分层后取上层或下层。

4.预平衡与蒸气饱和：展开前如需要溶剂蒸气预平衡，可在展开缸中加入适量展

开剂，密闭，一般保持15~30分钟，溶剂蒸气预平衡后，应迅速放入载有供试品的薄

层板，立即密闭，展开。如需展开缸达到溶剂蒸气饱和的状态，则需要展开缸的内侧

放置与展开缸内侧放置与展开缸的内径同样大小的滤纸，密闭一定时间，使达到饱和

再如法展开。

5.展开：将点好供试品与对照品的薄层板放入展开缸，密闭，上行展开，一般展

距8〜15cm,高效薄层板上行展开5~8cm。溶剂前沿达到规定的展距，取出薄层板,

晾干，待检测。

四、显色（20分）

1.日光下检视：有颜色或显色成分后检视：供试品含有可见光下有颜色的成分可

直接在日光下检视，也可用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色，或加热显色，在日

光下检视。

2.紫外光下检视：有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的物质可在365nm紫外

光灯下观察荧光色谱；对于可见光下无色，但在紫外光下有吸收的成分可用带有荧光

剂的硅胶板（如硅胶GF254板），在254nm紫外光灯下观察荧光板面上的荧光猝灭物

质形成的色谱。

五、结果检识

1.记录：薄层色谱图像一般可采用摄像设备拍摄，以光学照片或电子图像的形式

保存。

2.计算Rf值：Rf二斑点中心与原点距离（cm）/原点与前沿的距离（cm,展距），

目的判断斑点位置，表示各组成成分的位置。

3,斑点颜色描述：（1）置可见光下观察，可见不同颜色斑点：（2）置紫外光灯

（365nm）下观察，可见不同颜色的荧光斑点；（3）置紫外光

灯（254nm）下观察，可见荧光淬灭斑点（以硅胶GF254为吸附

剂）

4.结果专业术语描述：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色

（或荧光）斑点。

六、器材整理（20分）

1.展开剂倾入废液缸内，不要倒入下水道或其它地方，通风朝中晾干（必要时刷

洗干净）。

2.薄层板记录结果后，将硅胶板用水浸湿，刷洗干净，晾干，备用。

3.将其他实验器材归位，将垃圾缸中垃圾倒掉。

实例1:

层析板：自制硅胶-CMC硬板

样品：精品总碱氯仿液

对照品；氧化苦参碱的氯仿溶液

展开剂：氯仿：甲醇：氨水（15：4：0.5）

显色剂：改良碘化钮钾试剂

实例2：

吸附剂：硅胶-CMC薄层板（预制板）

样品：5%自制薯薪皂昔元的乙醇液（点样量3

对照品：5%薯藤皂昔元对照品的乙醇液

展开剂：苯：乙酸乙酯（8：2）

显色剂：25%磷铝酸的乙醇溶液（喷洒后110℃加热5分钟）

实例3：大黄中葱醍类成分薄层色谱鉴别

实例4芦丁和柳皮素薄层色谱鉴别

硅胶柱层析分离SOP

材料与仪器

玻璃仪器：色谱柱、三角烧瓶、量筒、玻璃棒、烧杯、胶头滴管

固定部分：万能夹、双顶丝

收集样品：自动收集器或试管（带试管架）

第一部分准备阶段

第1步认真读题签3遍，注意指令中数量要求，避免发生称量错误。

第2步观察实验环境，注意给出的材料与仪器。

第3步在大脑中将装置图重现出来，并注意第一步操作。

第二部分实验部分

第1步涮洗玻璃仪器。对所有用到的玻璃仪器都应是干燥的。

将实验中需要的玻璃仪器取出与用自来水及洗涤剂清洗（如果竞赛时间不

够，这步可能会省略，注意现场提示）玲再用蒸僧水冲洗3次（用洗瓶中蒸

僧水）少用洗瓶中乙醇冲洗2次（清洗液倒入废液缸，不要倒入水池中）玲

用吹风吹干（电吹风或气流干燥器），干净干燥后，备用。

第2步吸附剂硅胶处理

1.称取硅胶：

（1）如果指令中有称取量，则直接称取;

