高三生物一轮复习课件微生物的培养技术及应用（第二课时）

第一章第二节微生物的培养技术及应用（第二课时）2019人教版选择性必修三一轮复习课件（1）平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒。（2023·山东卷）（

）（2）利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物。（2023·山东卷）（

）（3）稀释涂布平板法计数时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。（

）（4）测定土壤中细菌的数量，一般选用1×102、1×103、1×104倍数的稀释液进行平板培养。（

）（5）以未接种的培养基为对照组，可判断选择培养基是否具有选择作用。（

）（6）在含有刚果红的培养基上，纤维素分解菌菌落周围会出现抑菌圈。（

）（7）在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果。（

）

×√√×××√课前检测：

人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和pH等），同时抑制或阻止其他微生物的生长。

在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。一、微生物的选择培养和计数（1）原理：1、选择培养基（2）选择培养基的概念：具体处理原理目的选择培养基加入青霉素青霉素能抑制细菌生长，对真菌无作用不加氮源固氮微生物能利用空气中的氮气不加有机碳源自养型微生物能利用无机碳源加高浓度NaCl的培养基金黄色葡萄球菌具有耐高浓度食盐的特性石油是唯一碳源能利用石油的中的碳才能存活分离酵母菌、霉菌等真菌分离固氮菌分离自养微生物分离经黄色葡萄球菌分离能消除石油污染的微生物一、微生物的选择培养和计数（3）选择培养基的类型：具体处理原理目的鉴别培养基加入伊红-亚甲蓝P30生长大肠杆菌菌落呈深紫色，并带有金属光泽加入刚果红P20刚果红与纤维素能形成红色复合物，当纤维素被分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以菌落为中心的透明圈。加入酚红脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→酚红变红鉴别大肠杆菌鉴别纤维素分解菌分解尿素菌分解尿素菌一、微生物的选择培养和计数（4）鉴别培养基的类型：项目选择培养基鉴别培养基原理用途举例图示加入不影响甚至促进目标微生物生长，而抑制或阻止其他种类微生物生长的化学物质加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长)，使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应培养、分离出目标微生物鉴别目标微生物培养酵母菌和霉菌时，可在培养基中加入青霉素，抑制细菌的生长；利用以尿素为唯一氮源的培养基来培养可分解尿素的细菌可用伊红美蓝培养基鉴定饮用水或乳制品中是否含有大肠杆菌(若有，则菌落呈黑色)一、微生物的选择培养和计数（5）比较：牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g蒸馏水定容到1000ml培养基一KH2PO41.4gNaH2PO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0g蒸馏水定容到1000ml培养基二1.从物理性质来讲，两者属于_____培养基，判断依据是_______________；该类培养基的主要用途为_____________________。2.从目的用途上来讲，

属于选择培养基，目的是为了获得

。3.两种培养基共有的培养基成分有：

。固体添加了凝固剂琼脂分离、鉴定、计数、保存培养基二能分解尿素的微生物碳源、氮源、无机盐、水对点训练：①原理②关键恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过计数平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌一、微生物的选择培养和计数2、微生物的选择培养与数量测定（1）原理：稀释涂布平板法

细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大多数分布在距地表3~8cm的土壤层。取样时，一般要铲去表层土。

取样时用的铁铲和取样纸袋在使用前都需要灭菌，操作完整后，一定要洗手。一、微生物的选择培养和计数2、微生物的选择培养与数量测定（2）稀释涂布平板法的操作步骤①土壤取样：

将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。1×101mL1mL1mL1mL1mL1mL1×1021×1031×1041×1051×1061×10710g9mL无菌水90mL无菌水一、微生物的选择培养和计数2、微生物的选择培养与数量测定（2）稀释涂布平板法的操作步骤②样品的稀释：取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。微量移液器一、微生物的选择培养和计数2、微生物的选择培养与数量测定（2）稀释涂布平板法的操作步骤③样品的涂布：（1）待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置（同时放一个未接种的培养基），放入30~37℃的恒温培养箱中培养1~2d。恒温培养箱稀释103倍稀释104倍稀释105倍空白对照问题1：培养时要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养为什么？培养未接种的培养基的作用是对照。一、微生物的选择培养和计数2、微生物的选择培养与数量测定（2）稀释涂布平板法的操作步骤④微生物的培养：2．下面是土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验流程示意图，请分析：(1)测定土壤中细菌的数量，一般选择用多大稀释倍数的稀释液进行涂布？测定土壤中细菌的总量和能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？提示：测定土壤中细菌的数量，一般选择用（

）稀释倍的稀释液进行平板培养。不同，因为土壤中能分解尿素的细菌的数量比细菌的总量要少。1×104、1×105和1×106对点训练：2．下面是土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验流程示意图，请分析：(2)第一次实验可以选择用多大稀释倍数的稀释液进行涂布？第一次实验时为什么要将稀释范围放宽一些？提示：第一次实验时可以将稀释1×103～1×107倍的稀释液分别涂布到平板上进行培养。为了确保（

