供厦动物源性食品中129种兽药药残留的测定液相色谱-串联质谱法

1供厦食品动物源性食品中129种兽药残留量的测定液相色谱-串联质谱法本文件规定了动物源食品中129种兽药（硝基咪唑类、苯并咪唑类、β-受体激动剂类、磺胺类、沙星类、激素类、头孢类、大环内酯类、砜类药、抗寄生虫类、镇静剂类）残留的液相色谱-串联质谱检测方法。本文件适用于动物肌肉、水产品、蛋、奶等动物源食品中129种兽药残留的测定，其他动物源食品可参照执行。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。3术语与定义本文件没有需要界定的术语和定义。4方法提要试样中目标物用5%甲酸乙腈溶液提取，经QuEChERS净化，氯化钠和无水硫酸钠盐析，取上层有机相氮吹至干，用0.1%甲酸水-乙腈（80+20，V:V）溶液复溶，液相色谱-串联质谱检测分析。外标法定量分析。5试剂材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水符合GB/T6682-2008规定的一级水。5.1乙腈（CH3CN色谱级。5.2甲醇（CH3OH色谱级。5.3甲酸（CHOOH色谱级。5.4乙酸铵（CH3COONH4）。5.55%酸化乙腈：取甲酸5mL，用乙腈稀释并定容至100mL，混匀。5.6200mmol/L乙酸铵水溶液：称取3.1g乙酸铵并溶解在200mL水中，混匀。5.75mmol/L乙酸铵水溶液：移取12.5mL200mmol/L乙酸铵水（5.6）溶液到500mL容量瓶，用水稀释并定容至500mL，混匀。5.80.1%甲酸水-乙腈（80+20，V:V）溶液：取1mL甲酸，800mL一级水，200mL乙腈混25.90.2%甲酸水溶液：取甲酸2.0mL，用水稀释并定容至1000mL，混匀。5.100.2%甲酸乙腈溶液：取甲酸2.0mL，用乙腈稀释并定容至1000mL，混匀。5.11标准品：硝基咪唑类、苯并咪唑类、β-受体激动剂类、磺胺类、沙星类、激素类、头孢类、大环内酯类、砜类药、抗寄生虫类、镇静剂类等标准品的具体信息参见附录A表A.1。5.12标准储备液：参照附录A表A.1的分组，分别准确称取10mg(精确到0.1mg)129种兽药标准品，并用推荐的溶剂溶解并稀释到1.0mg/mL，或购买商品化的混标溶液。-18℃以下避光冷冻保存，保存期为12个月。其中大环内酯类药物保存期为2个月，头孢类药物现配现用。5.13混合标准工作液：根据方法定量限的浓度，准确量取各组标准储备液（5.12）适量，加入空白样品提取液中并氮吹干，用0.1%甲酸水-乙腈溶液（5.8）定容至合适浓度。混合标准工作液现配现用。5.14EMR-LipiddSPE萃取管：15mL离心管中含1g预先称重的吸附剂或相当者。肌肉、水产品基质萃取管活化：移取5.0mL5mmol/L乙酸铵水溶液（5.7）到15mLEMR-LipiddSPE管dSPE管中，快速振摇并涡旋2min(2500r/min)。5.15EMRpolish粉包：仅无水硫酸镁或相当者。5.16滤膜：0.22μm再生纤维滤膜或相当者。5.17离心管：50mL。6仪器和设备6.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。6.2分析天平：感量0.01mg和0.01g。6.3组织匀浆器。6.4离心机：转速可达8000r/min。6.5超声波震荡器。6.6涡旋振荡器。6.7涡旋混合器。6.8氮吹仪。6.9组织捣碎机。7试样制备与保存7.1试样的制备7.1.1肌肉、水产：随机取原始样品，去除不可食部分，取出有代表性样品约500g。用组织捣碎机充分捣碎混匀，装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。7.1.2牛奶：从原始样品取出有代表性样品约500g，充分混匀，装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。7.1.1鸡蛋：从原始样品取出有代表性样品约500g，去壳后用组织捣碎机搅拌充分混匀，装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。7.2试样贮存3将制备好的试样分成2份，作为测试样和留样，于-18℃密封贮存。