（2）如果指令中没给出用量，而给出样品量，则样品与硅胶通常用量比为

1:30〜60g（如果指令中提示样品分离难易程度，可依此选择，难分离

者则硅胶用量增多）色谱分离硅胶通常为100〜200目。

（3）具体步骤：将天平调平好将合适的干燥烧杯置天平上3扣重玲轻轻加

入硅胶（避免粉尘洒落到天平或实验台上，接近称样量时再轻轻抖

腕），记录取量玲取下烧杯玲关闭天平（如果后续还需要称量，此时

先不拔电源）

2.按给出洗脱剂的条件配制洗脱剂

按比例先计算用量，用合适的量筒取溶剂，置合适的锥形瓶中配制（注意锥

形瓶不能过小，避免振摇混合不均匀）（注意试剂瓶盖放的位置；试剂瓶标签

方向；洒在实验台上；放平观察是否到刻度；如果不到刻度，用干净干燥补

一、色谱柱安装（20分）

1.选择合适色谱柱：色谱柱为内径均匀、下端（带或不带活塞）缩口的硬质玻璃

管。

2.将色谱柱固定在铁架上（或铁架台）上，垂直、稳定。

3.端口或活塞上部铺垫适量脱脂棉或玻璃纤维。

4.色谱柱规格：高度与直径比〔15:1〜（20:1）

二、硅胶填装（20分）

1.柱色谱硅胶：颗粒大小均匀,通常直径为0.07~0.15mm的颗粒。

2.干法装柱：将硅胶通过漏斗装入柱内,中间不应间断,形成一细流慢慢加入管

内。也可用橡皮槌轻轻敲打柱硅胶柱使硅胶装填连续均匀、紧密。柱装好后,打开下

端活塞，然后倒入洗脱剂洗脱以排尽柱内空气，并保持一定液面。

3.湿法装柱：将最初准备使用的洗脱剂装入柱内，打开下端活塞，使洗脱剂缓慢流

出。然后把硅胶慢慢连续不断地倒入柱内（或将硅胶与适量洗脱剂调成混悬液慢慢加入柱

内，），硅胶依靠重力和洗脱剂的带动，在柱内自由沉降，此间要不断把流出的洗脱剂加

回柱内保持一定的液面，直至把硅胶加完并在柱内沉降不再变动为止。然后在硅胶上面加

一小片滤纸或少许脱脂棉。根据加样量控制洗脱剂液面至一定高度。

三、上样（液体）（20分）

1.湿法上样：用少量溶剂（最好就是展开剂，如果展开剂的溶解度不好，则可以

用一极性较大的溶剂，但必须少量）将样品溶解后，再用胶头滴管转移得到的溶液，

沿着层析柱内壁均匀加入，用少量溶剂洗涤后，再加入。

2.干法上样：如样品不溶于装柱时用的洗脱剂，将样品溶于易挥发的溶剂中，并

加入适量硅胶（不超过柱中硅胶全量的1/10）与其拌匀，除尽溶剂，将拌有样品的硅

胶均匀加到柱顶（始终保持洗脱剂有一定的液面），再覆盖一层硅胶即可，上样时注意

沿着柱内壁慢慢加入，始终保持硅胶上端表面平整；上样量为硅胶的1/60~1/30。

四、洗脱剂配制及加入、洗脱（20分）

（I）洗脱剂的确定：可通过薄层色谱筛选，一般TLC展开时Rr值为0.2~0.3的溶

剂系统是最佳的洗脱系统，采用梯度洗脱法洗脱。

（2）洗脱剂组成：可用单一溶剂、混合溶液，通常一般不超过三种溶剂。

（3）流速控制：先打开柱下端活塞，保持洗脱剂流速1〜2滴/秒，上端不断添加洗

脱剂（可用分液漏斗控制添加速度与下端流出速度相近）

（4）洗脱：采用梯度洗脱，洗脱剂的洗脱能力由弱到强逐步递增。

五、器材整理

1.完成分离后，将吸附剂从柱子用取出，涮洗色谱柱，归位。

2.将接收微分的小三角烧瓶或试管编号，进行TLC色谱，合并相同微分。

3.将所用玻璃仪器涮洗归位。

渗滤法SOP操作

渗滤法是将天然药物粗粉装入渗滤筒内，加适量提取溶剂，使药材完全浸透后，