）。(3)为什么要选取菌落数目稳定时的记录作为结果？提示：尽量缩小统计的菌落数与实际活菌数的差值，因为繁殖慢的菌体刚开始看不出明显的菌落。能从中选出菌落数在30～300之间的平板进行计数对点训练：主要方法稀释涂布平板法平板划线法主要步骤接种工具菌体获取能否用于计数共同点稀释涂布平板法和平板划线法的比较系列梯度稀释操作和涂布平板操作接种环在固体培养基表面连续划线涂布器接种环从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体在具有显著的菌落特征的区域挑取菌体可以计数，但是操作复杂，需涂布多个平板不能计数使培养基上形成由单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落最开始的划线很可能菌类会长成一片，导致无法计数；灼烧接种环的时候也会杀死一部分菌类。(1)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过计数平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。（间接计数法）一、微生物的选择培养和计数2、微生物的选择培养与数量测定（3）利用稀释涂布平板法计数例1：某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234个(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL)，所以每克样品中的细菌数是

个。2.34×1091.（2024·河南省实验中学开学考）土壤中分解尿素的细菌的分离和计数过程如图，相关叙述不正确的是（

）

A．需要配制以尿素为唯一氮源的培养基，从功能上来说这属于选择培养基B．5号试管的结果表明每克土壤中的活菌的菌株数为1.7×108个C．除了用稀释涂布平板法对尿素分解菌计数外，还可以用显微镜直接计数D.若培养高效分解尿素的细菌，可在固体培养基中额外添加酚红进行筛选对点训练：B注意：选择30-300个菌落的平板进行计数；统计的菌落往往比活菌的实际数目低；每个稀释度至少取3个平板取其平均值；（间接计数法）一、微生物的选择培养和计数2、微生物的选择培养与数量测定（3）利用稀释涂布平板法计数重复实验，减少偶然因素对实验结果的影响因为当两个或多个细胞连在一起时，繁殖后形成的还是一个菌落（1）原理：

利用细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。血细胞计数板常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。细菌计数板对细菌等较小的细胞进行观察和计数。一、微生物的选择培养和计数2、微生物的选择培养与数量测定（4）显微镜直接计数法（2）优缺点：①优点：②缺点：快速、直观A.不能区分死菌和活菌→偏大B.不适于对运动细菌的计数。C.个体小的细菌在显微镜下难以观察。一、微生物的选择培养和计数2、微生物的选择培养与数量测定（4）显微镜直接计数法为了避免上述缺点，我们该如何做？可使用台盼蓝，死细胞会被染成蓝色，后再进行显微镜计数，蓝色不能统计在内。一、微生物的选择培养和计数2、微生物的选择培养与数量测定（4）显微镜直接计数法关于微生物纯化和计数的方法（1）常用的接种方法：（2）微生物的计数方法：（3）菌落计数比实际值“偏高”还是“偏低”：平板划线法和稀释涂布平板法稀释涂布平板法和显微镜直接计数法稀释涂布平板法偏低；显微镜直接计数法偏高思考一、微生物的选择培养和计数2、微生物的选择培养与数量测定脲酶尿素中性菌落数目稳定时菌落特征酚红在培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该细菌能够分解尿素一、微生物的选择培养和计数2、微生物的选择培养与数量测定（4）土壤中分解尿素细菌的分离与计数选择性必修3P19“探究·实践”：本活动初步筛选了能分解尿素的细菌，请进一步借助于生物化学的方法来鉴定所分离的菌种：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→酚红变红→脲酶阳性酚红培养基——鉴定分解尿素的细菌脲酶CO（NH2）2+H2O CO2+2NH3一、微生物的选择培养和计数教材链接自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯,然后进行数量的测定。下面是有关土壤中分解尿素的细菌分离和计数的实验过程,请回答有关问题。(1)为分离出土壤中分解尿素的细菌,应该用

的培养基进行分离,这种培养基属于

培养基(按功能分类)。可在培养基中加入指示剂

对该类微生物进行鉴别。(2)若取土样6g,应加入

mL的无菌水配制成稀释10倍土壤溶液。因土壤中细菌密度很大,需要陆续加以稀释,配制成102~107不同浓度的土壤溶液。将103-107倍的稀释液分别吸取0.2mL加入到固体培养基上,用涂布器将菌液铺平,每个稀释度下至少涂布3个平板,这种接种方法称为

。将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培24~48h,观察并统计菌落数,结果如下表,其中

倍的稀释比较合适,由此计算出每克土壤中的菌落数为

。这种方法测定的菌落数往往比活菌的实际数目

(填“低”或“高”)。(3)若研究尿素分解菌的群体生长规律,可采用

法分离土壤中的尿素分解菌。操作时,接种环通过灼烧灭菌,在第二次及以后划线时,总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是对点训练：(1)

以尿素作为唯一氮源

选择

酚红(2)

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稀释涂布平板法

1051.32×108

低(3)平板划线

将聚集的菌体逐步稀释，以便获得由单个细胞形成的菌落对点训练：1.（2024·江苏·高考真题）酵母菌是基因工程中常用的表达系统。下列相关叙述正确的是（

）A．酵母菌培养液使用前要灭活所有细菌，但不能灭活真菌B．酵母菌是真核细胞，需放置在CO2培养箱中进行培养C．可用稀释涂布平板法对酵母菌计数D．该表达系统不能对合成的蛋白质进行加工和修饰培养液使用前要灭活所有细菌和真菌植物、微生物培养时对pH的要求没那么高，在