注：在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生8分析步骤8.1前处理8.1.1提取称取试样5g，精确至0.01g，于50mL离心管中，先加入1.0mL水和两粒陶瓷均质子（注：肝脏、蛋液、牛奶可省去加水步骤操作涡旋混匀，再加入10.0mL5%甲酸乙腈（5.5）提取液，盖好盖子，手动快速上下振摇将组织分散后，涡旋(2500r/min)提取5min，离心8.1.2净化移取8.0mL离心后上层提取液到经过活化的EMR-LipiddSPE管中（注：蛋液、牛奶取10.0mL快速振摇并涡旋2min(2500r/min)离心5min(8000r/min)；先加入两粒陶瓷均质子到50.0mL空离心管中，然后将上一步骤上层液完全倾倒到对应的离心管中，最后加入EMRpolish粉包，快速剧烈振摇并涡旋2min(2500r/min)离心3min(8000r/min)，收集上层有机相5.0mL于40℃下氮吹干，加入0.1%甲酸水-乙腈溶液（5.8）定容至1.0mL，涡旋混匀30s，超声2min后，过0.22μm再生纤维微孔滤膜，上机测定。8.1.3基质匹配工作溶液按(8.1.1)和(8.1.2)所述方法处理制备基质空白溶液，取各组标准工作溶液适量加入提取液中，氮吹至干，加入0.1%甲酸水-乙腈溶液（5.8）定容至1.0mL，配制成合适浓度的基质匹配工作溶液。8.2测定8.2.1液相色谱条件b)流动相：A：0.2%甲酸水溶液；B：0.2%甲酸乙腈。表1梯度洗脱程序表流动相B%3355338.2.2质谱条件4待测药物定性离子、定量离子、去簇电压和碰撞能量参考值见附录B表B.1。8.3空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。8.4定性测定在同样的测试条件下，试样溶液的保留时间与标准溶液保留时间的偏差应在±2.5％之内；试样溶液中的离子相对丰度与标准溶液中的离子相对丰度相比，符合表2的要求。表2试样溶液中离子相对丰度的允许偏差范围>50>20～50>10～208.5定量测定取试样溶液和基质标准工作液，作单点或多点校准，按外标法定量。基质标准工作液及试样溶液中目标物的响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述液相色谱-串联质谱条件下，标准溶液中各特征离子质量色谱图见附录C中的图C.1。9结果计算和表述试样中各待测组分残留量按公式(1)计算：式中：X——试样中各待测组分残留量的数值，单位为微克每千克(μg/kg)；C——试样溶液中各待测组分残留量浓度的数值，单位为纳克每毫升(ng/mL)；V——溶解最终残余物体积的数值，单位为毫升(mL)；m——供试试样质量的数值，单位为克(g)。R——供试试样操作过程中分取比例。10检测方法的灵敏度、准确度和精密度10.1灵敏度5本方法对动物肌肉、水产品、蛋、奶中β-受体激动剂、砜类药、镇静剂、硝基咪唑类、激素类、大环内酯类、抗寄生虫类、苯并咪唑类、磺胺类、沙星类、头孢类的检出限与定量限见表3。表3各类化合物的检出限与定量限10.2准确度本方法对动物肌肉、水产品、蛋、奶等样品做添加回收试验，各类化合物的添加水平及回收率范围见表4。表4各类化合物的添加水平及回收率范围10.3精密度本方法批内相对标准偏差≤20％，批间相对标准偏差≤20％。6附录A（资料性附录）129种化合物的分组、中英文名称、分子式、CAS号表A.1129种化合物的分组、中英文名称、分子式、CAS号C5H7N3O2NMMNI-H3C5H7N3O3C6H9N3O3C6H9N3O3ronidazoleC6H8N4O4C10H7N3OSC14H11N3OC14H10FN3OAlbendazolesulfoneC12H15N3O3C12H15N3O3SAlbendazole-2-aminosulfoC12H15N3O2SC15H13N3O4SC14H14N4O2SC16H12FN3O3C15H13N3O3SC16H13N3O3C16H15N3O3C12H15N3O4SC15H13N3O2SC10H7N3SC10H13N3O2SC14H9Cl3N2OS7表A.1129种化合物的分组、中英文名称、分子式、CAS号bambuterolC18H30ClN3O5brombuterolC12H18Br2N2OC12H17N3OC13H19N3OCl2H18Cl2N2OC14H20Cl2N2O2·HClC13H21Cl3N2OC11H16Cl2N2OC11H16ClNOC17H22BrNO4hydroxymethylclenbuterC12H18Cl2N2O2mabuterolC13H18ClF3N2O·HClC14H20ClF3N2O·HClpenbutololC18H31NO6SC18H23NO3·HClritodrineC17H21NO3·HClC13H21NO3C12H19NO3C12H18ClNOC14H19N3O2phthalylsulfathiazoleC17H13N3O5S2C13H