将浸出液从下口缓缓放出，并不断添加新溶剂，直到提尽所含有效成分为止的一种提

取方法。

基本步骤：粉碎-浸润分装筒T排气少浸渍3渗漉T收集渗漉液

一、主要装置

渗漉筒：渗漉筒有圆柱形和圆锥形二种，筒的长度为筒直径的2-4倍；

圆锥形渗漉筒适合提取膨胀性大的药材；圆柱形渗漉筒适合提取膨胀性

小的药材。

其他：万能夹、自由夹、铁架台、脱脂棉、玻璃棒

二、药材处理

第1步：药材粉碎成粗粉124目）或酌予破碎，置烧杯中用薄膜密封（或置有盖

的容器中）；

第2步：加提取溶剂，搅拌浸润（注意：控制溶剂量，不是浸泡），密闭，使药

材充分膨胀后备用（由于浸润需要时间，故比赛时可能会提供处理好的

药材）。

三、装渗漉筒

第1步：将铁架台置实验台面，摆放整齐，一次定位，不要再移动

第2步：先在铁架台上固定合适铁圈，上面固定对顶丝，将万能夹与渗漉筒连

接，垂直固定；

第3步：将脱脂棉用提取溶剂润湿（脱脂棉的厚度为一层），置渗漉筒底部，打

开螺旋夹，再加入提取溶剂，排除脱脂棉中气泡及下面乳胶管中的气泡，在乳胶管充

满溶剂时夹紧，渗漉筒内剩余溶剂用量以没过脱脂棉为准，不要明显看到有液体；

第4步：将已膨胀的药材粗粉分次加入，加入高度1cm,每次加入应均匀压平，

同时排除气泡；下部药粉宜粗些，装得稍松些，上部药粉宜细些，装得稍紧一些，不

超过渗漉筒的2/3；

第5步：上面盖上滤纸或纱布，并压上重物，以防止加溶剂时药粉被冲浮起来；

四、排气

第1步：装筒完毕后，打开渗漉筒下口的螺旋夹，向筒内缓缓加入溶剂，并排除

筒内剩余空气：

第2步：在乳胶管充满溶剂时关闭螺旋夹，将流出的溶剂再倒入筒内，继续添加

溶剂至高出药粉5厘米，加盖浸泡24小时~48小时，使溶剂充分渗透

扩散（由于时间原因，实际比赛时筒内浸泡无法完成）

五、收集渗漉液

第1步：打开螺旋夹使渗漉液缓缓滴下，此处需控制渗漉速度2~3ml/分钟（或一

般流速以10（X）g药粉计算，每分钟流出3〜5mL为宜）；

第2步：（1）渗漉液的颜色极浅；

（2）渗漉液的体积相当于原药材的10倍时，便可以认为已基本提取完

全；

（3）用TLC或化学检识跟踪

根据比赛时间，比赛时可能会给出接收体积

第3步：将渗漉液用锥形瓶收集，密封保存备用（注意放置到合理位置）。

六、整理

第1步：拆卸渗漉筒，将药材残渣倒置烧杯中，渗漉筒内如果有残渣，用少量水

冲洗倒入烧杯中，并密闭待处理（应把溶剂挥散掉再倒入垃圾桶内）；

第2步：（1）将渗漉筒及玻璃仪器涮洗干净，用洗瓶中乙醇冲洗，再用蒸储水冲

洗干净，摆放整齐；（冲洗乙醇要倒入废液缸，不要倒入水池内）

（2）将万能夹、自由夹及铁架台等归位并摆放整齐。

提示：（1）认真读题签，注意要求的称样量、体积等数值：

（2）观察给出的仪器装置，在大脑中形成装置的图形，迅速想出步骤后再

安装，尤其注意第一步；

（3）渗漉筒下面一直要放锥形瓶；

（4）操作过程要保持台面清洁，不要将药渣或溶剂洒在实验台上。

实验操作复习提纲

实验操作环节:

一、乙醇的稀释（包括计算、操作）

二、硫酸的稀释（包括计算、操作）

三、滤过（自然过油、抽滤）操作

四、水解过程及装置

五、减压回收装置名称及操作

六、萃取操作

七、重结晶操作/影响结晶的因素/结晶不析出的解决办法

八、薄层板铺制