12N2O3SC8H10N2O3SC10H9ClN4O2SC10H9ClN4O2S8表A.1129种化合物的分组、中英文名称、分子式、CAS号C10H10N4O2SC12H14N4O4SC12H14N4O4SC11H12N4O2SC11H12N4O3SC12H14N4O2SC9H10N4O2S2C10H11N3O3SC11H12N4O3SC11H12N4O3SC11H13N3O3SC14H13N3O5SC15H14N4O2SC11H11N3O2SC14H12N4O2SC9H9N3O2S2C12H14N4O2SC11H13N3O3SC14H18N4O3C17H18FN3O3C19H20FN3O3·CH4O3SC21H19F2N3O3·HClC15H17FN4O3C19H22FN3O3C17H18F3N3O3C14H12FNO39表A.1129种化合物的分组、中英文名称、分子式、CAS号C17H19F2N3O3·HClC17H19FN4O4NorfloxacinC16H18FN3O3C18H20FN3O4C19H20F3N3O3C13H11NO5C17H20FN3O3·CH4O3SC20H17F2N3O3·HClC19H22F2N4O3C23H32O4C21H30O3C21H30O2C22H29FO5C19H26O2C23H29ClO4C22H27NO2C20H29FO3C21H28O2C18H19NaO5SMedroxyprogesteroneC24H34O4C24H32O4C23H30O3C20H30O2NandroloneC18H26O2NorethindroneC20H26O2表A.1129种化合物的分组、中英文名称、分子式、CAS号C21H30O2C21H32N2OC19H28O2C18H22O2C16H17N3O4SC14H14N8O4S3C25H27N9O8S2C16H17N5O7S2C23H24N6O5S2·H2SO4C17H17N3O6S2C16H19N3O4SC38H72N2O12C38H69NO13C18H33ClN2O5SjosamycinC42H69NO15C39H65NO14C18H34N2O6SC35H61NO12C17H31ClN2O5SC46H80N2O13C46H77NO17C12H12N2O2SN-乙酰氨苯砜N-AcetylDapsoneC14H14N2O3S表A.1129种化合物的分组、中英文名称、分子式、CAS号C7H11N3O2C7H11N3O3C11H12N2SC19H24N2O2C17H19ClN2SC16H13ClN2OC16H14N2O（资料性附录）质谱仪参数（1）B.1质谱扫描方式：电喷雾正离子扫描（ESI+B.2检测方式：多反应离子监测(MRM)；B.3碰撞气、雾化器和干燥气均为氮气；B.4电喷雾电压：5500V；B.6辅助气1：50psi；B.7辅助气2：60psi；B.8气帘气：30psi；B.9碰撞气：Medium。表B.1药物名称、保留时间、定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量12唑NMMNI-H33456789唑啶ritodrine8唑Norfloxacin砜唑嗪唑唑唑bambuterolbrombuterolmabuterolphthalylsulfathiazole砜N-AcetylDapsonepenbutololjosamycinNandroloneNorethindrone酮酮酮(1)非商业性声明：附录B及表B.1所列参考质谱条件是在AB5500Q质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。（资料性附录）各组分药物特征离子质量色谱图基质标准溶液中各组分药物特征离子质量色谱图见图C.1。1.MNZOH5.Terbutaline226.2/152.09.Ronidazole201.2/140.013.Cephapirin2.NMMNI-H36.Salbutamol240.2/148.110.Sulfacetamide14.Sulfamethazine18.Fenoterol3.Metronidazole172.2/127.97.zipaterol262.2/185.011.Thiabendazole-5-hydroxy15.Lincomycin407.4/126.219.Thiabendazole202.2/175.04.Dimetridazole142.2/96.08.Cimaterol220.0/202.012.Cimbuterol234.0/160.116.Levamisole205.0/178.120.SulfadiazineT/XMSSAL0**—202421.Ritodrine22.Sulfapyridine23.Cefquinome529.2/134.024.Cephalonium459.0/152.025.Sulfathiazole256.0/156.026.Trimethoprim291.1/230.127.Cefalexin28.Ipronidazole-OH29.Clencyclohexerol319.1/203.030.Enoxacin321.0/303.031.Marbofloxacin363.1/72.032.Fleroxacin370.2/326.233.Sulfamerazine265.2/156.134.Clorprenaline214.0/154.135.Norfloxacin320.1/302.036.Hydroxymethylclenbuterol293.0/203.037.Ofloxacin362.2/318.138.Cephradine350.2/176.039.Albendazolesulfoxide282.1/240.040.Pefloxacin334.1/316.141.Ciprofloxacin332.1/288.142.Cefotaxime456.0/167.043.Clenproperol263.1/245.144.Ractopamine302.2/164.145.Sulfamoxole268.0/156.046.Lomefloxacin352.0/265.047.Danofloxacin358.1/340.148.Sulfisomidine279.2/186.049.Enrofloxacin360.0/316.150.Orbifloxacin396.2/352.151.Tulobuterol228.0/154.052.Sulfamonomethoxine53.Sulfamethizole271.0/156.154.Cefazolin455.0/323.255.Sulfamethoxypyridazine281.0/156.056.Clenbuterol277.0/203.057.5-Hydromebendazole298.0/266.058.Sarafloxacin386.0/342.359.Ipronidazole170.3/109.060.Mebendazoleamine238.0/105.061.Sparfloxacin393.0/349.162.Difloxacin400.1/356.163.Pirimycin64.2-Aminoflubenzole65.Sulfameter281.2/156.166.Azithromycin749.5/591.467.Bambuterol368.2/294.168.Brombuterol367.0/293.0T/XMSSAL0**—202469.Oxibendazole250.2/218.270.Sulfachloropyridazine71.Cambendazole303.0/217.072.Oxfendazole316.2/159.073.Mabuterol311.1/237.274.Clindamycin425.3/126.175.Clenpenterol291.0/203.076.Cefoperazone646.2/530.177.Albendazolesulfone298.2/266.278.Dapsone249.2/156.079.Sulfamethoxazole80.Phthalylsulfathiazole404.0/256.081.Sulfadoxine311.2/156.182.Sulfisoxazole83.Tilmicosin869.7/696.484.N-AcetylDapsone291.3/156.285.Mapenterol325.0/237.086.Oxolinicacid262.0/244.187.Oleandomycin688.5/158.188.Sulfabenzamide89.Mebendazole296.3/264.190.Sulfaclozine285.0/156.091.Sulfadimethoxine311.0/156.192.Albendazole266.3/234.093.Sulfaquinoxaline301.0/156.094.Flubendazole314.1/282.095.Sulfaphenazole315.0/158.096.Oxfendazole-sulfone332.0/300.097.Tylosin916.6/174.198.Flumequin262.1/244.199.Penbu